常用免疫抑制剂治疗对系统性红斑狼疮患者淋巴细胞亚群的影响*

苏利沙，张根豪，邓少丽，张俊华，刘红春

1)郑州大学第一附属医院检验科 郑州450052 2)第三军医大学大坪医院检验科 重庆400042

#通讯作者，女，1963年1月生，博士，教授，主任技师，研究方向:自身免疫性疾病实验诊断，E-mail:xingyunerliu@163.com

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种典型的自身免疫性疾病，病因复杂多样，以产生大量自身抗体尤其是抗核抗体为特征，进而形成免疫复合物沉积在机体各部位，可累及皮肤、神经、血液、呼吸等多系统器官。目前临床上主要根据SLE 患者病情及并发症情况使用糖皮质激素和其他免疫抑制剂(如环磷酰胺和吗替麦考酚酯等)进行治疗。及时系统地对患者外周血淋巴细胞进行检测，可辅助全面了解患者免疫功能及病情状况，进而更好地指导临床用药。该研究利用流式细胞术，比较分析常用免疫抑制剂治疗对SLE 患者淋巴细胞亚群影响情况，进一步揭示免疫抑制剂治疗SLE的基本药理作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2012年6月至2013年7月在郑州大学第一附属医院住院的SLE 患者83例，其中男10例，女73例，年龄12～66(34.4±2.4)岁。所有患者均符合1982年美国风湿病协会修订的SLE 分类标准［1］。根据患者是否接受免疫抑制剂治疗将其分为未治疗组和治疗组，其中未治疗组24例，药物治疗组59例，药物治疗组所有病例均接受不少于2 个月糖皮质激素联合环磷酰胺或吗替麦考酚酯治疗。2组患者疾病活动性依照SLE 疾病活动评分标准［2］进行评分，积分＞4 为活动期，积分≤4 为静止期。治疗组中静止期17例，活动期42例;未治疗组中静止期7例，活动期17例。对照组为郑州大学第一附属医院门诊健康体检者，30例，其中男5例，女25例，年龄13～66(38.5±2.0)岁。

1.2 试剂和仪器 鼠抗人CD45-PerCP/CD3-FITC/CD4-APC/CD8-PE CD45-PerCP/CD3-FITC/CD16CD 56-PE/CD19-APC、FACS 溶血素均购自美国BD 公司;FACScalibur 流式细胞仪为美国BD 公司产品。

1.3 淋巴细胞亚群检测方法 清晨以EDTA-K2抗凝管抽取各组受试者空腹静脉血2 mL 备用。采用四色免洗法检测外周血淋巴细胞亚群。取试管2支，编号A 和B，取10 μL CD3/CD8/CD45/CD4 抗体加入A 管中，取10 μL CD3/CD16CD56/CD45/CD19 标记的抗体加入B 管中;在2 支试管中分别加入50 μL 充分混匀的抗凝全血，漩涡混匀，避光放置15 min;然后取出试管各加入500 μL FACS 溶血素，充分混匀，避光放置15 min;充分混匀样品，用MutiSET 系统进行检测。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0 分析数据。不符合正态分布的数据以中位数(P25～P75)表示。未治疗组与治疗组、SLE组与对照组CD3+T 细胞、CD3+CD4+Th 细胞、CD3+CD4+Th 细胞、CD3+CD8Ts 细胞水平的比较采用两独立样本的t 检验;SLE组与对照组、未治疗组与治疗组间CD3+CD8+Th 细胞与CD3+CD8+Ts 细胞比值(Th/Ts 比值)、CD3－CD19+B 细胞、CD3－CD16+CD56+NK 细胞水平的比较采用Wilcoxon 秩和检验。检验水准α =0.05。

2 结果

2.1 SLE 患者淋巴细胞亚群水平变化情况 同对照组比较，SLE组CD3+CD8+Ts 细胞增加，CD3+CD4+Th 细胞减少，Th/Ts 比值降低，CD3－CD16+CD56+NK 细胞减少，CD3－CD19+B 细胞增加。见表1。

表1 SLE 患者淋巴细胞亚群水平变化

2.2 联合应用糖皮质激素和环磷酰胺或吗替麦考酚酯对SLE 患者外周血淋巴细胞亚群水平的影响同未治疗组相比，治疗组SLE 患者CD3+CD4+Th 细胞增加，Th/Ts 比值升高，CD3－CD19+B 细胞降低。见表2。

