二苯乙烯苷促进糖尿病大鼠心肌A k t蛋白的表达

董林

江苏省泰兴市人民医院内分泌科，江苏泰兴 225400

二苯乙烯苷促进糖尿病大鼠心肌A k t蛋白的表达

董林

江苏省泰兴市人民医院内分泌科，江苏泰兴 225400

目的 研究二苯乙烯苷治疗糖尿病的作用机制。 方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、二苯乙烯苷低中高剂量组（30、60、120 mg/kg），每组10只。观察大鼠的一般情况，检测空腹血糖，检测心肌Akt蛋白的表达。 结果 与对照组比较，模型组空腹血糖升高，心肌Akt蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05），经过二苯乙烯苷干预后，空腹血糖降低，心肌Akt蛋白表达增高，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 二苯乙烯苷可能通过调节Akt表达治疗糖尿病。

糖尿病；二苯乙烯苷；Akt

糖尿病（DM）和心血管疾病、癌症、呼吸道疾病一起构成四大非传染性疾病。糖尿病心肌病（DCM）属于糖尿病微血管慢性并发症，是导致糖尿病患者死亡的主要原因[1]。目前，常用的DCM造模方法为腹腔注射链脲佐菌素（STZ）[2]。

二苯乙烯苷（TSG）提取于廖科植物何首乌，具有改善内皮依赖性血管舒张、抗氧化、抗炎、神经保护和抗衰老等作用[3]。Akt作为重要的激酶分子，与DCM关系密切[4]。该文旨在探讨TSG防治DCM的作用和机制，为糖尿病防治提供理论基础和实验依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

50只成年雄性SD大鼠[体重（200±20）g，购自南通大学实验动物中心，实验动物许可证号:SYXK9(苏)200220022]随机分为，对照组（10 只）、模型组（10 只）、TSG 低剂量组（TSG-L，10只）、中剂量组（TSG-M，10 只）和高剂量组（TSG-H，10 只）。

1.2 试剂与仪器

STZ （Sigma,美国）；TSG（南通伟康医药研究院）；兔源 Akt抗体 （武汉博士德生物工程有限公司）；Cy3标记山羊抗兔 IgG（海门市碧云天生物技术研究所）；血糖仪（Johnson&Johnson，美国）；Olympus BX51 荧光显微镜（Olympus，日本）。

1.3 造模方法

SD大鼠高能量饮食（20 KJ/g）饲养4周，造模前禁食12 h，腹腔注射STZ 30 mg/kg，一周后测空腹血糖(FBG)≥11.1 mmol/L为造模成功；对照组注射等体积的缓冲液。

1.4 给药方法

对照组和模型组不给予任何治疗；TSG-L组、TSG-M组和TSG-H组，分别给予TSG 30、60和120 mg/kg，共6周。

1.5 观察指标

1.5.1 一般情况 观察并记录各组大鼠的毛色、精神状态、活动、进食、进水和体重等一般情况。

1.5.2 FBG测定 各组大鼠禁食不禁水12 h后尾静脉取血，使用血糖仪检测。

1.5.3 Akt蛋白表达 大鼠处死取心脏，4%多聚甲醛固定48 h，30%蔗糖脱水平衡24 h后切片，5%山羊血清封闭1 h，加入一抗37oC孵育2 h，加入二抗孵育2 h，荧光显微镜观察，绿色荧光为Akt阳性细胞。

1.6 统计方法

2 结果

2.1 一般情况

注射STZ后大鼠出现多食、多饮以及多尿，精神萎靡、毛色暗黄粗糙、活动减少，对外界的刺激反应迟钝，体重下降；对照组生长良好，毛色光亮顺滑，精神状态良好。

2.2 TSG对糖尿病大鼠FBG的影响

5组FBG水平相比，差异有统计学意义（F=12.32,P<0.05），与对照组相比，模型组FBG升高（P<0.05）；与DM组相比，TSGM组和TSG-H组FBG降低 (P<0.05)，见表1。

