蛹虫草实验室栽培研究

沈阳市化工学校

前 言

冬虫夏草与鹿茸、人参齐名为我国的传统三大补品，是滋补强身的名贵中药。随着对虫草认识的深入，国内外市场对虫草的需求日益扩大。但是，由于野生冬虫夏草采收的不易，且对生长环境要求的严格性使得其资源稀少，价格昂贵。另外，因为需求的不断增长，造成滥采滥挖，现在我国的野生虫草资源大量减少，目前已被列为国家一级保护物种。

在冬虫夏草供不应求的情况下，蛹虫草日益受到人们的关注，为医药和保健开发了新的药源和营养源。

蛹虫草具有多种药理作用:能增强巨噬细胞活性，抗炎、抗菌、抗癌、抗缺氧等;蛹虫草能镇静催眠，提高机体免疫力，降血脂，防止动脉硬化，保护心、脑组织等。

目前国外对于蛹虫草的研究比较少，主要研究比较多的集中在国内。大多数厂家采用的是无菌接种、固体发酵开放式培养基、深加工提取活性物质等技术，产品的主要类型为虫草子实体以及相应的生化提取多种成分的深加工产品两种。但是鲜有对虫草菌液以及液体菌种发酵的研究，在中职中药专业及中草药中职专业中开展实训项目研究更是少之又少，本项目主要集中在蛹虫草的人工育种菌液的研究、形成一套适合中职学校相关专业实训教学的实训方案。

1 材料与仪器

1.1 菌种

蛹夏草菌株

1.2 主要材料

大米粉、豆饼粉、麦芽粉、MgS04•7H2O、pH 试纸及调节试剂。

1.3 培养基

固体培养基（PDA）

1.4 主要仪器及设备

超净工作台、空调、菌种培养箱、恒温培养箱、干燥箱、振荡器、高压蒸汽灭菌锅、酸度计、奥林巴斯三目显微镜、解剖镜、PDA 培养基。

2 实验方法与步骤

2.1 组织分离育种

选无杂菌的罐头瓶中长4～6cm 状态好的虫草：将子实体洗去土和杂物，用75%酒精消毒，用灭菌水冲洗后。在超净工作台上用手术刀将选用的子实体切成上下两截，选取虫草子实体，用接种针小心地截取子实体的中间偏向顶端部位或中间处，挑取所截取的子实体上面的一小块内部组织，接种到PDA 培养基上进行培养从而获得候选菌株，经过栽培试验，鉴别菌种的性能。

2.2.液体深层发酵培养

通过液体深层培养法获得的虫草菌丝体，菌丝体的化学成分接近从自然界中采集的蛹虫草的化学成分，可从发酵液中得到所需物质，还能很大程度上缩短生产的周期。

2.3 出草试验

于罐头瓶中装入大米，一定量的自来水，瓶口用双层聚丙烯膜进行包扎。将罐头瓶放在121℃灭菌1h。冷却后，在无菌条件下进行注射接入液体菌。培养约7d，至培养基中长满菌丝后上架。接种约50d，虫草子实体顶部子囊壳开始膨大后采收。

2.4 菌种的保存

保藏菌株，测定菌丝干重和子实体产量。

3 结果

3.1 组织分离育种部位的选择

选取虫草有龟状纹的部位，沿纵向切开一个小口，纵向撕开成两块，用接种针截取子实体中间偏向顶端部位或中间处，挑取所截取的子实体上面的一小块内部组织，接种到PDA 培养基上进行培养从而获得候选菌株，经过栽培试验，菌种的性能优异。

表1 不同组织部位对蛹虫草生长的影响

3.2 出草试验温度的控制

500 ml 罐头瓶，装大米25g，无菌处理过的注射器注入自来水40ml，自来水中含不同组分营养，瓶口采用双层聚丙烯膜进行包扎。121℃灭菌1h。完全冷却后，无菌条件下注射接入6ml 液体菌种，每个处理20 个重复。14℃～17℃、17℃～20℃、20℃～23℃、23℃～26℃温度段条件下通风培养7d。期间照射（300lx 散射光），子实体突起出现后，光照强度加强，400lx 光间歇照射，1h 照射，80min 间歇，同时将罐头瓶封口膜刺破，以增加通风。20℃～23℃通风条件下，暗条件培养，培养基中长满菌丝后上架。接种约50d，虫草子实体顶部子囊壳开始膨大后采收子实体产量最佳。

表2 不同温度对蛹虫草生长的影响

3.3 液体深层发酵培养基

虫草在进行菌丝发酵时碳源以蛋白胨为最优，采用1：2 或1：3 的碳氮比较为合适；蛹虫草菌丝发酵最佳培养基组成为5%大米粉、1．5%豆饼粉、1．5%麦芽粉、0．1%KH2P04，0．05%MgS04•7H2O。

表3 不同碳氮比对冬虫夏草生长的影响

3.4 菌种的保存条件

10℃/5℃（昼夜）、黑暗、散射光、白炽灯持续照射三种实验条件，保藏30d，散射光菌株表现为菌落边缘整齐，菌丝致密，菌丝长速均匀稳定，菌丝干重和子实体产量较高。

表4 不同光照对蛹虫草生长的影响