益气化瘀方抗炎止血镇痛作用的药效学研究

曾 晶 李子奎 王 乐

（湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙410007）

益气化瘀方抗炎止血镇痛作用的药效学研究

曾 晶 李子奎 王 乐

（湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙410007）

目的：研究益气化瘀方抗炎、止血、镇痛作用。方法：通过二甲苯致小鼠耳肿胀模型、小鼠凝血与断尾止血模型、小鼠热板模型与醋酸致小鼠扭体模型，评价益气化瘀方镇痛、止血、抗炎的药效学作用。结果：与空白组比较，益气化瘀方各剂量均能明显降低二甲苯致炎小鼠的耳肿胀度（P＜0.05），能明显缩短小鼠凝血时间（P＜0.01）和出血时间（P＜0.01），明显减少小鼠扭体次数（P＜0.01），显著抑制小鼠出现的疼痛反应（P＜0.05）。益气化瘀方抗炎作用与阿司匹林相似（P＞0.05）；益气化瘀方中、高剂量止血作用与氨基己酸、三七粉相当（P＞0.05）；益气化瘀方镇痛作用和阿司匹林比较仍有显著差异（P＜0.05）。结论：益气化瘀方具有较好的抗炎、止血、镇痛作用。

益气化瘀方 耳郭肿胀度 凝血时间 出血时间 扭体次数 痛阈 小鼠

产后子宫内膜慢性炎症可能是导致产后复旧不全的主要原因[2]。益气化瘀方是第四批全国老中医药专家学术经验继承工作指导老师尤昭玲教授临床治疗子宫复旧不全的常用有效方。临床研究显示，益气化瘀方对产后子宫复旧不全表现为产后腹痛、产后恶露不绝、产后身痛等疗效显著[3]。结合产后多虚多瘀的病机特点，本研究拟从抗炎、止血、镇痛药效作用三个方面，探讨益气化瘀方的作用效果，为益气化瘀方的进一步开发利用提供理论依据，现将结果报道如下。

1 实验材料

1.1 实验动物 BALB/C清洁级小鼠，雌雄兼备，体重18～22g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。许可证号:SCXK（湘）2011-0003，饲养于SPF实验室。

1.2 实验药物 益气化瘀方（党参8g，蒲黄5g，黄芪5g，马鞭草5g，鹿衔草8g，茜草5g，狗脊5g，续断5g，乌药5g，甘草1g），临床用量为52g/d，湖南中医药大学药学院提供，制备成浓度为4.43g（生药）/g的浸膏，批号20140514。实验用药大、中、小剂量组含原药材量分别为 6.76g/kg、13.52g/kg、27.04g/kg，实验当日用白开水配制。阿司匹林肠溶片，非甾体抗炎药，可用于镇痛解热、抗炎，选其为镇痛、抗炎试验的阳性对照药，临床用量4g/d，湖南湘药制药有限公司生产，批号:20130923。氨基己酸，具有止血作用，选其为凝血试验、断尾止血试验的阳性对照药，临床用量6g/d，湖南制药厂生产，批号:000908-2。三七粉，具有止血、散瘀、定痛作用，选其为凝血试验、断尾止血试验的中药阳性对照药，湖南省医药公司生产，批号:20130709。

1.3 主要试剂 己烯雌酚注射液，2mg/mL，上海第九制药厂生产，批号:00089777；醋酸，500mL，广东汕头市西陇化工厂生产，批号:0701291；二甲苯，国药集体化学试剂有限公司生产，批号:F20090218。

1.4 主要仪器 梅特勒托利多十万分之一电子天平AG205；湘仪天平仪器厂TP100型动物天平；上海星钻秒表有限公司机械秒表；安徽正华生物仪器ZH-YLS-6B智能热板仪。