表2 常用免疫抑制剂对SLE 患者外周血淋巴细胞亚群水平的影响

3 讨论

SLE 是一种累及多器官的系统性自身免疫病，遗传、环境、雌激素等多重因素参与了该病的发生发展，其中T 细胞和B 细胞在SLE 的发病中起关键作用。研究［3］显示SLE 患者外周血淋巴细胞亚群水平存在明显异常，且可能同患者是否并发狼疮肾炎等相关。该研究结果显示，同健康对照比较，SLE 患者外周血CD3+CD8+Ts 细胞增加，CD3+CD4+Th 细胞减少，Th/Ts 比值降低，CD3－CD16+CD56+NK 细胞减少，而CD3－CD19+B 细胞增加，说明T 细胞各亚群、NK 细胞和B 细胞失衡参与了SLE 的发生。

作为常用免疫抑制剂，糖皮质激素、环磷酰胺及吗替麦考酚酯常用于治疗SLE 患者，虽然取得不错的治疗效果，但其具体的药理作用尚未完全阐明，且存在着降低免疫力、易引起感染等不良反应［4］。该研究结果表明经过常用免疫抑制剂治疗，SLE 患者CD3+CD4+Th 细胞增加，Th/Ts 比值升高，CD3－CD19+B 细胞降低;提示常用免疫抑制剂通过增加Th 细胞来调整SLE 患者T 细胞亚群分布及总体功能状态，同时也通过降低患者外周血B 细胞水平来达到治疗SLE 的药理作用。

T 细胞依据其表面标志物(CD4 和CD8)及生物学功能可分为Th 细胞和Ts 细胞两大类:Th 细胞包括Th1 细胞、Th2 细胞、Th17 细胞、Treg 细胞和Tfh细胞等，其各细胞亚群失衡促进了SLE 的发生及发展［5-6］。协同刺激分子SLAM mRNA 在SLE 患者T细胞表达增加，且同疾病活动度呈正比，其对细胞因子的分泌及Th1/Th2 细胞的分化有重要作用［］。Ts 细胞可通过细胞接触抑制、分泌抗炎症因子(如IL-10 和CCL-4)和直接杀伤细胞等途径发挥免疫抑制作用［8］。该研究结果表明免疫抑制剂治疗后SLE患者Th 细胞比例明显增加，Th/Ts 比值明显升高，这同以往研究［9-10］结果一致。此外，T 淋巴细胞亚群变化情况还可能与药物治疗的有效性及疾病复发情况等有关［11］。

B 细胞作为自身抗体产生细胞，在SLE 的发病机制中起主要作用，此外，B 细胞作为抗原递呈细胞诱导自身活化T 细胞并通过自分泌和旁分泌方式分泌一系列促炎性细胞因子［12］。研究［13］表明B 细胞可作为治疗SLE 的靶点。近来用于治疗SLE 的新药贝利单抗(一种抗Blys 单克隆抗体)即通过阻断B 细胞亚群进一步发育成B 细胞及长期生存进而减少自身抗体产生来达到良好的治疗作用。Eickenberg 等［14］研究发现吗替麦考酚酯可以缓解SLE 患者B 细胞增殖和浆细胞形成，该研究也证实了这一点，即免疫抑制剂治疗患者较未治疗者外周血B 细胞明显减少，常用免疫抑制剂可通过减少B细胞来减少自身抗体产生进而治疗SLE。

综上所述，淋巴细胞在SLE 的发生发展中起重要作用，SLE 患者淋巴细胞亚群比例较健康者发生明显改变，且T 细胞及其各亚群、B 细胞水平随免疫抑制剂治疗发生变化。检测SLE 患者外周血淋巴细胞亚群有利于更全面了解患者整体免疫状态及疾病活动情况，进而更好地指导临床治疗。

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