地格达-4对酒精性脂肪肝模型大鼠氧化指标的影响*

乌日图那顺 包纳日斯

（1.北京中医药大学基础医学院，北京 100029；2.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110）

依据酒精性脂肪肝发病过程中的临床症状，从蒙医学理论角度可将其分为3个阶段，即初期、中期和晚期。初期属蒙医学“未消毒症”范畴，是因为长期大量服用酒精而导致胃中毒，出现恶心、呕吐、泛酸、食欲减退，胃部出现烧灼感等“希拉”增盛性症状。而中期和晚期属“通拉嘎未消症”范畴，主要出现非正常性脂肪过盛相关的症状和体征，如腹部肥胖、四肢消瘦、食欲减退、面色灰暗、乏力等。地格达-4是治疗希拉增盛性疾病的代表性方药［1］，有抑“希拉”之功效，主治“希拉”增盛所致的胃脘疼痛等症。因此将其选定为自然科学基金课题 “蒙医三根调节法及其代表性方剂对酒精性脂肪肝的作用机制研究”当中调节“三根”之一“希拉”的代表性方剂。本次试验旨在观察地格达-4影响酒精性脂肪肝相关指标而发挥调节“希拉”作用的机理，从而为系统阐明蒙医三根法治疗酒精性脂肪肝的作用机理奠定基础。

1 材料与方法

1.1 动物 雄性Wistar大鼠，80只，体质量150～170 g。动物合格证号：SCXK-（军 2012-0004）。

1.2 试药与仪器 地格达-4［主要成分为肋柱花、沙蓬、肉豆蔻、栀子，由国家蒙药制剂中心内蒙古国际蒙医医院制剂室提供，批准号：呼卫注字（97）001-013］，硫普罗宁片（山西云中制药有限责任公司生产，国药准字 H20093445）， 超氧化物歧化酶 （SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）试剂盒（由上海沪尚生物科技有限公司提供），酶标仪。

1.3 分组与造模 大鼠随机分为2组，空白组15只，以蒸馏水每日0.5 mL/100 g连续灌胃8周；造模组65只，以56°白酒逐步增加酒精量灌胃，前3 d稀释为15%的酒精含量以0.5 mL/100 g灌胃，再稀释为30%酒精含量灌胃3 d，其后增加到45%的酒精含量灌胃8周［2-3］。8周后空白和造模组每组随机选取3只鼠处死后取肝脏，制成肝组织病理切片，显微镜下观察，判定是否造模成功。然后将成模大鼠随机分为模型对照组、硫普罗宁组和地格达-4高、中、低剂量组。

1.4 给药方法 空白组和模型对照组以1%羧甲基纤维素钠溶液每日0.5 mL/100 g连续灌胃4周；地格达-4 高、中、低剂量组分别用 1400、700、350 mg/kg的地格达-4，以1%羧甲基纤维素钠溶液配制成混悬溶液后每日0.5 mL/100 g连续灌胃4周；硫普罗宁组用40 mg/kg的硫普罗宁片研磨后以1%羧甲基纤维素钠溶液配制成混悬溶液，每日0.5 mL/100 g连续灌胃4周；同时继续造模。

1.5 标本采集与检测 4周后各组同时禁食不禁水16 h，用20%乌拉坦0.5 mL/100 g腹腔注射麻醉，开腹，腹主动脉采血，3000 r/min离心，取血清，-20℃冷藏备用；取肝组织用锡纸包裹-80℃冷藏备用。肝组织制成匀浆，2000 r/min离心10min，取上清液；-20℃冰箱内取出血清，自然融化，然后用酶标仪检测SOD、MDA、GSH-px等指标。

1.6 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件分析。计量资料以（）表示，各组间数据比较采用独立样本t检验。P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 地格达-4对各组大鼠肝组织SOD、MDA的影响见表1。除地格达-4低剂量组外，其余各组肝组织SOD、MDA水平与模型组比较，均有显著差异 （P＜0.01）；地格达-4中剂量组和疏普罗宁组肝组织SOD、MDA与地格达-4高剂量组比较有显著差异 （P＜0.01）。

表1 各组大鼠肝组织SOD、MDA水平比较（mmol/g，）

表1 各组大鼠肝组织SOD、MDA水平比较（mmol/g，）

与模型对照组比较，△P＜0.01；与地格达-4高剂量组比较，☆P＜0.01。下同。

2.2 地格达-4对各组大鼠肝组织和血清中GSH-px的影响 见表2。除地格达-4低剂量外组，其余各组肝组织和血清中GSH-px水平与模型对照组比较，均有显著差异（P＜0.01）；而且地格达-4中剂量组与高剂量组比，肝组织和血清中GSH-px也有显著差异（P＜0.01）。

