兰州大尾羊重复超数排卵效果分析

文│朱芳贤 孟飞 许海涛 陆健 赵俊金 张俊杰 刘丑生（全国畜牧总站）

冷冻胚胎保存动物遗传资源与其他保存技术相比具有突出的优越性，胚胎保存了品种的全部基因，若有数量充足的胚胎，可保存与现有物种遗传多样性一致的遗传资源。细胞可以在超低温条件下长期保存，即使活物消失，只要存在同种物种，通过胚胎移植和核移植技术就可恢复这些遗传资源。因此，在保护动物遗传资源，尤其是挽救濒危动物方面，冷冻胚胎技术发挥着越来越重要的作用。

大尾羊在我国广泛分布，具有生长快、早熟、产肉力高、肉质细嫩等优点。但由于引入品种的代替以及杂交改良，现在有些品种已面临濒危的局面，保种工作迫在眉睫。通过对兰州大尾羊超数排卵效果的分析，为建立其他大尾羊合理、有效的超数排卵方案提供依据。

一、材料与方法

1.时间、地点和品种。2010年8月引入到北京顺义饲养，2010年10月第一次超排，2010年12月第二次超排，2011年4月第三次超排。第一次超排时供体母羊平均年龄2.5岁、平均体重43千克。

2.超数排卵方案。在发情周期的任意一天，阴道埋置新西兰产阴道栓（CIDR），放栓当天记为“第0天”，第9～12天每日早晚分2次（间隔时间相等）等量注射新西兰产ovagen促卵泡素（FSH），即第9天每次2.0毫升，第10天每次1.6毫升，第11天每次1.4毫升，第12天每次1.0毫升，每只注射总量为12毫升（10.9毫克）。第6次注射FSH的同时注射氯前列烯醇（PG）0.2毫克；在第7次注射FSH时取掉CIDR；第8次注射FSH前试情，发情者不在注射FSH，注射促排卵素3号19毫克，没有发情的注射FSH。第13天试情，发情者也注射促排卵3号19毫克。

3.配种方法。发情后12小时进行第一次配种，第二次配种在第一次后8～12小时。采用人工辅助本交、人工授精和子宫角输精方法。

4.胚胎采集。发情日为0天，第7天用手术法暴露子宫和子宫—输卵管接合部，用国产8号导尿管进行子宫角冲胚。胚胎鉴定级别执行《畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范》和《牛羊胚胎质量检测技术规程》。

5.统计方法。采用SPSS19.0对各组数据进行方差分析和多重比较，结果以（平均值±标准差）表示。

二、结果及分析

1.重复超排效果比较（表1）。

如表1所示，3次超排共118只次，只均回收卵数、A级胚胎分别为7.42、5.00枚；3次重复超排只均回收卵数分别为7.87、6.68、7.71枚，差异不显著（P＞0.05）；3次重复超排只均A级胚胎分别为6.46、4.05、4.10枚，第1次明显高于后两次，差异显著（P＜0.05），后两次没有差异（P＞0.05）；3次重复超排只均未受精卵数分别为0.48、1.27、2.81枚，第1次低于第3次，并且差异显著（P＜0.05），前两次没有差异（P＞0.05），后两次也没有差异（P＞0.05）。这个结果和冲胚过程中看到的供体母羊生殖器官粘连情况相吻合，随着重复超排次数的增加发生粘连的羊增多，粘连程度也增重，造成卵子受精率降低及胚胎发育差。结果说明重复超数排卵对可用胚胎率、卵子受精率影响较大，与张果平等、李雪松等结果一致。

第2次超排只均回收卵数、A级胚胎低于第3次，可能原因是间隔时间短，供体羊还没有得到充分恢复。第2次和第1次间隔2个月，第3次和第1次间隔4个月。

2.不同年龄母羊的超排效果比较（表2）。

如表2所示，3～4岁只均黄体数、只均回收卵数、只均A级胚胎数分别为12.33、9.00、8.06枚，高于1.5～2.5岁的10.40、7.93、5.73枚，但差异不显著，说明兰州大尾羊1.5岁后就可以有好的超数排卵效果。

三、讨论

1.严格要求手术及术后护理。通过对重复超数排卵效果分析，建议在羊的超数排卵处理和采胚过程中，对手术以及手术后护理的要求要非常严格，避免造成子宫、输卵管粘连。另外，重复超数排卵的间隔时间要3个月以上，使得供体羊得到充分恢复，避免了短时间内受到连续频繁的刺激而影响超数排卵效果。

2.供体羊的选择。资料表明，绵羊一般到3～4岁以后排卵率达到最高峰。7岁以后产羔率开始下降，所以，选择供体羊时，经产母羊为首选。从理论上分析，初情期或初配母羊无生殖史，生殖系统疾病少，不育症比例低，但作为供体不合适。因为育成羊发情特征不明显，而且生理状况不稳定，给移植带来了困难。所以，选择适合年龄的供体母羊可以提高超数排卵效果，节约成本。

表1 重复超排效果比较

表2 不同年龄母羊的超排效果比较

3.受精率低的原因。超数排卵供体羊的受精率低是制约胚胎移植技术向产业化发展的一个重要因素。除了手术原因，一方面的原因是不合理的激素剂量使卵细胞非正常发育，影响了排卵后的卵子运动和受精，另一方面原因是外源激素扰乱了输卵管及子宫的内部环境，影响了卵子和精子的结合。另外还有与配公羊的精液质量、品质、输精技术的熟练程度等，都是影响超排后所得卵子受精率的重要因素。

4.配种方法。本次试验中都是采用本交方法配种，虽然受精率很高，但大尾羊尾部肥大，自然交配需要人工辅助，不易操作，要求辅助人员有一定的技术和体力，公羊也要有经验，此次试验中就有三分之一的公羊没有经验而失去交配机会。

本交、子宫颈口输精法、腹腔镜输精法各有其优缺点。一般情况下本交及子宫颈口输精法供体受精率较低，但对供体损伤小，有利于供体重复利用并降低术后对供体繁殖力的影响。腹腔镜法受精率高，但会对供体造成一种刺激及损伤，输精后不久即进行手术法冲卵，连续刺激对供体重复利用及术后繁殖力也有一定负面影响。因此，哪种配种方式更加经济、合理，还要视公羊数量及能力、配种人员经验等情况而定。

5.公羊饲养。长期的实践证明，在严格挑选供体羊的同时，根据供体羊的年龄、体重、营养状况等个体差异来调整激素剂量的前提下，加强公羊的饲养管理是获得较好的超排效果的关键所在。