西安地区肠道病毒71型手足口病患儿细胞免疫功能的临床研究＊

西安市中心医院感染科 （西安710003） 付建军 王 烨 王巧侠 马朝峰 雷彩虹 赵怡生

手足口病（Hand foot mouth disease，HFMD）是由肠道病毒感染以手足掌、臀部、口腔等部位出现暗红色皮疹或疱疹为临床特征的一种急性传染病。能够引起手足口病的病毒以肠道病毒71型（Enterovirus71，EV71）及柯萨奇病毒 A16型多见［1］，通常情况下，EV71感染者更易发展为重症和危重症。研究报道［2］：在甲型 H1N1感染时，患儿外周血 CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋均下降，提示患儿感染H1N1时其细胞免疫功能受到抑制。本研究通过检测肠道病毒71型手足口病患儿急性期外周血T淋巴细胞亚群，以探讨西安地区肠道病毒EV71手足口病患儿急性期体内细胞免疫的状态及其在发病机制中的作用，为临床判断病情进展、预测预后及临床诊治提供依据。

资料与方法

1 临床资料 随机选取2011年4月至2012年8月在我科收治且确诊为肠道病毒EV71型手足口病的患儿共100例，年龄最大5岁，最小8月。诊断标准参照《手足口病诊疗指南（2010年版）》［3］。据病情将患儿分为重症组：40例（男22例，女18例）；普通组：60例（男33例，女27例）；对照组：20例（男11例，女9例），为同期在本院查体的同龄健康儿童。各组患儿在性别、年龄方面经统计学处理无显著性差异（P＞0．05），具有可比性。

2 检测方法

2．1 标本的收集：经患儿家长知情并同意后，于发病第1～5天由我科一名专职护士采集患儿空腹外周血静脉2ml，并置入EDTA抗凝管。

2．2 仪器和试剂：FAcScalibur流式细胞仪购自美国 Beckon Dickinson公司，BD MUltiTest IMkkit和BD Cailibrit 4Beads（流式细胞仪标准试剂）等全部为进口试剂。

2．3 T淋巴细胞亚群的检测：采集外周静脉血2ml，置入EDTA抗凝后，进样管中加入20ul四色抗体试剂和100ul抗凝全血，充分混匀，室温避光15min，加入2ml 10倍稀释的溶血素，充分混匀。室温避光10min，1500r／min离心5min，弃上清液，用PBS洗涤2次后垂悬，混匀后用流式细胞仪检测。

3 统计学方法 采用SPSS18．0软件进行统计分析，计量资料以±s表示，多组样本比较采用方差分析；计数资料采用卡方检验，以P＜0．05为有显著性差异，P＜0．01为有极显著性差异。

结 果

1 重、轻症手足口病及对照组急性期外周血总T淋巴细胞、抑制性T淋巴细胞以及辅助性T淋巴细胞百分率及CD4＋／CD8＋比值比较 见表1。总T淋巴细胞、抑制性T淋巴细胞以及辅助性T淋巴细胞百分率在重、轻症手足口病组及对照组间具有显著性差异（P＜0．05）。三组间 CD4＋／CD8＋比值比较无显著性差异（P＞0．05）。

表1 三组间的CD3＋CD19－、CD3＋CD8＋、CD3＋CD4＋百分率及CD4＋／CD8＋比值比较（±s）

表1 三组间的CD3＋CD19－、CD3＋CD8＋、CD3＋CD4＋百分率及CD4＋／CD8＋比值比较（±s）

注：分别与轻症手足口病组比较，＊P＜0．01；＊＊P＜0．05；＊＊＊P＞0．05

组 别 n CD3＋CD19－ CD3＋CD8＋ CD3＋CD4＋ CD4＋／CD8＋4±0．384轻症手足口病 60 0．674±0．0927 0．220±0．070 0．387±0．045 1．924±0．602重症手足口病 40 0．604±0．100 0．189±0．064 0．283±0．034 1．949±2．148 F 13．557＊ 3．732＊＊ 199．577＊ 0．301健康对照组 20 0．727±0．067 0．226±0．024 0．504±0．042 2．18＊＊＊

2 重、轻症手足口病组与对照组急性期外周血NK（CD16＋CD56＋）、（BCD19＋）比较 见表2。三组间NK细胞及B淋巴细胞间均无显著性差异（P ＞0．05）。

