斑秃患者外周血Th17细胞的检测

柳小婧 徐峰 韩毓梅 盛友渔 缪盈 胡瑞铭 郭霞 齐思思 杨勤萍

斑秃患者外周血Th17细胞的检测

柳小婧 徐峰 韩毓梅 盛友渔 缪盈 胡瑞铭 郭霞 齐思思 杨勤萍

目的分析Th17细胞与斑秃病程、病情等的关系。方法分别抽取斑秃组和健康对照组的外周血，流式细胞仪检测Th17细胞的比例，用SPSS16.0进行统计分析。结果斑秃组60例外周血中Th17细胞占CD4+T细胞的比例（1.33%±0.74%）显著高于30例健康对照组（0.91%±0.54%，P＜0.01）。初发斑秃患者Th17细胞比例显著高于复发患者（P＜0.05），活动期高于非活动期（P＜0.05），病程≤6个月者高于病程＞6个月者（P＜0.01），而头皮脱发面积≤50%者与脱发面积＞50%及全秃和普秃者比较差异无统计学意义。结论外周血Th17细胞的水平与斑秃活动性、疾病复发及病程有关。

斑秃；自身免疫；Th17细胞

Th17细胞是近年来新发现的一类CD4+T细胞亚群，主要分泌白细胞介素17（IL-17），对细胞外抗原发挥促炎症作用，在器官特异性自身免疫性疾病中有独特的作用，其在斑秃中的作用也逐渐受到重视［1］。本研究旨在探讨Th17细胞在斑秃免疫发病机制中的作用。

一、对象与方法

1.对象：2011年1月至2012年3月复旦大学附属华山医院皮肤科脱发专病门诊的斑秃患者60例为斑秃组，均符合Oslen斑秃指南中的诊断标准［2］。排除标准：①妊娠及哺乳期妇女；②有其他系统疾病、精神疾患等病史者；③有其他炎症性、肿瘤性或自身免疫性等皮肤病；④1个月内接受过任何口服药物（糖皮质激素类、复方甘草酸苷等）、注射或照射等治疗；⑤1周内外用过糖皮质激素、米诺地尔等。斑秃组男25例，女35例，年龄（35.05±13.50）岁。健康体检者30例为健康对照组，两组年龄、性别差异无统计学意义。本研究通过医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

2.斑秃的分类与分期：根据Olsen等的分类标准,按严重程度将斑秃分为轻型斑秃（头皮脱发面积＜50%）和重型斑秃（脱发面积＞50%及全秃和普秃）［2］。活动期斑秃定义为脱发区不断扩大或有新的脱发区出现，拔发试验阳性［3］。

3.方法：于早晨8～10时，分别抽取斑秃组和健康对照组肘静脉血4 ml，Ficoll法分离外周血单一核细胞（PBMC），调整细胞密度为4×106/ml，加入培养板，每孔加入佛波酯（PMA）50 μg/L+离子霉素 1 000 μg/L+布雷菲德菌素 A（BFA）10 mg/L（均为美国 Sigma公司产品），于含5%CO2的37℃培养箱中孵育5 h。流式抗体抗人CD4-FITC、抗人IL-17-PE均产自美国eBioscience公司，破膜套装产自美国Invitrogen公司，染色具体步骤参照说明书。FACS Calibur型流式细胞仪（美国BD公司）检测Th17细胞在CD4+T细胞中的比例，以淋巴细胞群设门，激光室工作波长488 nm。每份样品检测2×104个细胞。测定结果采用CellQuest功能软件进行参数获取和数据分析。

4.统计方法：SPSS16.0软件进行数据处理和分析。各组检测数据均以±s表示，统计方法采用两独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

斑秃组外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例为（1.33±0.74）%， 显著高于健康对照组（0.91± 0.54）%（t=2.81，P ＜0.01）。与初发斑秃患者比较，复发患者Th17细胞的比例显著升高（t=2.66，P＜0.05）。活动期患者Th17细胞比例显著高于非活动期（t=2.04，P＜0.05）。而Th17细胞的比例在轻、重型斑秃之间及有无家族史之间，差异均无统计学意义，见表1。斑秃病程≤6个月者Th17细胞的比例（1.55%±0.89%）显著高于病程 ＞6个月者（1.10% ±0.45%，t=2.48，P＜0.05）与健康对照组（0.91% ±0.54%，t=3.44，P＜0.05），而病程 ＞6个月者与健康对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 60例斑秃患者Th17细胞比例与病情的关系

