非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其与临床病理特征的关系

丁毅+张海萍+钟山+付莉+白冬雨+张海芳

[摘要] 目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及其与临床病理的关系。方法 对2010年1月—2014年1月来该院诊治的159份非小细胞肺癌手术切除标本进行分析，实验中采用基因测序方法对标本中的EGFR基因突变情况进行检测，分析其与临床病理的关系。结果 159例样本中，EGFR基因突变检出率12.6%（20/159），突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。女性患者基因突变检出率明显高于男性患者（P﹤0.01）。腺癌及细支气管肺泡癌患者基因突变检出率明显高于其他组织学分型（P﹤0.01）。高分化患者基因突变检出率高于中-低分化检出率（P<0.05）。EGFR基因突变与年龄及淋巴结转移与否无关（P>0.05）。 结论 非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与性别、组织学分型及分化程度密切相关。

[关键词] 肺肿瘤；非小细胞肺癌；表皮生长因子受体；基因突变

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）10（a）-0009-03

相关研究表明，表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）在43%～89%的非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中表达上调，参与细胞增殖、血管生成、抵抗凋亡和肿瘤侵袭，在肿瘤形成和介导瘤细胞的生物行为上发挥着重要作用，是目前NSCLC治疗的重要靶点之一[1]。该研究就此主要研究非小细胞肺癌EGFR基因突变情况及其与临床病理的关系，旨在为临床治疗提供靶点依据，现对2010年1月—2014年1月间来该院诊治的159份非小细胞肺癌手术切除标本进行分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取厦门大学附属第一医院病理科收集的159份NSCLC手术切除标本为研究对象，术前都未接受放化疗治疗。其中男性117例，女性42例，年龄范围36～78岁，平均59岁，中位年龄61岁。按中位年龄分两组（4例无年龄纪录）：≤60岁 77例，>60岁 78例。组织学分型：腺癌63例，细支气管肺泡癌16例，非腺癌80例（包括鳞癌53例、腺鳞癌10例、大细胞癌11例、黏液表皮样癌2例、肉瘤样癌4例）。

1.2 方法

①DNA提取。取蜡块肿瘤组织切片，厚度为5～6 μm，5～10片，保存在无菌专业管（1.5 mL）中。把二甲苯脱蜡（鞍山市华昊化工厂）、乙醇洗脱二甲苯（青岛新锐化学有限公司）（均由厦门大学附属第一医院专业医师配置）加入管中，随后将其晾干。再向每一根管中加入300 μL的裂解液及30 μL的蛋白酶K，水浴（55 ℃）3 h。100℃下灭活蛋白酶K5至10 min。然后每一根管中加入120 μL的饱和氯化钠，均匀振荡20 s，离心处上清，之后加入双倍体积的乙醇（无水），零下20 ℃沉淀2 h。4 ℃离心20 min，速度为12 000 r/min，弃上清；加入一定量的乙醇（80%，冷），离心，真空抽干。最后利用紫外分光光度仪测量并保持样本DNA纯度为1.7～2.0之间。②PCR扩增。PCR反应条件：仪器设备为PCR扩增仪（美国ABI-2700型），先95 ℃预变性，退火1 min，延伸1 min，循环10次，变性50 s，再分别退火、延伸1 min，循环30次，72摄氏度延伸10 min。回收并利用DNA纯化试剂盒测量PCR产物凝胶电泳特异性条带。③测序。运行PCR程序，利用乙醇纯化产物，用测序仪（美国ABI3730型）测序纯化后的产物。所得结果与基因库EGFR基因序列核对，所有病例均经正向及反向测序。

1.3 统计方法

应用SPSS16.0统计学软件对EGFR基因突变检测数据进行分析，计数资料用率表示，采用χ2检验。

2 结果

2.1 EGFR基因突变情况分析

159例NSCLC组织标本中EGFR基因突变20例（12.6%），突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变（90.5%），其中20号外显子S768I、21号外显子L861Q突变同在1例（0.6%）。见表1。

2.2 EGFR基因突变与临床病理关系分析

在159例NSCLC患者中，女性患者EGFR基因突变率（31.0%，13/42）高于男性患者（6.0%，7/117），两者差异有统计学意义（χ2=17.52，P<0.01）。腺癌和细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变率（19%，12/63和37.5%，6/16）高于非腺癌患者（2.5%，2/80），差异有统计学意义（χ2=21.38，P<0.01）；细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变率（37.5%，6/16）高于腺癌患者（19%，12/63），但两者差异无统计学意义（χ2=10.93，P>0.05）。高分化患者EGFR基因突变率（30.0%，6/20）高于中-低分化患者（10.1%，14/139），两者差异有统计学意义（χ2=6.31，P<0.05）。EGFR基因突变率与年龄及淋巴结转移与否无关，差异无统计学意义（χ2=0.72，P>0.05）。见表2。

