DC-CIK 联合化疗治疗进展期胃癌45 例的临床疗效评价

单海霞，黄广清

徐州医学院附属医院肿瘤科，江苏 徐州221006

随着社会、环境和人们生活方式的变化，胃癌发病率日趋上升。作为第二大癌症死因［1］，尽管治疗方法已取得了长足的进步，如手术、化疗、放疗等，患者的预后和生存率仍然不佳。因此，探寻综合治疗胃癌的新途径具有重要的意义。目前国内外对治疗进展期胃癌的报道较少，尤其是对使用DC-CIK 细胞免疫治疗联合化疗治疗的临床疗效评价。本研究以进展期胃癌患者术后采用常规化疗为对照组，观察比较术后使用DC-CIK 联合化疗进行治疗的疗效，从而为临床推广应用提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2009 年11 月-2011 年4 月在徐州医学院附属医院行胃癌根治术的患者90 例，男53 例，女37 例，年龄31 ～62 岁，平均年龄(37.84 ±9.25)岁。随机分为对照组和观察组，每组各45 例。对照组患者年龄31 ～59 岁，平均年龄(36.53 ±8.74)岁;治疗组患者年龄33 ～62 岁，平均年龄(35. 26 ±10.36)岁。入选标准:(1)术后病理诊断根据国际抗癌联盟(UICC)分期标准证实为进展期［2］;(2)年龄30～78 岁;(3)造血功能正常，心、肝、肾等重要脏器功能正常，无自身免疫疾病;(4)卡氏评分(Karnofsky performance status，KPS)≥60 分;(5)所有患者术前未经放疗与任何方案化疗。凡不符合上述标准中任何一条者均不纳入研究范围。

1.2 治疗 对照组患者术后采用TP 方案(紫杉醇175 mg/m2溶于500 ml 生理盐水中静脉滴注，间隔1 h给予顺铂30 mg/m2，治疗周期为21 d)化疗，共3 个周期;观察组患者术后采用TP 化疗联合DC-CIK 细胞免疫治疗方案，即在完成3 个周期的TP 治疗后的第14天，将制备好的DC-CIK 细胞回输入患者体内。本研究经医院伦理委员会批准，所有患者均自愿入组，患者或家属签署知情同意书。

1.3 DC-CIK 细胞的制备和质检 观察组45 例患者于化疗前使用COBE 血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞(PBMC)，细胞数量需达到1 ～3 ×108个。调整PBMC 细胞浓度，置于培养瓶内于37 ℃，5%CO2培养箱中孵育。依次加入重组人IFN-g、CD3 单克隆抗体、重组人IL-2 刺激CIK 细胞的生长和增殖，在培养的第7 天，收获CIK 细胞。加入含重组人GMCSF 和重组人IL-4 的无血清培养液，37 ℃，5% CO2培养箱中培养，诱导单核细胞向DC 细胞分化;每3 d 半量换液1 次，并补足细胞因子。将收获的DC 细胞和CIK 细胞按1∶10 的个数比共培养，无血清培养液中添加重组人IL-2(300 U/ml);每3 d 半量换液1 次，并补加重组人IL-2(300 U/ml)。在第7 天收集细胞，细胞数量应达到1 ×1010个以上。

DC-CIK 细胞的质检:台盼蓝染色检测结果活细胞数目;流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56 等分子的表达;细胞杀伤实验:以DC-CIK 细胞为效应细胞使用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率;取少量培养物进行细菌、真菌培养，并检测支原体、衣原体及内毒素。

1.4 免疫功能评价 收集对照组和观察组患者治疗前及治疗后1 个月外周血各5 ml，使用流式细胞仪分析血液中CD3+、CD4+、CD8+以及CD56+细胞的百分比。ELISA 法检测细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10 的表达水平，操作方法参照试剂盒说明书。

1.5 近期疗效评价 近期疗效按RECIST 标准统一评价［3］，每2 个周期进行评价，分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)，以CR +PR 计算有效率;以CR+PR+SD 计算疾病控制率(DCR)。1.6 其他疗效评定指标 对两组患者术后36 个月内进行跟踪调查，定期复查了解肿瘤复发、转移等情况。计算两组患者的局部复发率、生存率。同时患者在观察治疗过程中每次输注DC-CIK 细胞过程中有无发热、过敏等不良反应。

1.7 统计学分析 使用SPSS 16.0 统计软件进行分析。各组之间的差异进行单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用t 检验。P ＜0. 05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后患者外周血T 细胞亚群变化 两组患者经治疗后T 细胞免疫功能检测结果显示，观察组CD3+CD4+T 淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比率和NK 细胞百分比较治疗前及对照组治疗后均显著升高，差异有统计学意义(P ＜0.05);而CD3+CD8+T 淋巴细胞百分比相比，差异无统计学意义(P ＞0.05，见图1)。

2.2 治疗前后对患者细胞因子的影响 观察组IFNγ 明显升高，与治疗前及对照组治疗后相比，差异有统计学意义(P ＜0.05);IL-4、IL-6、IL-10 变化无明显差异(P ＞0.05)。对照组治疗后IL-6 升高，与治疗前及观察组治疗后相比，差异有统计学意义(P ＜0.05);IFN-γ、IL-4、IL-10 降低，但差异无统计学意义(P ＞0.05，见表1)。

