血栓心脉宁对大鼠血管性痴呆的治疗作用

方圣博 谢湘林 刘 蕾 杜 冰 刘宏雁 (吉林大学药学院药理教研室，吉林 长春 130021)

血栓心脉宁是由丹参、川芎、毛冬青、水蛭、槐花、麝香、冰片、牛黄、人参茎叶皂苷、蟾酥等多种中药材制成的纯中药制剂，具有芳香开窍、活血散瘀的作用，临床上主要用于治疗脑梗死、冠心病、心绞痛等疾病。临床观察显示，血栓心脉宁通过减缓能量代谢、提高脑组织耐缺氧能力、促进建立脑血管侧支循环、改善脑部微循环，防治局部及全脑缺血所致的脑组织损伤，减少坏死面积，恢复缺血所致病变的神经功能〔1，2〕。血栓心脉宁对血管性痴呆(VD)是否有治疗作用，国内文献未见报道。本实验拟探讨血栓心脉宁是否对VD大鼠有治疗作用，为扩大其临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级Wistar大鼠，雌雄各半，220～250 g，合格证号SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大学实验动物中心提供。

1.2 实验药品及仪器 血栓心脉宁(吉林华康药业股份有限公司提供，批号:110901);Morris水迷宫装置:成都泰盟科技有限公司。

1.3 实验方法 采用永久性结扎双侧颈总动脉法制作VD模型，将术后14 d大鼠按体重分为假手术组、模型组及血栓心脉宁组(1.1、2.2 g/kg)。连续灌胃给药8 w后进行水迷宫实验，实验期间继续给药。水迷宫实验连续7 d，前6 d在1、2、3、4象限4个不同的入水点，测定大鼠到达平台的潜伏期、游程、朝向角及平均速度;第7天撤掉平台，测定大鼠在2 min内经过平台的次数、经过有效区的次数、平台停留时间、平台停留距离、有效区停留时间、有效区停留距离、平台停留时间占总时间的百分比、平台停留距离占总路程的百分比、有效区停留时间占总时间的百分比和有效区停留距离占总路程的百分比。水迷宫实验后，快速取鼠脑，甲醛固定，做病理切片，观察大脑皮层、海马的病理变化。

1.4 统计学分析 采用SPSS13.7统计学软件包对数据进行t检验。

2 结果

2.1 Morris水迷宫实验 与模型组比较，血栓心脉宁小剂量组(1.1 g/kg)大鼠第2、5 天到达平台的潜伏期缩短(P＜0.01，P＜0.05)、到达平台的游程缩短(P＜0.05)，第1 ～6 天到达平台的朝向角和游泳速度均无显著变化。血栓心脉宁大剂量组(2.2 g/kg)大鼠第2～6天到达平台的潜伏期缩短(P＜0.05)，第1～6天到达平台的游程明显缩短(P＜0.05)，第1～6天到达平台的游泳速度无显著变化，第3天到达平台的朝向角变小(P＜0.05)。血栓心脉宁小、大剂量组大鼠第7天在2 min内经过平台的次数、经过有效区的次数、平台停留时间、平台停留距离、有效区停留时间、有效区停留距离、平台停留时间占总时间的百分比、平台停留距离占总路程的百分比、有效区停留时间占总时间的百分比和有效区停留距离占总路程的百分比均无显著变化。见表1～表5。

2.2 病理变化 血栓心脉宁小、大剂量组海马神经细胞数无明显减少，细胞变性、坏死、空泡现象较模型组轻，无明显核固缩、深染现象;血栓心脉宁小、大剂量组大脑皮层神经细胞数无明显减少，核固缩、深染及嗜神经细胞现象较模型组减少。血栓心脉宁大剂量组效果更为明显。见图1。

表1 血栓心脉宁对大鼠水迷宫平台潜伏期的影响(s，s)

表1 血栓心脉宁对大鼠水迷宫平台潜伏期的影响(s，s)

与模型组比较:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

组别 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手术组 11 58.24±20.701) 25.95±10.392) 19.58±13.571) 9.20±6.042) 7.73±4.442) 7.06±3.102)模型组 11 82.89±27.19 72.22±37.78 49.31±39.53 45.44±38.53 26.36±21.19 15.01±8.42小剂量组 13 68.77±28.94 34.94±23.562) 27.86±20.99 21.90±21.67 11.99±7.181) 13.00±10.73大剂量组 11 61.87±22.18 35.75±21.091) 20.28±10.851) 18.58±15.541) 12.25±5.851) 8.84±4.981)

表2 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验游程的影响(cm，s)

表2 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验游程的影响(cm，s)

组别 n 第1天6天假手术组 11 1 484.81±453.521)762.57±326.502) 499.63±336.361) 280.00±178.361) 235.00±130.931) 240.35±93.701)模型组 11 2 216.03±1001.72 1 953.00±1257.04 1 481.05±1 199.36 1 246.91±1 223.94 759.84±668.31 558.94±460.92小剂量组 13 1 597.25±665.16 928.49±557.271) 762.03±669.94 641.85±757.85 332.51±183.321) 375.28±341.78大剂量组 11 1 508.72±394.351)835.97±363.611) 518.98±298.381) 416.20±335.041) 305.21±160.461) 253.67±91.471)

表3 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验朝向角的影响(°，s)

表3 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验朝向角的影响(°，s)