三、讨论

斑秃虽为局限性毛发疾病，但影响人们的生活质量，并可伴有其他自身免疫性疾病［4］。斑秃的免疫学发病机制尚不明确。Lew等［5］研究韩国人群IL-17/IL-17RA多态性和易感性与斑秃的关系时发现，斑秃患者IL-17RA的单核苷酸多态性与健康对照组差异有统计学意义。Giordano等［6］发现斑秃患者IL-17A和肿瘤坏死因子α水平较对照组升高。Tanemura等［7］观察4例斑秃患者皮损发现，真皮内、尤其是毛囊周围有CD4+IL-17A+Th17细胞浸润。我们的研究发现，斑秃患者外周血Th17细胞比例较健康对照显著升高，病程≤6个月患者Th17细胞水平显著高于病程＞6个月患者，活动期高于非活动期，与王博、杨淑霞等［1］发现活动期斑秃患者IL-17升高的结果一致。此外，我们的研究发现，斑秃复发患者Th17细胞比例高于初发患者，提示复发患者的自身免疫状态更加值得注意。

[1]王博,杨淑霞.斑秃患者血清中部分细胞因子研究[J].临床皮肤科杂志,2011,40（6）；332-334.

[2]Olsen E,Hordinsky M,McDonald-Hull S,et al.Alopecia areata investigational assessment guidelines.National Alopecia Areata Foundation[J].J Am Acad Dermatol,1999,40（2 Pt 1）；242-246.

[3]赵辨.中国临床皮肤病学[M].3版.南京；江苏科学技术出版社,2010；1186-1187.

[4]慕彰磊,徐峰,杨勤萍.斑秃患者757例的临床资料分析[J].上海医学,2010,33（7）；653-655.

[5]Lew BL,Cho HR,Haw S,et al.Association between IL17A/IL17RA gene polymorphisms and susceptibility to alopecia areata in the Korean population[J].Ann Dermatol,24（1）；61-65.

[6]Giordano CN,Sinha AA.Cytokine pathways and interactions in alopecia areata[J].Eur J Dermatol,2013,23（3）；308-318.

[7]Tanemura A,Oiso N,Nakano M,et al.Alopecia areata；infiltration of Th17 cells in the dermis,particularly around hair follicles[J].Dermatology,2013,226（4）；333-336.

2014-01-01）

（本文编辑：吴晓初）

Detection of T helper type 17 cells in peripheral blood of patients with alopecia areata

Liu Xiaojing,Xu Feng,Han Yumei,Sheng Youyu,Miao Ying,Hu Ruiming,Guo Xia,Qi Sisi,Yang Qinping.Department of Dermatology,Huashan Hospital,Fudan University,Shanghai 200040,China

；Yang Qinping,Email；dxq93216@medmail.com.cn

ObjectiveTo investigate the relationship of peripheral blood T helper type 17（Th17）cells with the clinical course and severity of alopecia areata（AA）.MethodsPeripheral blood samples were obtained from 60 patients with AA and 30 healthy human controls.Flow cytometry was performed to determine the proportion of Th17 subsets in these samples.Statistical analysis was done by two independent samplest-test with SPSS software version 16.0.ResultsThe proportion of Th17 subsets in peripheral blood CD4+T cells was significantly higher in the AA patients than in the healthy controls（1.33% ±0.74%vs.0.91% ±0.54%,P＜0.01）,higher in patients with initial AA than in those with recurrent AA（P＜ 0.05）,higher in patients with active AA than in those with inactive AA（P＜ 0.05）,higher in patients with a clinical course of＜ or=6 months than in those＞ 6 months （P＜ 0.01）.No significant difference was observed in the proportion of peripheral blood Th17 cells between patients with AA involving no more than 50%of the scalp and those with AA involving more than 50%of the scalp,alopecia totalis or alopecia universalis （P ＞ 0.05）.ConclusionThe level of peripheral blood Th17 cells is associated with the activity,relapse,and clinical course of AA.

Alopecia areata；Autoimmunity；Th17 cells

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.011.012

2012年度中华医学会皮肤性病学分会美能皮肤病学研究基金

200040上海，复旦大学附属华山医院皮肤科

杨勤萍，Email：dxq93216@medmail.com.cn