黄芪多糖对猪免疫功能的影响

刘新义，陈 斌，冯小花，蔡文杰

（1.湖南农业大学动物科技学院，湖南长沙410128；2.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙410131）

黄芪多糖对猪免疫功能的影响

刘新义1，陈 斌1，冯小花2，蔡文杰2

（1.湖南农业大学动物科技学院，湖南长沙410128；2.湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙410131）

为了进一步考察黄芪多糖（黄芪提取物）对猪免疫功能的影响，本试验于猪瘟疫苗免疫前后15日，对50头65日龄的健康外三元杂交猪分组，按不同剂量添加饲喂黄芪多糖可溶性粉，饲喂时间为1个月；并于饲喂后分两次进行耳静脉采血，采用猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测法检测猪体内抗体水平,得出了在日粮中添加黄芪多糖的猪体内抗体水平明显高于空白对照组，且添加量为日粮0.2%的黄芪多糖可溶性粉的试验组抗体水平最高，该试验证实了黄芪多糖对猪的免疫功能具有明显的增强效果。

黄芪多糖；抗体检测；免疫增强剂；猪

免疫增强剂是一类单独或与抗原同时使用通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质。它有利于加强机体的免疫功能，缓解由环境应激造成的免疫功能紊乱，有利于预防和治疗传染性及条件性疾病。随着现代医学科学研究的深入发展，人们对免疫增强剂的医疗、保健作用越来越重视，高效、稳定、毒副作用小的中药免疫增强剂将是未来抗御疾病的主要物质。

黄芪多糖(Astragaluspolysaccharme，APS)是黄芪中最重要的天然有效成分，是黄芪药理作用中起决定性因素的一类化合物。黄芪多糖能提高机体免疫功能，增强细胞生理代谢，提高巨噬细胞活性，是理想的免疫增强剂，它能促进T细胞、B细胞、NK细胞等免疫细胞的功能，对多种免疫缺陷症均有良好的防治作用，同时具有抗病毒、抗衰老、抗应激、抗氧化等作用。笔者通过检测黄芪多糖对猪瘟免疫抗体的影响，为黄芪多糖的合理临床应用提供了可靠的试验数据。

1 试验材料

1.1 主要试剂

猪瘟兔化弱毒活疫苗（细胞源，由湖南省涟源市畜牧水产局提供)；黄芪多糖可溶性粉可溶性粉（10%，湖南广大傲农畜牧兽医研发有限公司）；猪瘟抗体检测试剂（美国EDEXX：13-43220-Y241）

1.2 主要仪器

高速离心机（上海耐圣卡兰实业有限公司）；微量移液枪（上海荣泰生化工程有限公司）；全自动酶标仪（南京华东电子集团医疗装备有限责任公司）；微量振荡器（长沙永乐康医疗设备有限公司）；生化培养箱（上海精密仪器有限公司）；优普纯水机（广州市授科仪器科技有限公司）。

1.3 试验动物

根据试验要求，选择未经过猪瘟疫苗免疫的涟源市蓝田办事处某猪场（200头母猪），自繁自养，饲养管理水平适中，挑选出50头65日龄左右，体重相近、健康壮实的“杜长大”三元杂交猪。

2 试验方法

2.1 动物分组

共分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和空白对照组五组，基础日粮为玉米-豆粕型，对照组与试验组均每天饲喂2次，饲喂时间为1个月。

（1）空白对照组：饲喂基础日粮，耳标编号为1～10 号；（2）试验Ⅰ组：基础日粮，另添加饲料量0.05%黄芪多糖可溶性粉，耳标编号为11～20号；（3）试验Ⅱ组：基础日粮，另添加饲料量0.1%黄芪多糖可溶性粉，耳标编号为21～30号；（4）试验Ⅲ组：基础日粮，另添加饲料量0.2%黄芪多糖可溶性粉，耳标编号为 31～40 号；（5）试验Ⅳ组：基础日粮，另添加饲料量0.3%黄芪多糖可溶性粉，耳标编号为41～50号。

2.2 注射免疫疫苗

在免疫疫苗前后15天，除空白对照组外，试验组按试验要求在基础食粮中添加了不同量黄芪多糖可溶性粉。在猪群无异常状况下，2013年4月25日，按照疫苗使用说明，用专用疫苗稀释液稀释猪瘟冻干疫苗，严格按免疫要求进行消毒和一个针头免疫一头猪标准，在猪颈部后侧肌注猪瘟疫苗1头份/头。观察免疫副反应及应激情况。

2.3 采血及检测判定方法

于5月25日和6月25日，在猪耳静脉进行采血，每头猪采血量为2.5mL，按操作规程要求采集猪全血样品100个，用保温箱冷藏，在试验室用离心机处理得到检测用血清。采用猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测法。判定标准：阻断率≥40%，抗体阳性（+）；阻断率≤30%，抗体阴性（－）；40%＞阻断率＞30%，为可疑（±），可疑血清样品在下次采血时以下次抗体效价作为最终结果判定。

