Git2在胆管癌组织中的表达和意义

刘晨，张炳远

（青岛大学附属医院，山东青岛266000）

Git2在胆管癌组织中的表达和意义

刘晨，张炳远

（青岛大学附属医院，山东青岛266000）

目的探讨Git2在胆管癌组织中的表达。方法采用免疫组化技术检测Git2在胆管癌和胆管癌癌旁组织中的表达。所获数据采用χ2检验。结果胆管癌组织中的Git2阳性表达率（72.90%）明显高于胆管癌癌旁组织（50.80%)(P<0.01)。在胆管癌组中Git2在低、中、高分化癌组织中阴性表达率分别为88.9%（24/27）、75%（15/20）、33%（4/12），三者均有显著差异，淋巴结转移患者中Git2阳性表达率为85.60%（33/39），高于未发生转移的组织50.00%（10/20），差异有显著性（P< 0.05）。结论Git2可能与胆管癌的病理分化及淋巴结转移有关。

G蛋白偶联受体激酶结合蛋白2；胆管癌

胆管癌是一种上皮细胞恶性肿瘤，病发于胆管。根据胆管癌的发病部位不同，Blumgart[1]指出胆管癌可以分为肝内胆管癌和肝外胆管癌两种形式。沿胆管壁浸润式增长是胆管癌转移的主要方式，同时可伴随周围淋巴结转移。胆管癌多局部性生长，远处转移几率小，恶性程度高，预后差。

目前对肿瘤的研究主要在肿瘤的激活及抑癌基因的研究。细胞粘附和细胞运动在很多生理和病理过程中起到了重要的作用，能够对细胞发育、肿瘤侵袭和细胞转移等产生调节作用。G蛋白偶联受体激酶结合蛋白2（Git）分子能够与PIX或桩蛋白结合，与ARF6和PAK等发生作用，在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中发挥重要作用。N-α-乙酰转移酶10（NAA10）是一种重要的肿瘤转移抑制因子，可以对PIX-GIT-Paxillin复合物产生干扰，抑制肿瘤细胞的转移过程[2]，表明Git蛋白能够促进肿瘤转移。细胞极性蛋白Scribble能够与PIX和Git结合，促进甲状腺激素受体内吞作用的形成[3]，增强PAK和Rac的活性[4]。细胞极性蛋白Scribble出现功能和结构异常会导致哺乳动物肿瘤的出现，提出GIT可能促进肿瘤的产生[5]。虽然上述研究表明GIT蛋白能够促进肿瘤的转移，但是关于肿瘤发生和转移过程的调节机制尚未明确，需要进一步的研究。本实验采用免疫组织化学S-P法检测Git2在胆管癌组织及癌旁组织中的表达率分析的表达情况；结合胆管癌的临床病理参数：病理分级及淋巴结转移，评价Git2与胆管癌的发生、发展是否相关；并探讨其在胆管癌的发病风险、预后中的作用。

1 临床资料

1.1 一般资料将来自于2011年7月—2013年9月青岛大学附属医院手术切除的59例胆管癌患者的石蜡组织标本，进行连续切片，切片厚4μm。经HE染色后确认其分化的程度，结合临床的资料确定肿瘤的部位及淋巴结是否转移，选出59例胆管癌组织石蜡标本。所有取材的胆管癌组织石蜡标本，患者手术前均无化疗及放疗。年龄26～79岁，平均年龄55岁。男性43例，女性17例。高分化27例，中20例、低分化12例，有淋巴结转移者39例，无转移者20例。肿瘤部位肝内17例，肝外42例。取59例胆总管癌旁组织（距肿瘤边缘1cm的胆总管组织）作对照组。