2 实验方法

2.1 凝血实验 采用毛细玻管法。取BALB/C清洁级小鼠72只，雌雄各半，依据体重编号，按性别、体重分层，再用随机数字表法随机分成6组，即空白组（等体积生理盐水）、氨基己酸组（0.78g/kg）、三七粉组（1.04g/kg）和益气化瘀方低、中、高剂量组。每日灌胃给药1次，灌胃体积为8mL/（kg·d），连续给药3d。最后一次给药后2h用直径1mm的玻璃毛细管内眦后静脉丛取血，毛细玻管内血栓至少大于5cm。每间隔30s折断一段毛细玻管，观察有无血凝丝出现。计算从毛细玻管采血到出现血凝丝的时间（s），即为凝血时间，比较各组间的凝血时间。

2.2 断尾止血实验 采用小鼠断尾法。取BALB/C清洁级小鼠72只，雌雄各半，依据体重编号，按性别、体重分层，再用随机排列表法随机分成6组，即空白组（等体积生理盐水）、氨基己酸组（0.78g/kg）、三七粉组（1.04g/kg）和益气化瘀方低、中、高剂量组。每日灌胃给药1次，灌胃体积为8mL/（kg·d），连续给药3d。最后一次给药后30min，距小鼠尾尖0.5cm处横断尾部，自血液自动流出后计时，间隔15s用滤纸吸去血滴，直至血流自然停止，计算出血时间，并进行组间比较。

2.3 扭体镇痛实验 BALB/C清洁级小鼠60只，雌雄各半，依据称重编号，按性别、体重分层，再用随机排列表法随机分成5组，每组12只，即空白组（等体积生理盐水）、阿司匹林组（0.195g/kg）和益气化瘀方 低、中、高剂量组。每日灌胃给药1次，灌胃体积为8mL/（kg·d），连续给药3d。最后一次给药后30min，腹腔注射0.3%醋酸0.2mL/只，观察30min内各组动物醋酸引起的扭体次数和镇痛百分率（%）。镇痛百分率 （%）=（空白组扭体次数-用药组扭体次数）/空白组扭体次数×100%。

2.4 热板镇痛实验 清洁级BALB/C雌性小鼠60只，体重18～22g，依据体重编号，随机分成5组，每组12只，即空白组（等体积生理盐水）、阿司匹林组（0.195g/kg）和益气化瘀方低、中、高剂量组。每日灌胃给药1次，灌胃体积为8mL/（kg·d），连续给药3d。第3次给药后30、90、120min时测定痛阈值，超过60s仍无反应者以痛阈值为60s计算，并计算痛阈提高百分率。痛阈提高百分率（%）=（用药后痛阈值-用药前痛阈值）/用药前痛阈值×100%。痛阈值测定方法:智能热板仪温度控制在（55±0.5）℃，于室温下每次放入1只小鼠，用秒表记录小鼠自放入至出现舔后足的时间（s）作为该鼠的痛阈值，间隔30min复测1次，2次平均值为痛阈值（给药前痛阈均值不超过30s者为合格）。

2.5 对二甲苯所致小鼠耳肿抑肿实验 清洁级BALB/C小鼠50只，雌雄各半，依据体重分层，随机分成空白组（等体积生理盐水）、阿司匹林组（0.195g/kg）和益气化瘀方低、中、高剂量组。各组小鼠每日灌胃给药1次，灌胃体积为8mL/（kg·d），连续给药3d。最后一次给药后30min，将二甲苯棉球接触小鼠右耳5s，15min后处死动物。用6mm打孔器沿左右耳郭相同部位打孔取材，分别用AG205电子天平称重，以两耳片重量差值作为肿胀程度指标，比较药物组与对照组间的差异，并求出抑肿率。抑肿率（%）=（对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/对照组平均肿胀度×100%。