2.3 近期疗效评价 对照组中CR 0 例、PR 8 例、SD 17 例、PD 20 例;观察组中CR 0 例、PR 19 例、SD 12例、PD 14 例。对照组和观察组的有效率分别为17.78%和42. 22%，两组相比，差异有统计学意义(P ＜0.05)。观察组较对照组控制率高(68.89% vs 55.56%)，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.4 两组患者累积复发率、生存率比较 观察组1、2、3 年累积复发率明显低于对照组，差异有统计学意义(P ＜0.05);观察组1 年累积生存率(62.22%)高于对照组(46.67%)，差异有统计学意义(P ＜0.05);而观察组2、3 年累积生存率与对照组相比，差异无统计学意义(P ＞0.05，见表2)。

2.5 DC-CIK 联合化疗的安全性评价 45 例患者在接受DC-CIK 联合化疗治疗过程中，有4 例在治疗2.5 h 内出现轻度体温升高，发热症状出现后3 h 内均自行缓解。无1 例患者出现过敏症状。

图1 观察组与对照组治疗前后外周血T 细胞亚群的变化 A:CD3 +CD4 +T 淋巴细胞百分比;B:CD3 +CD8 +T 淋巴细胞百分比;C:CD4 + /CD8 +比率;D:NK 细胞百分比Fig 1 The changes of the peripheral blood T cell subsets between control group and observation group A:the percentage of CD3 +CD4 + T lymphocytes;B:the percentage of CD3 +CD8 + T lymphocytes;C:the ratio of CD4 + /CD8 +;D:the percentage of NK cells

表1 两组患者治疗前后细胞因子变化(ng/L)Tab 1 The changes of cytokines between two groups before and after treatment (ng/L)

表2 两组患者累积复发率、生存率比较［例数(%)］Tab 2 Comparison of relapse rates and survival rates between two groups［n(%)］

3 讨论

胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，术后进行化疗对控制局部肿瘤复发具有显著效果，但化疗仅能扼杀一定数量的肿瘤细胞，难以清除微小病变。因此，寻找能够降低肿瘤复发率，提高患者生存率的治疗方法是非常有意义的。近20 年来，肿瘤免疫学和分子生物学的迅猛发展为癌症治疗提供了更为有效的治疗手段，尤其在改善患者预后方面表现出良好的应用前景。CIK 细胞是一种同时具有T 淋巴细胞和自然杀伤细胞双重抗肿瘤活性的细胞群，具有体外高度扩增、杀瘤活性高、杀瘤谱广，对正常组织毒性低等特点。DC细胞是唯一能够显著刺激初始T 细胞增殖的抗原递呈细胞，能够触发机体适应性T 细胞免疫应答［4］。将CIK 细胞与DC 细胞在体外共培养再回输给患者，可对肿瘤进行免疫治疗，二者之间相互作用可诱发免疫应答，从而确保高效和谐的免疫反应［5］。在免疫治疗学的迅速发展下，细胞免疫治疗手段已逐步应用到包括胃癌、膀胱癌、乳腺癌在内的多种肿瘤的治疗上［6］。DC 是机体内重要的抗原递呈细胞，并且能够释放大量的细胞因子如INF 和IL-12 通过多种途径调节肿瘤免疫应答［7］。大量研究表明癌症患者的免疫系统较弱，包括CD3+CD4+T 细胞降低、CD3+CD8+增加、CD4+/CD8+比率降低以及NK 细胞数目下降［8］，激活患者肿瘤细胞的免疫应答对于提高肿瘤的临床治疗效果具有极为重要的临床意义。CIK 作为抗肿瘤活性的细胞群，其细胞内CD16+CD56+双阳性细胞能够释放大量的抗肿瘤细胞因子并对肿瘤细胞表现出较强的毒性作用［9］，给予外源性的CIK 则可增强机体对肿瘤细胞的杀灭能力，且与化疗药物起到较好的疗效协同作用。因此，在本研究中，我们采用DC-CIK 联合化疗治疗进展期胃癌患者，研究其对进展期胃癌患者免疫功能、肿瘤复发率和生存率的影响。

本研究中，观察组和对照组两组患者治疗前外周血中细胞因子与正常人群明显不同，然而在经过DCCIK 生物治疗联合化疗后，观察组的CD3+CD4+T 淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比率、NK 细胞百分比、细胞因子IFN-γ 较治疗前均明显升高，差异有统计学意义。此外，观察组患者外周血中各细胞因子水平均比对照组高，差异有统计学意义。结果提示，DC-CIK 细胞免疫治疗联合化疗能够显著提高患者的免疫功能，提高患者体内抗肿瘤免疫应答。要跟东等［10］使用DC-CIK 细胞联合化疗对37 例进展期胃癌患者治疗的结果显示，所有患者的CD4+/CD8+比率、NK 细胞百分比等较治疗前均明显升高，差异有统计学意义，且在改善患者的生存率和复发率方面也有积极的临床意义。我们为期36 个月的随访结果显示，观察组患者的生存率高于对照组且复发率较低，差异有统计学意义，提示DC-CIK 联合化疗能够有效降低进展期胃癌的复发率和提高患者的生存率，临床意义较为明确，与蔡俊霞等［11］的临床研究结果一致。在不良反应方面，除4例于DC-CIK 细胞回输期间出现轻微发烧以外，未见严重不良反应，安全性良好。

总之，使用DC-CIK 联合化疗对进展期胃癌进行治疗具有较为明确的临床疗效，为免疫学在胃肠肿瘤治疗方面的应用提供了较为可靠的临床证据，值得临床推广和进一步研究。

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