组别 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手术组 11 32.33±12.49 49.60±16.05 46.21±13.40 51.30±23.44 38.17±19.49 46.35±26.61模型组 11 22.90±10.29 50.61±24.14 56.06±21.22 59.65±20.56 51.05±19.60 50.17±29.91小剂量组 13 26.38±11.35 37.40±20.58 50.91±23.29 50.57±23.04 53.24±24.15 33.81±19.06大剂量组 11 25.35±9.60 52.09±19.39 35.81±20.661) 49.00±18.781)48.07±36.61 48.79±48.68

表4 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验平均速度的影响(cm/s，s)

表4 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验平均速度的影响(cm/s，s)

组别 n 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天假手术组 11 29.90±6.66 32.94±10.48 31.69±6.83 30.10±6.13 38.17±19.49 46.35±26.61模型组 11 28.04±4.25 29.25±6.83 27.05±3.60 26.69±3.39 51.05±19.60 50.17±29.91小剂量组 13 25.50±5.50 30.87±6.40 29.44±5.12 26.71±5.15 53.24±24.15 33.81±19.06大剂量组 11 26.78±7.14 27.29±6.24 28.88±5.20 27.25±7.06 48.07±36.61 48.79±48.68

表5 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验第7天的影响(s)

表5 血栓心脉宁对大鼠水迷宫实验第7天的影响(s)

组别 n 经过平台次数 经过有效区次数 平台停留距离(cm)平台停留时间(s)有效区停留距离(cm)假手术组 11 6.63±2.761) 10.54±2.58 75.08±40.92 2.86±1.82 797.56±214.45模型组 11 3.90±2.66 9.54±3.72 52.43±38.80 2.13±1.66 653.05±298.00小剂量组 13 4.66±2.67 10.91±4.01 52.27±37.70 2.12±1.54 683.20±269.02大剂量组 11 3.54±2.42 10.00±2.89 42.83±29.79 1.85±1.29 601.49±212.44组别 n 有效区停留时间(s)平台停留时间/总时间(100%)有效区停留时间/总时间(100%)有效区停留距离/总路程(100%)平台停留距离/总路程(100%)假手术组 11 31.43±11.81 2.40±1.53 26.41±9.94 28.53±8.79 2.90±1.53模型组 11 25.94±13.18 1.79±1.41 21.91±11.13 24.09±11.30 2.08±1.67小剂量组 13 28.50±11.11 1.79±1.30 24.10±9.41 26.11±9.99 1.99±1.41大剂量组 11 24.78±8.85 1.56±1.09 20.97±7.42 23.54±7.93 1.68±1.30

图1 各组大鼠脑组织病理学改变(HE，×20)

3 讨论

VD最重要的症状之一是学习记忆功能障碍。在行为学研究方面，Morris水迷宫目前被广泛地应用于检查动物空间学习与记忆能力〔3～5〕。Morris水迷宫测试程序主要分为定位航行试验和空间探索试验两部分〔3，6〕，其中定位航行试验检测动物空间学习能力，空间探索试验主要考察大鼠对原平台的记忆能力。有研究显示〔6〕，大鼠通过多次训练学会找到隐蔽平台，所形成的记忆是一种空间参考记忆，与平台的位置、大鼠自身所处的位置和状态无关，是一种以异我为参照点的参考认知。本实验结果明血栓心脉宁可改善VD大鼠空间学习能力。

完整的海马结构对于空间学习是至关重要的。有报道〔5〕称损害背侧1/3的海马会导致严重的空间记忆障碍。海马CA1区迟发性神经元死亡后动物表现出空间学习障碍。缺血缺氧可导致海马结构的变化，赵霞等〔7〕通过电镜检查指出低氧对海马区神经细胞的结构和功能有一定的损伤作用，导致学习记忆下降。本实验病理结果显示，血栓心脉宁可减轻VD大鼠皮层及海马的病理损害。

脑内胆碱系统及自由基与学习记忆功能关系密切。川芎为血栓心脉宁的主要成分，有研究〔8〕报道，阿魏酸(川芎的主要成分)通过抑制缺血性脑损伤后AChE的活性、增加SOD的活性、降低MDA含量，改善VD大鼠的学习记忆能力。丹参也是血栓心脉宁的重要组成成分之一，索国玲等〔9〕发现复方丹参注射液可明显缩短大鼠Morris水迷宫定向航行实验潜伏期，增加有效区停留时间，并增加脑内AChE、ChAT活性，提示丹参可能通过提高中枢胆碱能系统改善学习记忆功能。本研究证实血栓心脉宁对血管性痴呆有一定治疗作用，作用机制可能与减少VD脑组织自由基损伤、提高脑胆碱能系统有关，其确切机制有待于进一步研究。

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6 胡镜清，温泽淮，赖世隆.Morris水迷宫检测的记忆属性与方法学初探〔J〕.广州中医药大学学报，2000;17(2):117-9.

7 赵 霞，张先钧，张晓岩，等.亚急性高原低氧大鼠海马神经细胞的电镜研究〔J〕.高原医学杂志，2006;16(2):59-60.

8 罗 云，赵海平，张 婧，等.阿魏酸对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制研究〔J〕.药学学报，2012;47(2):256-60.

9 索国玲，唐洪丽，王秀利.丹参对幼年大鼠癫痫持续状态学习记忆及海马ChAT、AChE活性的影响〔J〕.东南大学学报，2007;26(4):271-4.