3 讨论

肺癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤之一，其中约80%是非小细胞肺癌，尽管随着手术、放化疗等治疗手段的发展，肺癌的治疗效果得到显著提升，但目前肺癌的预后仍然很差，患者的5年生存率仅约15%[2]。目前，以吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼为代表的针对受体酪氨酸激酶家族中表皮生长因子受体（EGFR）的靶向药物的研发及临床应用给NSCLC治疗带来了新的曙光[3-5]。EGFR是原癌基因的表达产物，具有酪氨酸激酶活性。相关文献表明EGFR能和细胞外配体结合形成二聚体，通过刺激酪氨酸激酶活性让二聚体出现自身磷酸化，让信号转移到细胞内引发级联反应[6]。一旦EGFR基因突变，会直接参与到肿瘤细胞增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及凋亡抑制等过程中。EGFR酪氨酸激酶抑制剂可通过对肿瘤细胞EGFR的特异性结合阻断细胞信号通路，抑制肿瘤细胞增殖并促其凋亡。

文献报道[7-8]，不同人种之间EGFR基因突变率存在差异，东亚人群EGFR基因突变率约30%，高加索人群约10%。中国NSCLC患者EGFR基因总突变率约28.7%。该组福建地区159份非小细胞肺癌组织标本中EGFR基因突变检出率为12.6%，较国内平均数据低，可能与检测方法及不同的人群和地域有关，还需进一步扩大样本量进一步验证[9-10]。

该研究发现EGFR基因突变表现在外显子18～21，其中以19外显子缺失、21外显子点突变为主，在EGFR基因突变检出中所占比例分别为19.0%（4/21）、71.4%（15/21），表明上述区域极有可能是靶向治疗的敏感部位。另外，由表2可知，非小细胞肺癌中EGFR基因突变与性别、组织学分型、分化程度有关。其中女性患者EGFR基因突变明显高于男性患者，腺癌及细支气管肺泡癌EGFR基因突变检出率明显高于其他分型检出率。王芳等[11]报道，细支气管肺泡癌及伴有细支气管肺泡癌分化特征的腺癌EGFR基因突变率显著高于普通腺癌，他们认为腺癌中无论细支气管肺泡癌成分的多少均预示EGFR突变的高发生率及对酪氨酸激酶抑制剂的高反应率。该研究中细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变率高于腺癌患者，但两者差异无统计学意义，与张静等[12]报道一致。该研究还发现高分化患者EGFR基因突变率高于中-低分化患者。

综上，非小细胞肺癌EGFR基因突变与性别、组织学分型、分化程度息息相关，参与肿瘤浸润、化疗抗拒等过程，可作为非小细胞肺癌治疗的一项重要靶点。

[参考文献]

[1] Scagliotti GV， Selvaggi G， Novello S，et al. The biology of epidermal growth factor receptor in lung cancer[J]. Clin Cancer Res， 2004，10（12 Pt2）：4227-4232.

[2] Jemal A，Siegel R，Ward E，et al.Cancer statistic[J].CA Cancer J Clin，2006，56（2）：106-130.

[3] Mok TS，wu YL，Thongprasert S，et a1.Gefitinib or carboplatinpaclitaxel in pulmonary adenocarcinoma[J].N Engl J Med，2009，36l（10）：947-957.

[4] Zhou C，Wu YL，Chen G，et a1.Erlotinib versus chemotherapy as first-line treatment for patients with advanced EGFR mutation-positive non-small-cell lung cancer（OPTIMAL， CTONG-0802）： a multicentre，open-label，randomised，phase 3 study[J]. Lancet Oncol， 2011，12（8）：735-742.

[5] Shi Y，Zhang L，Liu X，et al.Icotinib versus gefitinib in previously treated advanced non-small-cell lung cancer （ICOGEN）： a randomised， double-blind phase 3 non-inferiority trial[J]. Lancet Oncol，2013，14（10）：953-961.

[6] Kris MG，Matale RB，Herbst RS，et al.Efficacy of gefitinib， an inhibitor of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase，insymptomatic patients with non-small cell lung cancer：a randomized trial[J]. JAMA，2003，290（16）：2149-2158.

[7] Wu YL，Zhong WZ，Li LY，et a1.Epidermal growth factor receptor mutations and their correlation with gefitinib therapy in patients with non-small cell 1ung cancer：a meta—analysis based on updated individual patient data from six medical centers in mainland China[J]. J Thorac Oncol，2007，2（5）：430-439.

[8] 王国庆，谷雅君，王蓉，等.中国人非小细胞肺癌EGFR基因突变与患者特征关系的Meta分析[J].中国医学检验杂志，2009，10（2）：55-57，60.

[9] 张晓彤，李龙芸，王树兰，等.吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察[J].中华结核和呼吸杂志， 2012（28）：180-183.

[10] Planchard D， LoriotY， Besse B.[ImpactofKRAS in stand-ard treatment of non-small cell lung cancer （NSCLC） pa-tients in 2009： prognostic and predictive value] [J]1Bull Cancer， 2009， 96： S57-S68.

[11] 王芳.付莎.汤涛，等.非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与临床病理特征的关系[J].中华病理学杂志，2011，40（10）：664-666.

