银杏达莫注射液对大鼠急性心肌缺血的保护作用*

2014-12-11 08:52
中医研究 2014年10期
关键词:达莫银杏心肌细胞

贾 真

(南阳医学高等专科学校,河南南阳473000)

急性心肌缺血临床可见于心肌梗死、冠状动脉搭桥术后、冠脉痉挛、心搏骤停行心肺复苏后等情况。缺血再灌注后会加重心肌损伤,形成了缺血再灌注损伤。近年研究表明[1],中药能通过抑制炎症细胞的趋化性与浸润,调节细胞因子的分泌及合成,减轻心肌的炎症损伤,从而发挥心肌保护作用。银杏达莫注射液为复方制剂,其成分主要是银杏总黄酮和双嘧达莫,前者可扩张冠脉血管和脑血管、改善心、脑供血,后者可抑制血小板聚集和释放。本研究建立大鼠心肌缺血再灌注模型,从炎症反应方面探讨银杏达莫注射液对缺血再灌心肌的保护机制[2]。

1 材料与方法

1.1 动 物

SD大鼠45只,均为雄性,体质量200~220 g,由郑州大学医学院实验动物中心提供,动物许可证号:SCXK(豫)2013-0009。常规喂养。

1.2 药品与试剂

银杏达莫注射液,贵州益佰制药股份有限公司产品,批号 130508,5 mL/支,5 mL含银杏总黄酮4.5 ~5.5 mg、双嘧达莫 2.2 ~ 2.8 mg。肌酸激酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒,购自南京建成生物工程研究所,批号依次是201305017,20130825。内皮素 -1(ET-1)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)试剂盒,购自中国北京北方生物技术研究所,批号依次是20130809,20130910。

1.3 动物分组与给药方法

将45只大鼠随机分为以下3组,每组15只。①假手术组:只穿线不结扎冠状动脉,腹腔注射生理盐水1μL/g,2次/d,连续注射7 d;②模型对照组即缺血再灌注组:腹腔注射生理盐水1μL/g,2次/d,连续注射7 d;③银杏达莫组:腹腔注射银杏达莫注射液2μL/g,2次/d,连续腹腔注射7 d。各组末次腹腔注射0.5 h后,对大鼠实施麻醉、固定,制备心肌缺血再灌注损伤模型。

1.4 模型的建立

采用质量分数30 g/L的戊巴比妥钠按10μL/g腹腔注射麻醉大鼠,背位固定大鼠于鼠板上。分离气管并插管,用微型人工呼吸机(呼吸频率为53次/min,氧流量20μL/g)正压呼吸,连续记录标准肢体Ⅱ导联心电图。分离右颈总动脉并插管,以备取血用。按现行文献方法[3]制备心肌缺血再灌注模型:在胸骨旁0.5 cm处第3至5肋骨纵行切开1 cm,逐层分离,将第4肋骨剪断,结扎肋间动脉,打开胸腔,分离胸腺,剪开心包,暴露出心脏。轻压右侧胸腔和腹部,以暴露左冠状动脉为标志,在左心耳根部下2 mm处进针,宽度为2~3 mm,深度为1~1.5 mm,避免过多触及心肌和左肺,以0号无损伤丝线穿过心肌浅层,从右肺动脉旁出针,立即将一个直径2 mm的硅胶管放于血管与结扎线之间。假手术组中左冠状动脉前降支下只穿线不结扎,其余2组均结扎左冠状动脉前降支。以结扎后心电图ST段明显抬高、肉眼观察结扎线以下心肌颜色苍白为成功标志,快速将心脏送回原位。结扎30 min后松开结扎线,以抬高的ST段回落1/2以上,左心室前壁紫绀消失为再灌注成功的标志,再灌注60 min。

1.5 检测指标

再灌注结束即刻,从大鼠颈总动脉取血5 mL,离心制备血清,全自动生化仪检测CK-MB、LDH含量,ELISA法按试剂盒说明检测ET-1、TNF-α活性。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 各组大鼠血清CK-MB和LDH含量对比见表1。