表1 各组 FBG水平（±s）

表1 各组 FBG水平（±s）

注：*P<0.05,与对照组比较;△P<0.05,与模型组比较。

组别FBG(mmol/L)对照组（n=10）模型组（n=10）TSG-L（n=10）TSG-M（n=10）TSG-H（n=10）FP 4.780.63(14.651.83)*13.911.93(12.661.99)△(11.311.28)△12.32<0.05

2.3 TSG对糖尿病大鼠心肌Akt蛋白表达的影响

5组SD大鼠心肌阳性细胞情况见图1。5组Akt表达量相比，差异有统计学意义（F=9.28,P<0.05），与对照组比较，模型组Akt减少（P<0.05）；与模型组比较，TSG-M组和 TSG-H 组 Akt增加（均 P<0.05），见表 2。

图1 TSG对糖尿病大鼠心肌Akt蛋白表达的影响

表2 TSG对Akt蛋白表达的影响（±s）

表2 TSG对Akt蛋白表达的影响（±s）

注：*P<0.05,与对照组比较;△P<0.05,与模型组比较。

组别心肌Akt表达量对照组（n=10）模型组（n=10）TSG-L（n=10）TSG-M（n=10）TSG-H（n=10）FP 0.93±0.13（0.28±0.07）*0.35±0.10（0.41±0.12）△（0.68±0.16）△9.28<0.05

3 讨论

DCM发病机制包括代谢紊乱、自主神经病变和干细胞等[5]。在DM发病的早期，多种代谢危险因素会引起心脏的氧化应激，诱导心肌成纤维细胞增殖，分泌多种细胞因子，进一步导致心脏收缩和舒张功能的异常[6]。

Akt是心肌存活的重要因子，多数的细胞生存信号途径均与Akt蛋白有关[7]。尿皮素可以保护DM大鼠心肌损伤、减少心肌纤维化程度、降低炎性反应，而上述功能是通过调控Akt/GSK-3β信号通路来实现的[4]。Akt在心肌细胞代谢水平的调控发挥重要作用，其活化能够改善DM对心肌的损害[8]。

研究显示，DM大鼠FBG升高，心肌Akt蛋白表达下降，经TSG干预后，FBG水平下降，心肌Akt蛋白表达增加。提示TSG调节Akt表达可能是治疗DCM的机制。

[1]Sheu J J,Chang L T,Chiang CH,et al.Impact of diabetes on cardiomyocyte apoptosis and connexin43 gap junction integrity:role of pharmacological modulation[J].Int Heart J,2007,48(2):233-245.

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[3]Li C,Cai F,Yang Y,et al.Tetrahydroxystilbene glucoside ameliorates diabetic nephropathy in rats:involvement of SIRT1 and TGF-beta1 pathway[J].Eur J Pharmacol,2010,649(1):382-389.

[4] Liu X,Liu C,Zhang X,et al.Urocortin ameliorates daibetic cardiomyophay in rats via the Akt/GSK-3β signaling pathway[J].Exp Ther Med,2015,9(3):667-674.

[5]Joshi M,Kotha SR,Malireddy S,et al.Conundrum of pathogenesis of diabetic cardiomyopathy:role of vascular endothelial dysfunction,reactive oxygen species,and mitochondria[J].Mol Cell Biochem,2014,386(1-2):233-249.

[6]Gonzalez-Vilchez F,Ayuela J,Ares M,et al.Oxidative stress and fibrosis in incipient myocardial dysfunction in type 2 diabetic patients[J].Int J Cardiol.2005,101(1):53-58.

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[8]Foster L J,Li D,Randhawa V K,et al.Insulin accelerates inter-endosomal GLUT4 traffic via phosphatidylinositol 3-kinase and protein kinase B[J].J Biol Chem,2001,276(47):44212-44221.

R587.2

A

1672-4062（2015）07（a）－0019-02

董林(1974.1-)，男，江苏泰兴人，研究生，副主任医师，主要从事糖尿病临床和基础研究。

2015-04-08）