榕树须总黄酮的抗血栓作用

陈敬民等

摘要：目的评价榕树须总黄酮的抗血栓作用。方法采用小鼠脑偏瘫、电刺激致大鼠血栓模型等试验方法，测定榕树须总黄酮对小鼠脑血栓的保护率、大鼠血栓形成时间；采用肾上腺素加冰浴致小鼠血瘀模型观察榕树须总黄酮对凝血酶时间及纤维蛋白原时间的影响。结果榕树须总黄酮227 g生药/kg能明显促进偏瘫小鼠恢复（P<005），113、227 g/kg显著减缓电刺激大鼠的血管栓塞（P<0001），并延长寒凝血瘀小鼠的凝血酶时间（P<0001、P<001）及纤维蛋白原时间（P<001、P<005）。结论榕树须总黄酮具有较好的抗血栓及改善血瘀小鼠凝血功能的作用。

关键词：榕树须；抗血栓；凝血酶时间；纤维蛋白原时间

中图分类号：R2855文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）10-0069-02

【Abstract】Objective：To evaluate the antithrombotic effect of Ficus Microcarpa total flavonoids. Methods：Brain paralysis model and electrical stimulation-induced rat thrombosis models were used to measure the protection rate of Ficus Microcarpa total flavonoids against the cerebral thrombosis of mice and the thrombosis time of rats. Adrenaline plus ice bath-induced mice stasis model was used to observe the effect of Ficus Microcarpa total flavonoids on their thromboplastin time and fibrinogen time. Results：22.7g crude drug/kg of Ficus Microcarpa total flavonoids could significantly improve the recovery of hemiplegia mice（P<0.05）and 11.3 and 22.7g/kg significantly slowed rat vascular thrombosis caused by electrical stimulation（P<0.001），and extend the thrombin time（P<0.001，P<0.01）and the fibrinogen time（P<0.01，P<0.05）of long cold coagulation and blood stasis mice. Conclusion：Ficus Microcarpa total flavonoids have better antithrombotic effect and can improve the blood stasis function of rats.

【Key words】Ficus Microcarpa，antithrombus，thrombin time，fibrinogen time

榕树须是桑科榕属植物小叶榕（Ficus microarpa Linnf）的气根，具涩肠止泻、止咳化痰、清热解毒、活血止痛之功效；主要产于广西、广东、云南等地，是广西壮族民间习用药材，民间广泛用于咳嗽、哮喘、支气管炎、流行性感冒、急性肠炎、跌打损伤等疾病预防和治疗。本课题组研究发现榕树须水提、醇提[1]或水提物经乙酸乙酯水洗脱部位均有抗脑血栓作用；总黄酮是榕树须含量较多成分之一，其抗脑血栓作用尚未见报道，现报道如下。

1材料

11药物榕树须总黄酮由广西中医药研究院中药室提供。阿斯匹林肠溶片为桂林南药股份有限公司产品，批号：120501。盐酸肾上腺素注射液为远大医药（中国）有限公司产品，批号：130209。

12动物昆明种小鼠，体重18～22 g；Wistar大鼠，体重200～250 g；雌雄各半，SPF级，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2009-0002。

13试剂胶原蛋白为Worthington biochemical corporation产品。水合氯醛为国药集团化学试剂有限公司产品，批号：20090407。血清纤维蛋白原、凝血酶试剂盒均为上海太阳生物技术有限公司产品。

14仪器YLS-14B小动物血栓生成仪，安徽淮北正华生物仪器设备有限公司生产。KHB202血凝仪，济南金浩峰技术有限公司生产。

2方法

21对小鼠体内脑血栓的影响（胶原蛋白法）[1]取小鼠50只，随机分为对照组、阿斯匹林组和各剂量组，每组10只。各药物组每天灌胃给药1次，对照组给予等体积水，连续5d。于末次给药后1h，小鼠尾静脉注射胶原蛋白与肾上腺素混合诱导剂（胶原蛋白90μg/只，肾上腺素9μg/只）。注射后观察15min内小鼠偏瘫未恢复数，计算各组小鼠的脑血栓保护率。