[12] 张静，梁智勇，曾瑄，等.应用蝎形探针扩增阻滞突变系统检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与病理改变的关系[J].中华病理学杂志，2008，37（5）：294-299.

（收稿日期：2014-06-29）

文献报道[7-8]，不同人种之间EGFR基因突变率存在差异，东亚人群EGFR基因突变率约30%，高加索人群约10%。中国NSCLC患者EGFR基因总突变率约28.7%。该组福建地区159份非小细胞肺癌组织标本中EGFR基因突变检出率为12.6%，较国内平均数据低，可能与检测方法及不同的人群和地域有关，还需进一步扩大样本量进一步验证[9-10]。

该研究发现EGFR基因突变表现在外显子18～21，其中以19外显子缺失、21外显子点突变为主，在EGFR基因突变检出中所占比例分别为19.0%（4/21）、71.4%（15/21），表明上述区域极有可能是靶向治疗的敏感部位。另外，由表2可知，非小细胞肺癌中EGFR基因突变与性别、组织学分型、分化程度有关。其中女性患者EGFR基因突变明显高于男性患者，腺癌及细支气管肺泡癌EGFR基因突变检出率明显高于其他分型检出率。王芳等[11]报道，细支气管肺泡癌及伴有细支气管肺泡癌分化特征的腺癌EGFR基因突变率显著高于普通腺癌，他们认为腺癌中无论细支气管肺泡癌成分的多少均预示EGFR突变的高发生率及对酪氨酸激酶抑制剂的高反应率。该研究中细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变率高于腺癌患者，但两者差异无统计学意义，与张静等[12]报道一致。该研究还发现高分化患者EGFR基因突变率高于中-低分化患者。

综上，非小细胞肺癌EGFR基因突变与性别、组织学分型、分化程度息息相关，参与肿瘤浸润、化疗抗拒等过程，可作为非小细胞肺癌治疗的一项重要靶点。

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[8] 王国庆，谷雅君，王蓉，等.中国人非小细胞肺癌EGFR基因突变与患者特征关系的Meta分析[J].中国医学检验杂志，2009，10（2）：55-57，60.

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[12] 张静，梁智勇，曾瑄，等.应用蝎形探针扩增阻滞突变系统检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与病理改变的关系[J].中华病理学杂志，2008，37（5）：294-299.

（收稿日期：2014-06-29）

文献报道[7-8]，不同人种之间EGFR基因突变率存在差异，东亚人群EGFR基因突变率约30%，高加索人群约10%。中国NSCLC患者EGFR基因总突变率约28.7%。该组福建地区159份非小细胞肺癌组织标本中EGFR基因突变检出率为12.6%，较国内平均数据低，可能与检测方法及不同的人群和地域有关，还需进一步扩大样本量进一步验证[9-10]。

该研究发现EGFR基因突变表现在外显子18～21，其中以19外显子缺失、21外显子点突变为主，在EGFR基因突变检出中所占比例分别为19.0%（4/21）、71.4%（15/21），表明上述区域极有可能是靶向治疗的敏感部位。另外，由表2可知，非小细胞肺癌中EGFR基因突变与性别、组织学分型、分化程度有关。其中女性患者EGFR基因突变明显高于男性患者，腺癌及细支气管肺泡癌EGFR基因突变检出率明显高于其他分型检出率。王芳等[11]报道，细支气管肺泡癌及伴有细支气管肺泡癌分化特征的腺癌EGFR基因突变率显著高于普通腺癌，他们认为腺癌中无论细支气管肺泡癌成分的多少均预示EGFR突变的高发生率及对酪氨酸激酶抑制剂的高反应率。该研究中细支气管肺泡癌患者EGFR基因突变率高于腺癌患者，但两者差异无统计学意义，与张静等[12]报道一致。该研究还发现高分化患者EGFR基因突变率高于中-低分化患者。

综上，非小细胞肺癌EGFR基因突变与性别、组织学分型、分化程度息息相关，参与肿瘤浸润、化疗抗拒等过程，可作为非小细胞肺癌治疗的一项重要靶点。

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[8] 王国庆，谷雅君，王蓉，等.中国人非小细胞肺癌EGFR基因突变与患者特征关系的Meta分析[J].中国医学检验杂志，2009，10（2）：55-57，60.

[9] 张晓彤，李龙芸，王树兰，等.吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察[J].中华结核和呼吸杂志， 2012（28）：180-183.

[10] Planchard D， LoriotY， Besse B.[ImpactofKRAS in stand-ard treatment of non-small cell lung cancer （NSCLC） pa-tients in 2009： prognostic and predictive value] [J]1Bull Cancer， 2009， 96： S57-S68.

[11] 王芳.付莎.汤涛，等.非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与临床病理特征的关系[J].中华病理学杂志，2011，40（10）：664-666.

[12] 张静，梁智勇，曾瑄，等.应用蝎形探针扩增阻滞突变系统检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变与病理改变的关系[J].中华病理学杂志，2008，37（5）：294-299.

（收稿日期：2014-06-29）