1.2 检测方法Git2单克隆抗体、SP试剂盒、AEC显色试剂盒均为福建福州迈新生物技术有限公司。实验中皆按照试剂盒使用说明进行操作。空白对照：用PBS代替一抗作为阴性对照；阳性对照：Git2用公司提供阳性切片作为对照。Git2阳性表达为染色后在细胞核出现棕黄色颗粒。采用双盲法观察阳性试验，由经验丰富的病理科医师独立观察并切片，切片放置于光学显微镜下，观察视图中组织免疫学染色。位于细胞核中的Git2蛋白的阳性表达为棕黄色颗粒，选择样本在10倍视野下观察，对细胞染色程度和阳性率进行分析并作出评分：1）染色不强未染色者记0分；染色淡黄者记1分；染色呈黄色者记2分；染色呈棕褐色者记3分。2）阳性染色率：染色率小于1%者记0分；染色率为1%～10%者记1分；染色率为11%～50%者记2分；染色率大于50%者记3分。根据染色程度评分和染色阳性率的评分相乘，若结果大于4，则为阳性表达，若结果在0～3分之内，则为阴性表达。

1.3 统计学处理应用SPSS13.0软件分析，所获数据采用χ2检验。

2 结果

Git2与胆管癌的临床病理关系：1）Git2在胆管癌组织及胆管癌癌旁组织中的阳性表达率分别为72.90%和50.80%。显微镜下阳性染色主要是胆管癌的细胞核中出现棕黄色颗粒，如图1；而Git2表达阴性的胆管癌癌旁组织在细胞核中未见到类似的棕黄色颗粒，或者阳性细胞数少，如图2。2）性别男25例，阳性19例，占76.0%；女34例，阳性24例，占70.6%。>55岁35例，阳性27例，占77.10%；<55岁24例，阳性16例，占66.7%。肿瘤位肝内者17例，阳性11例，占64.7%，肝外42例，阳性32例，占76.2%。肝管癌组织59例，阳性43例，占72.9%；癌旁组织59例，阳性30例，占50.8%。按照病理组织学分级，Git2在低、中、高分化癌组织中阴性表达率分别为88.9%（24/27）、75%（15/20）、33%（4/12），三者均有显著差异，淋巴结转移患者中Git2阳性表达率为85.60%（33/39），高于未发生转移的组织50.00%（10/ 20），差异有显著性（P<0.05），这表明Git2的阳性表达与胆管癌的转移也存在显著相关。以上结果提示，当Git2表达上升时，促进早期肿瘤的进展及淋巴转移。

图1

图2

3 讨论

Premont是最早发现G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2，并对其作用进行了分析和探索。G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2，简称Git2，存在于人类染色体12q24.1区域，缺乏C端结构域[6]，是一种广泛存在的多结构蛋白，组织分布范围广泛，在免疫组织中存在，有多种剪接体形式表达。在肌动蛋白细胞骨架的组装过程中Git2也起到了重要的作用[7,8]，并且在细胞内信号传递过程中有重要的调节作用[6]。GIT分子能够与GPK相互作用在G蛋白偶联受体通路中调节受体的功能，减弱β肾上腺素受体信号的强度[7]，同时改变PAKs定位，重塑粘附斑发生[9]。以上研究皆提示Git2参与调节细胞的运动。本次研究发现，Git2在不同的胆管癌病理分级是明显不同，分化越差，阳性率越高。研究发现，GIT2在肝癌，肺癌，乳腺癌，子宫内膜癌，恶性淋巴瘤中等肿瘤组织中都有表达且Git2可以通过调节NF-κB的激活，从而对肿瘤细胞的转移发挥重要的作用[10]。本次研究提示Git2在胆管癌中也有异常表达。并且当有淋巴结的转移时Git2表达增强，提示Git2与胆管癌的淋巴结转移呈正相关。提示Git2可能参与了胆管癌的病理分级及淋巴结转移，其过度表达在判断胆管癌患者预后中有一定的临床意义。

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R735.8；R446.61

A

1008-4118（2015）03-0038-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2015.03.014

2015-05-20

张炳远。E-mail:bingyuanzhang@126.com。