3 试验结果

3.1 免疫副反应及应激情况

4月2 5 日免疫后，空白组的3、7号猪，试验I组的18号猪，出现了免疫应激反应，具体表现为精神萎靡不振、呼吸略为急促，观察1h后，免疫应激反应症状消失，逐步恢复正常。

3.2 抗体检测对照

5月2 7 日免疫抗体检测其阴性对照OD450=0.131，阳性对照OD450=1.633；6月27日免疫抗体检测其阴性对照OD450=0.147，阳性对照OD450=1.735。

3.3 各组抗体检测结果

3.3.1 空白对照组的抗体检测结果。具体结果见表1。

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从表1中可看出，5月27日检测4、6、7号猪抗体结果为阴性，其它为阳性，抗体阳性率为70%；7个抗体阳性OD450值平均为0.641。6月27日检测4、6、7号猪抗体结果为阴性，其它为阳性，抗体阳性率为70%；7个抗体阳性OD450值平均为0.658。

3.3.2 试验Ⅰ组抗体检测结果。

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试验Ⅰ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为0.05%。从表2中显示5月27日检测18号猪免疫抗体结果为阴性，其它9个猪瘟免疫抗体阳性，抗体阳性率为90%，抗体效价OD450值平均为0.761。6月27日检测18号猪免疫抗体阴性，其它9个猪瘟免疫抗体阳性，抗体阳性率为90%，抗体效价OD450值平均为0.761。

3.3.3 试验Ⅱ组抗体检测结果。具体结果见表3。

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试验Ⅱ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为0.1%。从表3可看出,5月27日检测27号猪免疫抗体为可疑，28号为免疫抗体阴性，其它8个猪瘟免疫抗体阳性，抗体阳性率为80%，OD450值平均为0.818。6月27日检测28号猪为免疫抗体阴性，其它9个猪瘟免疫抗体阳性，抗体阳性率为90%，OD450值平均为0.892。

3.3.4 试验Ⅲ组抗体检测结果。具体结果见表4。

试验Ⅲ组添加黄芪多糖可溶性粉的量为0.2%，表4中显示5月27日检测免疫抗体结果全部为阳性，抗体阳性率为100%，OD450值平均为0.857。6月27日检测免疫抗体结果全部为阳性，抗体阳性率为100%，OD450值平均为0.975。

3.3.5 试验Ⅳ组抗体检测结果。

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试验Ⅳ组黄芪多糖可溶性粉的添加量为0.3%，从表5看出,5月27日检测Ⅳ组免疫抗体结果全部为阳性，抗体阳性率为100%，OD450值平均为0.813；6月27日检测免疫抗体全部为阳性，抗体阳性率为100%，OD450值平均为0.904。

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6 小结

从试验结果来看，空白对照组的免疫抗体合格率为70%，抗体阳性OD450值平均为0.641；试验组整体抗体阳性率达92.5%，抗体阳性OD450值平均为0.812，表明日粮中添加适量的黄芪多糖可溶性粉能增强仔猪免疫功能，并促进免疫抗体水平效价的提高；试验Ⅲ组(基础日粮+0.2%黄芪多糖可溶性粉)的5月27日检测免疫抗体全部为阳性，抗体阳性率为100%，OD450值平均为0.857。6月27日检测免疫抗体全部为阳性，抗体阳性率为100%，OD450值平均为0.975,免疫效果最好，抗体效价最高；试验Ⅲ组(基础日粮+0.2%黄芪多糖可溶性粉)与试验Ⅳ组(基础日粮+0.3%黄芪多糖可溶性粉)检测抗体阳性率均为100%，并无明显抗体效价水平差异，从中可以得出在基础日粮中添加0.2%黄芪多糖可溶性粉为最适宜，可达到理想的免疫增强效果；猪瘟疫苗在免疫60天后可达到较好的免疫效果，在基础日粮中添加黄芪多糖可溶性粉的试验组免疫效价提升相对较高，免疫增强效果显著；未在基础日粮中添加黄芪多糖可溶性粉的空白对照组发生免疫应激反应较大，在基础日粮中添加黄芪多糖可溶性粉的试验组免疫应激反应最小，机体抗病能力强。

通过此次试验，可以得出以下初步结论：在免疫疫苗前后15天左右添加黄芪多糖可溶性粉，有效添加量为基础日粮的0.2%黄芪多糖可溶性粉，有利于加强机体的免疫系统功能，解除免疫抑制，提高抗体效价水平，缓解由环境应激造成的免疫功能紊乱，有利于预防和早期控制传染性及条件性疾病。

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S858.28

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1006-4907（2014）04-0007-04

10.3969/j.issn.1006-4907.2014.04.003

2014-06-12