22对大鼠体内血栓的影响（电刺激法）[2]取合格大鼠若干，10%水合氯醛325 mL/kg腹腔麻醉，剥离其右侧颈总动脉15 mm，用YLS-14B小动物血栓生成仪（参数：电流强度08 mA，刺激时间3 min）进行电刺激生成血栓，记录95%栓塞时间。轻揉颈动脉血栓使其复通，缝合手术窗口。手术次日随机分组，分别给予各药物，连续给药5 d，于第5天给药后1 h再次麻醉进行其左右颈动脉血栓测试，记录血栓形成时间，计算各鼠前后血栓变化值，统计各组药物对电刺激大鼠血栓的影响。endprint

23对寒凝血瘀小鼠凝血功能的影响[3]取小鼠60只，随机分为对照组、模型组、阿斯匹林组和各剂量组，每组10只。各药物组每天灌胃给药1次，对照及模型组给予等体积水，连续5 d。于第4天给药后1h，除对照组外其余各组动物皮下注射肾上腺素08 mg/kg，给药后2 h于5度冰水中冰浴4 min，同时皮下再注射肾上腺素08 mg/kg进行寒凝血瘀造模。第5天给药后1h眼眶静脉丛取血，测定血清凝血酶及纤维蛋白原时间，统计各组动物对凝血功能的影响。

24统计学处理胶原蛋白法脑血栓试验采用百分率表示，组间用EXCEL的χ2分析；其余试验采用（x±s）表示，组间采用EXCEL的t检验。

4讨论

脑血栓的发生是在血液黏度增高、血流缓慢或血管内膜损伤条件下，血小板黏附于受损的内皮下胶原组织；同时发生花生四烯酸代谢释放出细胞内颗粒，并通过与纤维蛋白原结合使血小板之间相互黏附、聚集成团而形成。应用胶原蛋白与肾上腺激素或直接电刺激颈总动脉可激活凝血因子和血小板，最终导致血栓形成[4]。本实验发现，榕树须总黄酮可促进因胶原蛋白栓塞引起的偏瘫小鼠恢复、延迟电刺激大鼠颈动脉引起的栓塞发生。肾上腺素合冷刺激的寒凝血瘀模型可引起血小板及红细胞的聚集及纤维蛋白原的增高[5]，榕树须总黄酮能显著延长血瘀小鼠的凝血酶时间、降低血瘀小鼠的纤维蛋白原含量，提示其通过干扰内源性凝血系统因子的活性，使纤维蛋白生成受到抑制，从而减少血栓的发生。

参考文献：

[1]钟正贤，陈学芬，陈敬民，等抗血栓药材有效部位的筛选研究[J].云南中医中药杂志，2007，28（2）：34-35

[2]张君利，贾乘，苑博，等三七复方纳米颗粒剂抑制血栓形成作用及机制初探[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（2）：81-83

[3]王辉，刘刚，罗顺德莲心碱对血小板聚集、凝血功能和血栓形成的影响[J].中国药理学通报，2010，26（6）：768-772

[4]包玉龙，杜佳林，张宏，等大鼠脑血栓动物模型研究进展[J].实验动物科学，2009，26（6）：50-52

[5]谷万里，张俏，史载祥寒凝血瘀证动物模型的研究述评[J].中国中医药信息杂志，2007，14（6）：89-91

（收稿日期：2014-06-16）endprint

23对寒凝血瘀小鼠凝血功能的影响[3]取小鼠60只，随机分为对照组、模型组、阿斯匹林组和各剂量组，每组10只。各药物组每天灌胃给药1次，对照及模型组给予等体积水，连续5 d。于第4天给药后1h，除对照组外其余各组动物皮下注射肾上腺素08 mg/kg，给药后2 h于5度冰水中冰浴4 min，同时皮下再注射肾上腺素08 mg/kg进行寒凝血瘀造模。第5天给药后1h眼眶静脉丛取血，测定血清凝血酶及纤维蛋白原时间，统计各组动物对凝血功能的影响。