表2 三组患者NK（CD16＋CD56＋）、B（CD19＋）比较（±s）

表2 三组患者NK（CD16＋CD56＋）、B（CD19＋）比较（±s）

注：＊ 三组间比较，P＞0．05

20 0．132±0．059 0．147±0．067轻症手足口病 60 0．137±0．058 0．147±0．067重症手足口病 40 0．148±0．069 0．170±0．076 F 值 0．591＊ 3．732淋巴细胞健康对照组组 别 n NK细胞 B＊

讨 论

近5年来肠道病毒71型已成为引起手足口病的主要病原体［4］，且肠道病毒71型手足口病患儿病情更易发展为重症或危重症［5］。目前关于EV71感染所致的重症手足口病的发病机制尚不清楚。有研究表明［6］：婴幼儿感染EV71病毒后易形成重症手足口病，可能与其免疫功能不成熟有关。故推测EV71手足口病患儿的发病机制可能与病毒的直接损伤和免疫损伤有关［7］。细胞免疫是人体免疫系统重要的组成部分，人体正常的细胞免疫的维持依赖于辅助T淋巴细胞和抑制T淋巴细胞是否处于一个相对稳定的平衡状态，如果这种平衡状态被破坏，那么机体的细胞免疫功能将发生紊乱。本研究发现：重、轻症手足口病组患儿外周血总T淋巴细胞百分率、辅助性T淋巴细胞百分率、抑制性T淋巴细胞百分率，与对照组相比较有明显下降；重症手足口病组上述三个指标明显低于轻症手足口病组。这表明EV71手足口病患儿细胞免疫功能受到不同程度的抑制，这种抑制程度与患儿病情轻重有关，重症手足口病组细胞免疫功能抑制的程度更加严重。另外我们还发现CD4＋／CD8＋比值在三个实验组间无明显差异，我们推测可能与下列因素有关：①手足病患儿急性期，CD4＋和CD8＋均受到抑制，但抑制的程度一致，故在整体比值上无变化。②可能与我们入选重症的病例偏少，造成偏差所致。

NK细胞是人体重要的自然杀伤细胞，在机体抗病毒自然免疫中发挥着重要作用。而CD16＋CD56＋是活化的NK细胞重要表面分子。我们研究还发现，急性EV71手足口病患儿外周血CD16＋CD56＋在重、轻症组及对照组之间无显著性差异，我们推测其原因是在抗原提呈细胞通过胞膜接触和分泌细胞因子途径上调NK细胞活性时，淋巴细胞通过分泌L1～10等细胞因子下调NK细胞的活性［10］，使其在整体上无明显变化。CD19＋是B细胞特有的表面标志，参与B细胞的活化。本研究结果还发现：CD19＋在重、轻症手足口病及对照组间无明显差异，其原因：当EV71感染患儿时，B细胞虽然受到刺激，但还未开始分裂和分泌大量免疫球蛋白样抗体，或分泌量少，故导致三间无明显差异，故关于B细胞的变化仍需动态检测其变化。

总之，肠道病毒71型手足口病患儿于急性期细胞免疫功能明显受到抑制，因此在密切监测病情的同时，动态检测外周血T淋巴细胞亚群，及时了解和评价患儿细胞免疫功能情况，对那些有重症倾向的患儿进行及早干预和治疗，有可能降低其发展为重症或危重症的发生率，从而降低病死率。

［1］ Solomon T，Lewthwate P，Perea D，et al．Virology epidemiology pathogenesis and control of enterovirus 71［J］．Lancet Infect Dis，2010，10（11）：778－790．

［2］ 储 矗，章 伟，贾 颖，等．甲型H1N1流感患儿细胞免疫特点分析［J］．中国实用儿科杂志，2011，26（3）：187－189．

［3］ 中华人民共和国卫生部．手足口病治疗指南（2010年版）［J］．国际呼吸杂志，2010，30（24）：1473－1475．

［4］ 黄学勇，郭万中，马 宏，等．2009年河南省肠道病毒EV71基因型特征分析［J］．中华预防医学杂志，2010，44（5）：469－471．

［5］ Lin YW，chang KC，Kao CM，et al．Lymphocyte and antibody response reduce enterovirus 71lethality in mice by decreasing tissue viral loads［J］．J Virol，2009，83（13）：6471－6483．

［6］ Wang JN，Yao CT，Yeh CN，et al．Critical management in patients with sever enteroviras 71infection［J］．Pediatr Int，2006，48（3）：250－256．

［7］ 祖 莹，李德发，曹 科，等．CD8＋细胞毒性T细胞的反应质量在EV71HFMD病程中的作用［J］．国际检验医学杂志，2011，32（20）：2328－2333．