表2 各组大鼠肝组织和血清中GSH-px水平比较（）

表2 各组大鼠肝组织和血清中GSH-px水平比较（）

2.3 地格达-4对各组大鼠血清SOD、MDA的影响见表3。空白组、硫普罗宁组、地格达-4高、中剂量组血清SOD、MDA水平与模型对照组比较，均有显著差异（P＜0.01）；并且地格达-4中剂量组与高剂量组比两项指标也有显著差异（P＜0.01）；而地格达-4低剂量组与模型对照组比，只有血清MDA有显著差异 （P＜0.01）。

表3 各组大鼠血清SOD、MDA水平比较（mmol/L，）

表3 各组大鼠血清SOD、MDA水平比较（mmol/L，）

3 讨 论

SOD、CSH-px和MDA在酒精性脂肪肝的发生、发展和转归当中起着非常重要的作用。有研究表明［4］，自由基增加、肝细胞过度氧化是发生酒精性脂肪肝的关键所在。因为乙醛和自由脂肪酸浓度的增加可促进过氧化物酶体β的氧化，释放大量的高活性自由基，这些使脂质过氧化，细胞膜过氧化，释放4-羟基壬烯醛（NXN）和MDA。其中NXN趋化中性粒细胞产生炎症，MDA则作用与核因子NF-κB，使致炎因子表达，释放白介素-8、细胞间黏附分子-1和肿瘤坏死因子-α等。同时NXN和MDA均可与细胞内其他蛋白发生交联，形成酒精性透明小体，二者又可激活贮脂细胞而形成脂肪肝，还能促进胶原纤维的合成，形成纤维化，甚至肝硬化。而SOD则能催化氧自由基歧化反应，清除自由基，使细胞免受损伤。SOD可催化O2-生成O2和H2O2，H2O2则由 CSH-px 进一步催化，变成 O2和 H2O2，从而防止体内自由基引起膜脂质过氧化［5］。而MDA则为脂质过氧化反应的终产物，它具有强毒力性，与枯否细胞及肝细胞释放的细胞因子一起介导肝细胞死亡、Mallory小体形成、肝星状细胞活化和肝纤维化形成等等，因此，升高SOD含量、降低和清除MDA对阻断脂肪肝的形成与发展极其重要［6］。

而本研究结果表明地格达-4能显著升高酒精性脂肪肝模型大鼠血清和肝组织当中的SOD和CSH-px，同时能显著降低MDA的含量。这提示地格达-4具有抗氧化作用，它是通过增高SOD和CSH-px，降低MDA而起到保护肝细胞氧化损伤的。并且从研究结果可以得知对于血清SOD的作用，中剂量地格达-4优于高剂量地格达-4，而低剂量地格达-4则对各项指标几乎无作用。对于肝组织中SOD的作用，高剂量地格达-4优于中剂量地格达-4，也优于硫普罗宁。而对于肝组织中CSH-px的作用，中剂量地格达-4则优于高剂量地格达-4，对MDA的作用两者则相同。因此综合考量上属结果，中剂量地格达-4应作为首选治疗剂量，也就是相当于人体的常规剂量。

综上所述，地格达-4具有确切的抗肝细胞氧化损伤的作用。抗氧化、清除自由基是地格达-4治疗酒精性脂肪肝的主要作用机理之一，并且从蒙医学理论角度看，地格达-4是治疗“希拉”增盛性疾病的代表性方药。酒精性脂肪肝则是由辛辣、热性物质酒精引发的，属“齐素、希拉”增盛性、热性疾病范畴。从而可以推断出“希拉”增盛与体内自由基增多、发生氧化反应成正相关关系，有待进一步研究阐明。

［1］杨·阿敏.方剂学［M］.沈阳：辽宁民族出版社，1995：174.

［2］张伟.大 鼠酒精性脂肪肝模型的建立［J］.安徽医药，2012，16（7）：885.

［3］罗先钦，徐晓玉，黄崇刚，等.决明子总蒽醌对酒精性脂肪肝大鼠肝组织脂质过氧化与PPAR-γ表达的影响［J］.中国中药杂志，2012，36（12）：1654-1659.

［4］玛·安巴嘎，博·萨仁琪琪格.赫依-希拉-巴达干与细胞膜的关系（新蒙文版）［M］.乌兰巴托：蒙古国乌兰巴托出版社，2002：65-69.

［5］杨牧祥，张一昕，耿兰书，等.脂肝泰胶囊对高脂血症性脂肪肝患者和的影响［J］.河北中医药学报，2002，17（4）：1.

［6］梅全喜，孔祥廉，钟希文，等.昆藻调脂胶囊对高脂血症脂肪肝大鼠血清和肝组织及含量的影响［J］.中医药学刊，2006，24（11）：2031.