黄芪皂苷对小鼠化疗贫血模型白介素-2、白介素-4和白介素-6的影响

梁 可 马 进 曲 怡 郑冰元 乔 铁

1.辽宁中医药大学方剂学科，辽宁沈阳110847；2.辽宁中医药大学附属第二医院，辽宁沈阳110034

黄芪皂苷对小鼠化疗贫血模型白介素-2、白介素-4和白介素-6的影响

梁 可1马 进2曲 怡1郑冰元1乔 铁1

1.辽宁中医药大学方剂学科，辽宁沈阳110847；2.辽宁中医药大学附属第二医院，辽宁沈阳110034

目的考察黄芪皂苷对化疗贫血模型小鼠血清中白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）和白介素-6（IL-6）的影响。方法选取6～7周龄昆明种小鼠64只，随机分为空白组、模型组、阳性对照组和给药组，每组16只，雌雄各半。采用环磷酰胺建立化疗贫血模型，空白组正常饲养，不予特殊处理。模型组、阳性对照组和给药组分别于1、3、5 d按0.2 g/kg体重剂量腹腔注射环磷酰胺。于造模第7天灌胃给药，空白组、模型组均按10mL/kg体重胃饲蒸馏水；阳性对照组按5mL/kg体重胃饲黄芪精混悬液；给药组按10 mL/kg体重胃饲黄芪皂苷溶液，灌胃治疗14 d后，摘眼球取血。利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量。结果与空白组IL-2［（911.5±157.6）ng/L］、IL-4［（711.4±119.8）ng/L］、IL-6［（193.3±71.0）ng/L］含量比较，模型组IL-2［（245.0±104.3）ng/L］、IL-4［（124.3±54.9）ng/L］含量明显下降，IL-6［（1245.7±254.5）ng/L］含量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，给药组IL-2［（640.8±192.8）ng/L］、IL-4［（574.0±112.4）ng/L］含量明显升高，IL-6［（521.5±203.8）ng/L］含量明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论黄芪皂苷能提高化疗贫血模型小鼠血清中IL-2、IL-4的含量，降低IL-6的含量。IL-2、IL-4、IL-6与环磷酰胺引起的免疫失调和造血功能抑制有关；黄芪皂苷能够改善环磷酰胺所致的小鼠免疫力低下和骨髓抑制情况。

黄芪皂苷；化疗贫血；白介素-2；白介素-4；白介素-6

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血之功效，能增强人体免疫系统功能，改善机体骨髓造血功能［1］。黄芪中皂苷类、黄酮类、多糖类为黄芪主要活性成分，而对其改善免疫和骨髓抑制作用，研究多集中于黄芪多糖，对黄芪皂苷的报道较少［2-3］。本实验主要通过建立小鼠化疗贫血模型，考察黄芪皂苷对小鼠血清细胞因子白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）的影响，从而对黄芪皂苷调节免疫功能、改善造血功能进行初步研究，为临床应用中药减轻化疗药毒副作用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级昆明种小鼠64只，6～7周龄，雌雄各半，平均体重（20±2）g，购于辽宁中医药大学实验动物中心。

1.2 药物

黄芪皂苷（成都曼斯特生物科技有限公司，Astragaloside UV≥98%，批号：MUST-13100901），环磷酰胺注射液（山西德普药业股份有限公司，批号：04130904），黄芪精（扬子江药业集团有限公司，批号：13121322）。

1.3 主要仪器与试剂

IL-2、IL-4、IL-6酶联免疫吸附测定（ELISA）检测试剂盒购于联科生物技术有限公司。Multiskan FC型酶标仪（Thermo Fisher公司），微量冷冻离心机（Thermo Fisher公司）。

1.4 方法

将64只昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和给药组，每组16只，雌雄各半。空白组：正常饲养，不予特殊处理。模型组、阳性对照组和给药组分别于1、3、5 d按0.2 g/kg体重剂量腹腔注射环磷酰胺。于造模第7天灌胃给药，空白组、模型组均按10mL/kg体重胃饲蒸馏水；阳性对照组按5mL/kg体重胃饲黄芪精混悬液；给药组按10 mL/kg体重胃饲黄芪皂苷溶液，连续灌胃14 d。于末次给药后24 h，摘眼球取血，检测相应指标。

