CellaVision DM96自动成像系统在白细胞分类计数中的应用

杨 婧，关会霞，牛景阳，杨 华，陈渝宁△（沈阳军区总医院：.感染控制科；.检验科，沈阳 0840）

近年来，自动血细胞分析仪的发展使得短时间内分析数万个细胞成为可能［1］。由于血液分析仪提供的白细胞、红细胞及血小板的形态学资料有限，因此外周血细胞涂片仍然是临床诊疗中必不可少的重要诊断工具［2-3］。近年出现的Nextslide及CellaVision DM96自动成像系统均是全自动血细胞形态鉴定仪器，可以实现血涂片检查的自动化［4-5］。此类分析仪可以将染色后的血涂片置于高倍镜下拍摄每个细胞的数码图像，通过软件进行细胞分类和鉴定。除了白细胞的分类，仪器还提供红细胞形态信息和血小板数量的粗略估算［6］。为验证CellaVision DM96系统对外周血涂片中白细胞分类计数的应用价值，作者选择2011年7月1日至8月31日住院和门诊患者的乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝静脉血，在贝克曼库尔特LH750血液分析仪检测需要复检的112例标本，同时用CellaVision DM96系统和显微镜法进行检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料2011年7月1日至8月31日住院和门诊患者的EDTA-K2抗凝静脉血，经贝克曼库尔特LH750血液仪分析检测需要复检的112例标本，对应112例患者中男54例，女58例，年龄15～69岁，白细胞计数范围为（0.52～43.79）×109／L。

1.2 仪器与试剂瑞典CellaVision DM96系统，美国贝克曼库尔特LH750血液分析仪，日本奥林巴斯电光学显微镜。LH750血液分析仪试剂使用原厂配套试剂，质控品由贝克曼库尔特实验室系统（苏州）有限公司提供。染料为瑞氏染料，EDTA-K2真空管为BD公司产品。

1.3 方法

1.3.1 CellaVision DM96系统 严格按LH750血液分析仪操作说明，每天进行清洗及高、中、低值质控品检测，确保其在控后再进行标本检测。标本在15～25℃环境中，用LH750血液分析仪进行检测，对分类中符合复检规则的标本进行推片、染色，选择体尾交界处染色良好的区域，在CellaVision DM96系统油镜计数200个细胞，按形态特征分类，计数各类细胞的百分比。

1.3.2 手工镜检法 依据《全国临床检验操作规程（第3版）》执行［7］，由两位具有多年血细胞形态学检验工作经验的技师进行镜检。

1.3.3 复检规则 利用LH750自动血细胞分析仪报警系统，并参考“国际血液学41条复检规则”及国内文献［7-8］，制订本院白细胞分类计数的复检规则：白细胞小于或等于2×109／L，白细胞大于或等于20×109／L，无分类结果或分类结果不全，中性粒细胞比例首次大于或等于85%，淋巴细胞比例大于或等于60%，单核细胞比例大于或等于16%，嗜酸性粒细胞比例首次大于或等于15%，嗜碱性粒细胞比例首次大于或等于5%，细胞左移报警，原始细胞报警，不典型／异型淋巴细胞报警。

1.4 统计学处理以显微镜手工镜检法为标准，将CellaVision DM96系统对各类细胞直接分类（未校正）与经过人工校正后分类（校正）的两种数据采用微软Office Excel 2007软件进行统计学处理，进行相关性分析。

2 结 果

2.1 各类细胞的相关性结果用CellaVision DM96系统进行自动分类，中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、异型淋巴细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞及原始细胞与显微镜镜检法的未校正及经人工校正后相关系数见表1和图1（以中性分叶核粒细胞为例）。

表1 各类细胞经CellaVision DM96系统分类与手工镜检法的相关系数

图1 中性分叶核粒细胞CellaVision DM96系统与手工镜下分类计数方法的相关性

2.2 不成熟粒细胞的相关性结果将早幼粒细胞、中幼粒细胞和晚幼粒细胞合在一起称为不成熟粒细胞后，用CellaVision DM96系统进行自动分类，与显微镜镜检法的相关系数为0.30，经人工校正后，该相关系数为0.91，见图2。

图2 不成熟粒细胞经CellaVision DM96系统与手工镜下分类计数方法的相关性

3 讨 论

LH750血液分析仪对白细胞分类采用独特的VCS（容量、电导、光散射）原理，操作快捷、结果准确、精度可靠，因此白细胞分类结果可以作为常规血液检查的筛选手段［9］。但对于白细胞分类计数在仪器法出现异常报警及达到复检规则时，仍需通过血液涂片复检进行白细胞形态的观察以及分类计数［10］。传统的外周血涂片显微镜检查方法不仅耗费时间，而且无法实现血涂片检查的自动化。

本研究对CellaVision DM96自动分类结果及操作者校正后的分类与在显微镜下计数100个细胞进行了比较，仪器自动分类与手工法相比，只有中性分叶核粒细胞和淋巴细胞具有较好的相关性（相关系数分别为0.87和0.79）；而操作者校正后分叶及杆状核中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞均具有良好的相关性（相关系数均大于或等于0.93），这就意味着CellaVision DM96系统在中性分叶及杆状核粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的鉴定方面与手工分类有相似的准确性。嗜碱性粒细胞相关性较差，经人工校正后相关系数为0.78。分析其原因可能与涂片的染色有关，一旦涂片染色较深，利用仪器分类可能将某些中性分叶核粒细胞误判为嗜碱性粒细胞。对于单核细胞，众所周知，血涂片这种方法会直接导致其呈现不均一性分布，选择不同的观察区域（CellaVision DM96系统与手工镜检法可能会有不同）及分析的细胞数目都可能导致单核细胞计数的差异。因此，经过校正后单核细胞的相关系数也仅达到0.81。

除了上述五类细胞，对于异型淋巴细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞以及原始细胞等正常外周血中的少见细胞，CellaVision DM96系统与手工镜检法的相关系数较低，经人工校正后，相关系数可分别达到0.84、0.87、0.90、0.84和0.91。分析其原因，可能是这几类细胞计数较少的缘故。另外，对于不成熟粒细胞，还可能是由于将某些细胞计入了其前或后一阶段细胞所致，例如可能将中幼粒细胞计数为晚幼粒细胞。当将早幼粒细胞、中幼粒细胞及晚幼粒细胞合在一起称为不成熟粒细胞后，用CellaVision DM96系统进行分类，经人工校正后，该相关系数达到0.91，也从另一方面证实了这一点。

综上所述，CellaVision DM96系统作为一种全自动血细胞形态鉴定仪器，经人工校正后外周血中常见的五类细胞与传统镜检的金标准具有很好的相关性，能够给临床实验室提供准确、可靠的白细胞分类数据，实现血涂片检查的自动化，适于临床推广应用。

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