2.6 统计学方法 分析数据使用SPSS18.0统计软件包。计量资料用（±s）表示，符合正态性和方差齐性用单因素方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 各组小鼠凝血、出血时间比较 与空白组比较，益气化瘀方低、中、高剂量组小鼠凝血时间明显缩短（P＜0.01），其作用随剂量的增加而增强。与氨基己酸比较，益气化瘀方中、高剂量凝血作用与之相似（P＞0.05）。说明益气化瘀方的止血效果明显。与空白组比较，益气化瘀方各剂量组出血时间明显缩短（P＜0.01），低剂量作用次于氨基己酸（P＜0.05），中、高剂量作用与氨基己酸、三七粉相似，差异无统计学意义。说明益气化瘀的止血效果明显。见表1。

表1 各组小鼠凝血、出血时间比较（±s）

表1 各组小鼠凝血、出血时间比较（±s）

注：与空白组比较，△△P＜0.01；与氨基己酸组比较，▲P＜0.05。

组别 动物数（只）剂量（g/kg） 凝血时间（s） 出血时间（s）空白组12222.50±39.34 236.83±36.20氨基己酸组 12 0.78 172.50±36.46△△169.25±33.406△△三七粉组 12 1.04 155.00±45.83△△172.43±42.43△△益气化瘀方低剂量组 12 1.54 175.00±44.00△△▲202.33±34.34△△▲益气化瘀方中剂量组 12 4.62 147.50±45.15△△187.25±36.53△△益气化瘀方高剂量组 12 13.86 132.50±32.51△△174.92±45.75△△

3.2 各组小鼠痛阈改变情况比较 与空白组比较，益气化瘀方低、中、高剂量组小鼠扭体次数明显减少（P＜0.01），其作用随剂量的增加而加强。益气化瘀方镇痛作用明显低于阿司匹林（P＜0.05）。见表2。

表2 各组小鼠痛阈改变情况比较（±s）

表2 各组小鼠痛阈改变情况比较（±s）

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与阿司匹林组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

组别 动物数（只）剂量（g/kg）给药前痛阈（s）痛阈及提高百分率45min 90min 120min空白组 1021.1±3.00痛阈（s） 痛阈提高百分率（%） 痛阈（s）21.8±4.02 22.2±5.49痛阈提高百分率（%） 痛阈（s） 痛阈提高百分率（%）24.0±4.74阿司匹林组 10益气化瘀方低剂量组 10 6.76 21.2±2.56 28.0±8.01△▲32.08 28.5±6.02△▲34.43 30.0±5.87△▲▲41.51益气化瘀方中剂量组 10 13.52 21.15±2.54 27.7±6.80△▲30.97 29.0±7.90△▲37.16 30.8±7.97△▲45.63益气化瘀方高剂量组 10 27.04 20.85±2.76 29.2±4.64△△▲40.05 34.5±7.29△△▲65.47 33.3±6.20△△▲59.71 0.195 20.3±2.9435.6±7.86△△75.37 37.1±8.41△△82.76 40.6±8.90△△100.00

3.3 各组小鼠扭体次数与镇痛百分率比较 腹腔注射醋酸后可引起小鼠腹腔疼痛，出现扭体反应。给药后各组均能显著抑制小鼠出现的疼痛反应，和空白组比较差异显著（P＜0.05，P＜0.01）。益气化瘀方各剂量镇痛作用与阿司匹林比较仍有显著性差异（P＜0.05，P＜0.01）。说明益气化瘀方有良好的镇痛作用，但其作用有限，次于阿司匹林。见表3。

表3 各组小鼠扭体次数与镇痛百分率比较（±s）

表3 各组小鼠扭体次数与镇痛百分率比较（±s）

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与阿司匹林组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

剂量（g/kg）组别 动物数（只）扭体法扭体次数 镇痛率（%）空白组 12 35.08±5.316阿司匹林组 12 0.195 20.75±5.429△△40.85益气化瘀方低剂量组 12 6.76 30.33±4.539△▲▲13.54▲▲益气化瘀方中剂量组 12 13.52 26.67±6.919△△▲▲23.97▲益气化瘀方高剂量组 12 27.04 25.25±7.899△△▲24.68▲