1.5 检测指标

采用ELISA法检测小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6含量。

1.6 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差齐性检验，方差分析采用One-Way ANOVA分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 黄芪皂苷对化疗性贫血模型小鼠血清中IL-2、IL-4含量的影响

与空白组比较，其余各组IL-2、IL-4含量明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，给药组和阳性对照组IL-2、IL-4含量均明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与阳性对照组比较，给药组IL-2、IL-4含量明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），提示黄芪皂苷在提高IL-2、IL-4含量作用方面优于黄芪精。见表1。

表1 黄芪皂苷对化疗性贫血模型小鼠血清中白介素-2、白介素-4含量的影响（ng/L，±s）

表1 黄芪皂苷对化疗性贫血模型小鼠血清中白介素-2、白介素-4含量的影响（ng/L，±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05；与阳性对照组比较，△P＜0.05

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2.2 黄芪皂苷对化疗性贫血模型小鼠血清中IL-6含量的影响

与空白组比较，其余各组IL-6含量均显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，给药组和阳性对照组IL-6含量均降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与阳性对照组比较，给药组IL-6含量明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），提示黄芪皂苷在降低IL-6含量作用方面优于黄芪精。见表2。

表2 黄芪皂苷对化疗性贫血模型小鼠血清中白介素-6含量的影响（ng/L，±s）

表2 黄芪皂苷对化疗性贫血模型小鼠血清中白介素-6含量的影响（ng/L，±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05；与阳性对照组比较，△P＜0.05

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3 讨论

环磷酰胺为临床常用的广谱抗肿瘤药物，但在杀伤和抑制肿瘤细胞的同时，对骨髓造血细胞产生强烈的抑制作用，同时还会导致免疫力下降等问题，不利于机体的继续治疗与术后的恢复［4］。黄芪中皂苷类成分主要有黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪皂苷Ⅳ等，具有改善机体免疫、增强造血功能、抗肿瘤等药理作用，还能减轻化疗药物引起的不良反应。研究表明，黄芪皂苷能提高机体的特异及非特异性免疫功能，促进免疫细胞因子的产生，并且能显著抑制肿瘤生长，是一种免疫调节剂［5］。黄芪皂苷对小鼠T、B淋巴细胞增殖与产生IL-2均有明显的促进作用，显示出较强的细胞免疫和体液免疫调节作用［6-9］。白介素（interleukin，IL）是在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子，属于免疫调节因子，主要由激活淋巴细胞分泌，作为免疫系统的细胞因子信使发挥作用。同时，IL还和血细胞生长因子相互协调，相互作用，共同完成造血功能。IL-2、IL-4、IL-6在调节机体免疫，刺激骨髓细胞增殖和分化等方面发挥不同作用。

IL-2是细胞免疫应答所必需的细胞因子，参与调节机体抗肿瘤效应和移植排斥反应。IL-2能刺激活化T细胞和B细胞的生长和分化，刺激NK细胞产生和分泌大量、多样的细胞因子，这些细胞在机体的免疫监视方面至关重要，所以，IL-2是保障机体正常免疫调节功能的关键物质［10-11］。IL-4能刺激胸腺细胞和T淋巴细胞增殖，可促进B细胞增殖、成熟及分化产生IgE，从而促进体液免疫应答，被认为是介导体液免疫应答的主要因子之一。IL-4还能刺激肥大细胞、巨噬细胞和巨核细胞等造血细胞的生长，并能协同红细胞生成素（EPO）支持红系祖细胞的生长发育［12］。本实验中模型组小鼠血清中IL-2、IL-4浓度显著下降，与文献报道一致［13-14］，表明IL-2、IL-4参与环磷酰胺所致的免疫抑制过程。与模型组比较，给药组的IL-2、IL-4含量明显提高，提示黄芪皂苷在上调IL-2、IL-4方面具有较好的作用，对机体低下的细胞免疫具有一定的恢复作用。