24统计学处理胶原蛋白法脑血栓试验采用百分率表示，组间用EXCEL的χ2分析；其余试验采用（x±s）表示，组间采用EXCEL的t检验。

4讨论

脑血栓的发生是在血液黏度增高、血流缓慢或血管内膜损伤条件下，血小板黏附于受损的内皮下胶原组织；同时发生花生四烯酸代谢释放出细胞内颗粒，并通过与纤维蛋白原结合使血小板之间相互黏附、聚集成团而形成。应用胶原蛋白与肾上腺激素或直接电刺激颈总动脉可激活凝血因子和血小板，最终导致血栓形成[4]。本实验发现，榕树须总黄酮可促进因胶原蛋白栓塞引起的偏瘫小鼠恢复、延迟电刺激大鼠颈动脉引起的栓塞发生。肾上腺素合冷刺激的寒凝血瘀模型可引起血小板及红细胞的聚集及纤维蛋白原的增高[5]，榕树须总黄酮能显著延长血瘀小鼠的凝血酶时间、降低血瘀小鼠的纤维蛋白原含量，提示其通过干扰内源性凝血系统因子的活性，使纤维蛋白生成受到抑制，从而减少血栓的发生。

参考文献：

[1]钟正贤，陈学芬，陈敬民，等抗血栓药材有效部位的筛选研究[J].云南中医中药杂志，2007，28（2）：34-35

[2]张君利，贾乘，苑博，等三七复方纳米颗粒剂抑制血栓形成作用及机制初探[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（2）：81-83

[3]王辉，刘刚，罗顺德莲心碱对血小板聚集、凝血功能和血栓形成的影响[J].中国药理学通报，2010，26（6）：768-772

[4]包玉龙，杜佳林，张宏，等大鼠脑血栓动物模型研究进展[J].实验动物科学，2009，26（6）：50-52

[5]谷万里，张俏，史载祥寒凝血瘀证动物模型的研究述评[J].中国中医药信息杂志，2007，14（6）：89-91

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23对寒凝血瘀小鼠凝血功能的影响[3]取小鼠60只，随机分为对照组、模型组、阿斯匹林组和各剂量组，每组10只。各药物组每天灌胃给药1次，对照及模型组给予等体积水，连续5 d。于第4天给药后1h，除对照组外其余各组动物皮下注射肾上腺素08 mg/kg，给药后2 h于5度冰水中冰浴4 min，同时皮下再注射肾上腺素08 mg/kg进行寒凝血瘀造模。第5天给药后1h眼眶静脉丛取血，测定血清凝血酶及纤维蛋白原时间，统计各组动物对凝血功能的影响。

24统计学处理胶原蛋白法脑血栓试验采用百分率表示，组间用EXCEL的χ2分析；其余试验采用（x±s）表示，组间采用EXCEL的t检验。

4讨论

脑血栓的发生是在血液黏度增高、血流缓慢或血管内膜损伤条件下，血小板黏附于受损的内皮下胶原组织；同时发生花生四烯酸代谢释放出细胞内颗粒，并通过与纤维蛋白原结合使血小板之间相互黏附、聚集成团而形成。应用胶原蛋白与肾上腺激素或直接电刺激颈总动脉可激活凝血因子和血小板，最终导致血栓形成[4]。本实验发现，榕树须总黄酮可促进因胶原蛋白栓塞引起的偏瘫小鼠恢复、延迟电刺激大鼠颈动脉引起的栓塞发生。肾上腺素合冷刺激的寒凝血瘀模型可引起血小板及红细胞的聚集及纤维蛋白原的增高[5]，榕树须总黄酮能显著延长血瘀小鼠的凝血酶时间、降低血瘀小鼠的纤维蛋白原含量，提示其通过干扰内源性凝血系统因子的活性，使纤维蛋白生成受到抑制，从而减少血栓的发生。

参考文献：

[1]钟正贤，陈学芬，陈敬民，等抗血栓药材有效部位的筛选研究[J].云南中医中药杂志，2007，28（2）：34-35

[2]张君利，贾乘，苑博，等三七复方纳米颗粒剂抑制血栓形成作用及机制初探[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（2）：81-83

[3]王辉，刘刚，罗顺德莲心碱对血小板聚集、凝血功能和血栓形成的影响[J].中国药理学通报，2010，26（6）：768-772

[4]包玉龙，杜佳林，张宏，等大鼠脑血栓动物模型研究进展[J].实验动物科学，2009，26（6）：50-52

[5]谷万里，张俏，史载祥寒凝血瘀证动物模型的研究述评[J].中国中医药信息杂志，2007，14（6）：89-91

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