3.4 各组小鼠耳肿胀度比较 空白组小鼠右耳较左耳明显红肿，厚度增加。各给药组小鼠右耳变化不明显，动物两侧耳片差异明显低于空白组两侧耳片差异（P＜0.05）。表明益气化瘀方各剂量与阿司匹林均有较好的抑制炎症作用，益气化瘀方高剂量与阿司匹林抑肿作用比较，无统计学差异。见表4。

表4 各组小鼠耳肿胀程度比较（±s）

表4 各组小鼠耳肿胀程度比较（±s）

注：与空白组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与阿司匹林组比较，▲P＜0.05。

组别 动物数剂量（g/kg）右耳重（mg）左耳重（mg）肿胀度（mg）空白组10抑肿率（%）13.86±2.4825.58±4.83 11.72±4.09—0.195 13.22±2.08 18.72±2.72 5.50±1.92△△益气化瘀方低剂量组 10 4.29 13.39±4.13 22.35±4.48 8.86±2.01△24.38▲益气化瘀方中剂量组 10 12.87 13.07±1.89 21.65±2.47 8.58±2.74△△26.77▲益气化瘀方高剂量组 10 38.61 13.40±2.42 19.50±2.13 6.10±1.77△△47.90阿司匹林组 10 53.09

4 讨论

产时用力耗气，元气损伤，瘀血内阻，产后病机多虚多瘀，气虚血瘀为产后病发生的首要病机。产后瘀血不去，新血难生，瘀阻胞中，导致恶露淋漓不尽，“不通则痛”；或气虚不能统摄血液，失血过多，胞宫胞脉失养，“不荣则痛”。产后子宫复旧不全临床以虚、血、痛为主要表现，益气化瘀为首要治疗大法。益气化瘀方由党参、黄芪、蒲黄炭等10味药物组成，能益气止血、化瘀止痛，临床主要用于人流、药流后或产后气虚血瘀所致的子宫复旧不全，表现为阴道出血淋漓不断、腹痛等。现代医学认为，产后子宫内膜炎症是导致产后子宫复旧不全的主要原因。治疗时首先是止血、加强宫缩、抗炎镇痛，其次为增强机体自身的机能状态。益气化瘀方临床疗效确切，我们推测益气化瘀方具有促进子宫内膜修复，止血、抗炎、镇痛作用，故通过本研究予以证实。

益气化瘀方以党参、蒲黄为君药，党参补中益气，生津和胃，补气“无刚燥之弊”；蒲黄凉血止血，活血消瘀，性平则无寒热，止血而不留瘀。二药合用，补而不滞，行而能止，共奏益气化瘀之功。黄芪、马鞭草、茜草为臣。黄芪大补元气，扶正固本；马鞭草活血散瘀，清热解毒，利水消肿；茜草既能凉血止血，又能活血行血，祛瘀生新。狗脊、鹿衔草、续断、台乌药为佐。狗脊补肝肾，强腰膝，温补固摄；鹿衔草补肝肾、强筋骨，能收敛止血；续断补肝肾，强筋骨，续折伤，止崩漏。三药合用，既可补肝肾强筋骨，又可续伤止血。加入台乌药通理上下诸气，治疗少腹疼痛。

二甲苯是一种化学致炎剂，通过炎症介质的释放，增加毛细血管的通透性和炎症细胞的浸润，造成耳部急性渗出性炎性水肿[4]。益气化瘀方能减轻二甲苯引起的小鼠耳肿胀，具有较好的抗炎作用。结合药理学研究提示:方中蒲黄炭、黄芪、马鞭草、茜草、鹿衔草、乌药具有抗炎作用。其中蒲黄炭改善微循环，通过促进重吸收和降低毛细血管的通透性达到抗炎目的，同时能促进血液凝固[5]。黄芪能提升机体免疫功能，增加白细胞，增强中性粒及巨噬细胞的吞噬和杀菌能力[6]。马鞭草具有消炎止痛作用[7]。茜草具有抗菌作用[8]。鹿衔草能抗菌，促进免疫功能。乌药抗菌、镇痛消炎[9]。