IL-6是一种主要由免疫活性细胞分泌的多功能因子，不仅具有免疫调节及抗肿瘤作用，且能促进细胞的增殖分化，加速血小板的再生，具有显著的造血调控作用。有研究表明外周血IL-6的水平与造血功能成负相关，当造血功能出现问题，机体代偿性分泌IL-6以促进造血［15-16］。因此血清IL-6的水平可以在一定程度上反映骨髓造血功能。本实验中模型组小鼠IL-6升高，推测是由于环磷酰胺引起的造血功能损伤。与模型组比较，给药组IL-6含量明显降低，说明黄芪皂苷具有降低IL-6含量的作用，表明黄芪皂苷可以保护化疗导致的骨髓造血功能损伤，促进造血功能的恢复，增强其对造血因子的调控。

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Effect of astragaloside on interleukin-2,interleukin-4 and interleukin-6 in chem otherapy induced anem icm ice

LIANG Ke1MA Jin2QU Yi1ZHENG Bingyuan1QIAO Tie1
1.Department of Prescription,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Shenyang 110847,China;2.The Second Hospital Affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Shenyang 110034,China

Ob jective To observe the effect of astragaloside on interleukin-2(IL-2),interleukin-4(IL-4)and interleukin-6(IL-6)in chemotherapy induced anemic mice.M ethods 64 Kunmingmice which were 6-7 weeks old were picked as the research objects and random ly divided into four groups:normal group,model group,positive control group and treated group.Each group was 16 mice,halfmale and half female.Chemotherapy anemiamodelswere established by Cyclophosphamide.Normal group was fed without special treatment.Model group,positive control group and treated group were given 0.2 g/kg of Cyclophosphamide by intraperitoneal injection in 1,3,5 d,respectively.In 7 d,normal group and model group received 10 mL/kg of distilled water by intragastric administration;positive control group was fed 5 mL/kg of Huangqijing suspension;treated group was given 10 mL/kg of astragaloside solution.The mice were drawn blood from eyeball after 14 days treatment.The ELISA was used to test the concentrations of IL-2,IL-4 and IL-6 in mouse serum.Results Compared with the contents of IL-2［(911.5±157.6)ng/L］,IL-4［(711.4± 119.8)ng/L］and IL-6［(193.3±71.0)ng/L］of normal group,the concentrations of IL-2［(245.0±104.3)ng/L］, IL-4［(124.3±54.9)ng/L］inmodel group were significantly lower,and the concentration of IL-6［(1245.7± 254.5)ng/L］was evidently higher,the differenceswerestatistically significant(P＜0.05).Compared with model group,the contents of IL-2［(640.8±192.8)ng/L］,IL-4［(574.0±112.4)ng/L］were increased significantly,and the content of IL-6［(521.5±203.8)ng/L］in treated group was obviously decreased,with statistically significant differences(P＜0.05).Conclusion Astragaloside can increase the concentrations of IL-2 and IL-4,decrease the content of IL-6 in anemia modelmice induced by chemotherapy.The changes in the contents of IL-2,IL-4 and IL-6 are associated with immune disorders and hematopoietic depression caused by Cyclophosphamide-induced anemia.Astragaloside can improve mouse low immunity and myelosuppression induced by Cyclophosphamide.

Astragaloside;Chemotherapy-induced anemia;Interleukin-2;Interleukin-4;Interleukin-6

R285.5

A[文献标识码]1673-7210（2015）06（c）-0016-03

2015-03-01本文编辑：张瑜杰）

辽宁省科学技术计划项目（博士启动基金计划）（20111129）；辽宁省高等学校杰出青年学者成长计划项目（LJQ2014098）。

梁可（1986-），女，硕士，从事中药复方配伍规律及其效应机制研究。

乔铁（1976-），男，医学博士，副教授，主要从事方剂配伍规律研究。