气相色谱测定十滴水中樟脑和桉油精方法的改进

刘元媛，于世海，胡佳，何涛

(1.辽宁医学院，辽宁 锦州 121001;2.辽宁康辰药业有限公司，辽宁 丹东 118301;3.锦州市药品检验所，辽宁 锦州 121000)

气相色谱法是测定药物挥发性成分的主要分析手段，在药物分析方法中占有重要地位。我校已开展了近十年的气相色谱分析实验，但方法陈旧，并且实验用药已经退出市场，需要选择新的实验方法及药物来满足学生实验的教学需要。本课题组进行了多项研究，先后尝试了藿香正气水、复方丹参片、十滴水中挥发性成分的测定研究，并摸索了在不同气相色谱柱上的分离效果［1］，最终确立了采用SE-54 毛细管柱测定十滴水中樟脑和桉油精含量的方法。该方法简便，精密度、重复性高，阴性液无干扰，可应用于学生实验教学。

1 仪器与试药

日本岛津GC-2010 气相色谱仪;AR2140 电子分析天平。樟脑对照品(北京北纳创联生物技术研究院，批号76-22-2);桉油精(中国药品生物制品检定所，批号:110788-201105);十滴水样品(广西慧宝源制药有限公司，批号 130325;北京海德润制药有限公司，批号130403);乙纯(分析纯)，水为重蒸水。

2 实验条件

2.1 色谱条件的选择［1-5］

色谱柱:SE-54 石英毛细管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm);程序升温(70 ℃～160 ℃，升温速率为8 ℃/min);汽化室温度230 ℃;检测器:FID，温度240 ℃;载气:高纯氮气 (压力为120 kP);分流进样 (分流比为40∶1);内标物为环己酮，进样量1 μL。

2.2 内标溶液制备

精密量取环己酮适量，加70% 乙醇制成每1 mL 含10.481 mg 的溶液，作为内标溶液。

2.3 对照品溶液制备

精密称取樟脑、桉油精对照品适量，加70%乙醇制成每1 mL 含樟脑0.756 mg、含桉油精0.831 mg 的溶液，作为对照品溶液。

2.4 供试品溶液制备

取十滴水样品10 瓶，混匀，精密量取2.0 mL，置25 mL 量瓶中，精密加入内标液2.0 mL，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 阴性液的制备

按照处方工艺，制备缺樟脑和桉油精的样品，并按照供试品溶液的制备方法处理样品，得到樟脑和桉油精的阴性液。

2.6 方法学考察

2.6.1 系统适用性实验 分别取对照品溶液及供试品溶液各1 μL，按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪，记录气相色谱峰。结果显示，溶剂峰、环己酮峰、桉油精峰、樟脑峰均完全分离，理论塔板数按樟脑计不低于50 000。

2.6.2 线性关系考察 精密取樟脑、桉油精对照品适量，加70% 乙醇制成每1 mL 含樟脑5.671 1 mg、含桉油精7.479 0 mg 的溶液，分别精密量取该溶液1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 mL 置5 mL 量瓶中，分别精密加入内标液0.4 mL，加70%稀释至刻度，摇匀。精密吸取各溶液1 μL，按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪，记录色谱峰。以对照品浓度为横坐标，对照品与内标物峰面积之比为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程分别为:Y=2.091X-0.002 9，r=0.999 8，Y=1.201 9X-0.183 1，r=0.999 7。结果显示，樟脑在0.226 8～1.134 2 mg·mL-1范围内线性良好，桉油精在0.299 2～1.495 8 mg·mL-1范围内线性良好。

2.6.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液1 μL，按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪，重复进样5 次，测定樟脑、桉油精峰面积与内标物的峰面积比值，求得相对标准偏差RSD 分别为0.6%、0.5%。

2.6.4 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液1 μL，分别于0，2，4，6，8 h 按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪，记录色谱图，求得樟脑、桉油精峰面积与内标物的峰面积比值的标准偏差RSD 分别为0.7%、0.8%，结果表明樟脑、桉油精在8 h 内稳定性良好。

2.6.5 重复性试验 取同一批样品5 份，按照“供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液，分别吸取各供试品溶液1 μL，按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪，记录色谱图，求得樟脑、桉油精峰面积与内标物峰面积比值的标准偏差RSD 分别为1.8%、2.1%。

2.6.6 加样回收率试验 精密量取5 份含量已知的同一批号样品(樟脑的含量为22.97 mg·mL-1、桉油精含量为7.86 mg·mL-1)溶液各0.2 mL，置于10 mL 量瓶中，分别精密加入樟脑对照品溶液 (浓度为1.374 mg·mL-1)3.0 mL、加入桉油精对照品溶液 (浓度为2.493 mg·mL-1)0.3 mL、加入内标液0.2 mL，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取各溶液1 μL，按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪，记录色谱图，结求得樟脑的平均加样回收率为98.3%，RSD 为1.9%，桉油精的平均加样回收率为97.6%，RSD 为2.1%。

2.7 样品测定 取各批号样品，按照“供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液，分别吸取各供试品溶液1 μL，按“2.1”项下色谱条件注入气相色谱仪，记录色谱图，求得樟脑、桉油精的含量结果见表1。

表1 十滴水中樟脑、桉油精含量测定结果

3 讨 论

结合目前气相色谱应用的实践情况，本文选用了程序升温法同时测定两种物质的含量，使教学与实践紧密结合，若考虑实验成本也可以采用程序升温法测定其中一个成分的含量。实验用药选用十滴水，价格便宜，配制样品采用70%乙醇为溶剂，操作方便、无污染。

本实验分别考察了DB-WAX 毛细管色谱柱及SE-54毛细管气相色谱柱，结果显示在DB-WAX 毛细管色谱柱上分离效果不佳，而在SE-54 毛细管气相色谱柱上获得了良好的分离效果，因此选用SE-54 为测定用柱。

本实验分别考察了以环己酮、水杨酸甲酯为内标物，结果显示样品阴性液在水杨酸甲酯出峰处有干扰，因此选用环己酮为内标物。本方法采用的色谱条件与中国药典中十滴水的测定条件不同，但对样品的含量检测结果准确度较高，结果符合药典的相关要求，对科研教学具有一定的参考意义。

图1 溶剂乙醇气相色谱图

图2 环己酮气相色谱图

图3 樟脑、桉油精对照品气相色谱图

图4 十滴水样品气相色谱图

图5 樟脑桉油精阴性液气相色谱图

［1］卢华，张国宏，蒋受军，等.气相色谱法测定十滴水中樟脑和桉油精含量的研究［J］.中成药，2008，30 (7):997-999.

［2］中国药典2010 年版一部［S］.2010:301.

［3］王术玲，曾元儿，张迪，等.《中药制剂分析》气相色谱法含量测定的实验教学改进［J］.中国中医药现代远程教育，2010，8 (23):43-44.

［4］王燕，张雅慧，格桑索朗，等.毛细管气相色谱内标法同时测定藏木香中土木香内酯、异土木香内酯的含量［J］.药物分析杂志，2009，29 (12):2058-2060.

［5］靳然，于密密，赵百孝，等.气相色谱法测定艾叶4 个挥发性成分的含量［J］.药物分析杂志，2013，33 (6):1033-1036.