血液凝固在人体止血机制中起重要作用，活血化瘀中药具有扩血管，降低血液黏度，激活凝血系统，改善微循环的作用[10]。益气化瘀方中党参、马鞭草、续断、茜草、狗脊均具有止血作用。其中党参能提高机体免疫功能，改善血管壁功能抑制血小板聚集和黏附，改善血液流变学，增加血液流速，防止血栓形成[11]。马鞭草、茜草促进泌乳，提高子宫平滑肌兴奋性，促进子宫缩复止血[7-8]。续断能止血、镇痛。狗脊对组织损伤出血有肯定的快速止血作用[12]。

筛选镇痛药的常用致痛方法概括有物理法（热刺激小鼠足部产生痛反应）和化学法（化学物质腹腔注射，刺激腹膜引起持久的疼痛反应）。益气化瘀方能抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应，提高小鼠的耐热能力，具有较好的镇痛作用。我们推测，药物可能通过抗炎，抑制炎症细胞浸润达到镇痛作用。

本研究结果表明，益气化瘀方确实具有一定的抗炎、止血、镇痛作用，然而作为中药复方成分，进一步明确其有效成分，将其推广应用是我们今后研究的重点。

[1] 刘琼英，陈乐群，李红.中西医结合疗法对产后并发子宫内膜炎产妇炎症因子的影响.实用临床医药杂志，2013，17（13）：134

[2] 张秀贤，田洁，彭菲.益母草对产后子宫内膜炎大鼠内膜止血修复的实验研究.河北医药，2013，35（7）：1023

[3] 曾晶，尤昭玲.中西医结合防治产后子宫复旧不全的研究进展.湖南中医杂志，2010，26（1）：113

[4] 陈正爱，曲香芝，尹大维，等.不同炮制方法的淫羊藿对小鼠抗炎作用的影响.时珍国医国药，2006，17（1）：48

[5] 李芳，孔祥鹏，陈佩东，等.蒲黄炭对血瘀大鼠血液流变性、凝血时间及舌象体征的影响.中国实验方剂学杂志，2011，17（16）：154

[6] 汪文女.黄芪的药理作用研究进展.健康大视野，2014，22（6）：480

[7] 郭琳，苗明三.马鞭草化学、药理及临床应用探讨.中医学报，2014，29（9）：1345

[8] 王静，王晋，高荣，等.茜草提取方法及其活性成分的药理作用研究.疾病监测与控制杂志，2012，6（4）：225

[9] 陈方亮，余翠琴.乌药的药理研究概况.海峡药学，2011，23（12）：44

[10] 贺卫和，王志琪，蒋孟良，等.胶艾汤止血机制的实验研究.世界中西医结合杂志，2012，7（12）：1032

[11] 杨耀强.中药党参炮制原理与药理作用的研究.健康学报.医学版，2014，19（8）：150

[12] 索天娇，韩蕾，贾天柱.狗脊生、制品正丁醇提取物药效学实验研究.辽宁中医药大学学报，2012，14（10）：35

R289.53

A

1672-397X（2015）03-0074-04分娩后，宫颈外口如袖口状未完全闭合，胎盘剥离面开放，子宫内膜创面尚未修复，此时病原体容易逆行感染导致子宫内膜炎，影响子宫复旧，表现为产后反复发作盆腹腔疼痛、子宫出血淋漓不断[1]。

曾晶（1982-），女，博士，主治医师，研究方向：中西医结合治疗妇产科月经病、产后病。841825639@qq.com

2014-12-27

编辑：吴 宁

国家自然科学青年基金项目（81202848）；湖南省自然科学基金项目（14JJ3121）