表1 各组大鼠血清CK-MB和LDH含量对比 ±s

注:与假手术组对比,*P <0.05;与模型对照组对比,#P <0.05。

组 别 动物数 CK-MB/(U·mL-1) LDH/(U·L-1)15 401.31 ±57.12 12.48 ±3.01模型对照组 15 825.23 ±61.28* 40.32 ±6.13*银杏达莫组 15 665.75 ±40.18# 28.56 ±5.04假手术组#

2.2 各组大鼠血清中ET-1、TNF-a活性对比见表2。

表2 各组大鼠血清中ET-1、TNF-α活性对比

3 讨论

心肌缺血是由于冠状动脉血流减少或中断,不能满足心肌的能量代谢,导致心肌细胞损伤甚至死亡。CK-MB和LDH存在于细胞内,尤以心肌细胞为多。当心肌缺血再灌注损伤时,心肌细胞中CK-MB和LDH大量溢出到血中,使其在血清中水平升高。CKMB可特异性反映心肌细胞损伤程度。血清中CKMB和LDH活性越高,反映心肌损伤程度越重。本实验中,模型对照组大鼠血清中CK-MB和LDH含量比假手术组显著增加,说明模型对照组心肌受损。银杏达莫组CK-MB、LDH含量较模型对照组显著降低,说明银杏达莫注射对大鼠缺血再灌注心肌有保护作用。心肌缺血再灌注损伤的发生机制相关因素很多,其中炎症反应与再灌注损伤关系密切。ET-1是主要由血管内皮细胞产生的一种强有力的血管收缩因子,可诱导血管平滑肌细胞的迁移和增生,并促进动脉粥样硬化的形成,其在血清中含量升高是血管内皮损伤的标志[4]。TNF-α是心肌缺血再灌注损伤早期白细胞和心肌细胞产生的炎症细胞因子,能诱导血管炎症反应的发生,引起内皮功能障碍;TNF-α可增加炎症局部血管通透性,刺激血管内皮细胞和多形核白细胞(PMN)内皮白细胞黏附分子的表达,促进PMN聚集,导致PMN释放活性氧和蛋白水解酶,引起心肌微血管的阻塞和损伤,加重缺血再灌注损伤程度。本实验中,与假手术组对比,模型对照组大鼠血清中ET-1、TNF-α活性显著升高;与模型对照组对比,银杏达莫组血清中ET-1、TNF-α活性显著降低,差别均有统计学意义(P <0.05)。

本研究提示:银杏达莫注射液能通过降低炎症因子水平,防止炎症因子在缺血区血管中黏附、聚集来减轻心肌微血管内皮损伤,从而起到保护缺血心肌的作用。

[1]黄烨,王宗仁.中药干预心肌缺血再灌注炎症反应的研究进展[J].心脏杂志,2009,21(4):592 -594.

[2]包怡敏,刘爱华,张志雄,等.银杏酮酯预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织炎症相关细胞因子含量的影响[J].中西医结合学报,2010,8(4):373-377.

[3]周学武,廖自福,陈菁,等.大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立与评价[J].实验动物与比较医学,2009,20(4):228-232.

[4]赵亚玲,敖虎山.心肌缺血再灌注损伤的研究进展[J].中国循环杂志,2011,26(5):396 -398.

猜你喜欢
达莫银杏心肌细胞
活化石——银杏
左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR鼠心肌细胞损伤和凋亡的影响
活血解毒方对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响
银杏
银杏达莫联合胞磷胆碱钠治疗脑梗塞的效果及对神经功能的影响
论银杏的栽植
冠心舒通胶囊对心肌细胞Ca2+ -CaM-CaMPK Ⅱ δ信号系统的影响
银杏达莫治疗突发性聋的系统评价和Meta分析
银杏
银杏达莫结合早期康复训练护理对脑梗死患者语言及运动功能障碍恢复的效果观察