肠杆菌科细菌产超广谱B-内酰胺酶细菌的检测方法及耐药性

韩艳琴 (赤峰学院第二附属医院检验科，内蒙古 赤峰 024000)

比较采用三种检测技术检测超光谱B-内酰胺酶(ESBLs)的检出率，对产ESBLs细菌的耐药现状进行深入分析。笔者旨在对236株肠杆菌科细菌用 WITEK32测定ESBLs，同时用复合纸片法、确证试验及双纸片协同法进行对照检测。现将具体情况总结报告如下。

1 材料和方法

1.1 菌株:试验菌株系我院2011年5月～2013年12月从门诊和住院患者的尿、痰、脓汁等标本中分离的，肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌共236株，ESBLs阴性质控菌为大肠埃希菌ATC2599，ESBLs阳性质控菌为肺炎克雷伯菌ATCC700603。

1.2 仪器检测ESBLs:应用WITEK32及CNS-NT卡、GNSF2和GNS-506卡检测，通过测定头孢他啶、头孢噻肟两种抗生素与酶抑制剂克拉维酸的联合制剂与单纯头孢他啶、头孢噻肟的最低抑菌浓度值比≥4时，判定为ESBLs阳性。

1.3 确证法:选用经头孢噻肟(CTX)及头孢他啶(CAZ)等三代头孢纸片初筛试验疑为产ESBLs株者，再用CAZ和CAZ/CA及CTX和CTX/CA两组纸片同时测定，接种方法按纸片扩散法进行。结果判断:2000年(NCCLS)标准即含克拉维酸和不含克拉维酸纸片的抑菌环直径之差≥5 mm可确认为ESBLs菌株。

1.4 双纸片协同法:底物选用头孢噻肟(CTX)或头孢他啶(CAZ)，含酶抑制剂药物为阿莫西林/克拉维酸(AMC)，阿莫西林/克拉维酸与底物纸片贴附于已涂抹待测菌液的琼脂上，两纸片中心距离为25 mm，接种方法按纸片扩散法进行。结果判断:孵育18～24 h，观察阿莫西林/克拉维酸一侧的抑菌区加强者判为ESBLs阳性。

1.5 药敏试验:采用纸片扩散法(K-B法)，判读标准按NCCLS1999年版。

2 结果

2.1 三种测试法检测ESBLs的阳性率比较:详见表1。

2.2 ESBLs菌株与非ESBLs菌株对12种常用抗菌药物耐药率比较:详见表2。

表1 三种测试方法检测ESBLs的阳性率(%)

表2 ESBLs阳性菌株与ESBLs阴性株的耐药率比较(%)

3 讨论

由表1可见，按仪器法从临床标本分离的162株大肠埃希氏菌和74株肺炎克雷伯菌中共检出ESBLs菌48株，平均阳性率为21.7%，其中肺炎克雷伯菌ESBLs检出率25.6%高于大肠埃希菌的17.9%。VITEK仪器法对ESBLs检出率达99.5%，方法快速、准确，阳性率高。确证法与仪器法对照阳性率稍低，但因其操作简便，不受实验室条件限制和纸片间距影响，容易普及。双纸片法敏感性在85.0%左右，本组资料结果表明，双纸片法阳性率低于仪器法与确证法，原因在于此种方法会受到纸片间距离的影响以及人工判读结果存在较大差异，使得漏检的几率增加，但因其价格较低，纸片易于购买，一般实验室应用较为广泛。浓度梯度法结果准确，阳性率较高，但因价格问题，一般用于科研。以上资料表明，检测ESBLs选择仪器法与复合纸片确证法是较为理想的［1-2］。表2结果表明，产ESBLs菌与非产酶菌株比较，其对常用抗菌药物耐药率相对更高，显示出高度耐药状态，应予以高度重视。

综上所述，合理选择检测方法，快速、准确地提高ESBLs菌株的阳性检出率，在临床上具有不可低估的作用。

［1］ 孔海深，顾 毅.超广谱B-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性［J］.中华检验医学杂志，2000，23(1):23.

［2］ 陈彩贞.肠杆菌科细菌产超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析［J］.临床和实验医学杂志，2010，9(18):1383.