盐酸氟乙基硫胺素的药效学研究

覃宗华，李早龙

（广州先至饲料添加剂有限公司，广州510663）

由艾美耳属原虫所引起的球虫病是严重危害养殖业生产的重要动物疾病，全世界因球虫病所造成的经济损失每年约20亿英镑［1］，每年用于防治鸡球虫病的药物费用达数亿元人民币，占鸡病防治费用的1／3左右。鸡球虫病是由一种或多种艾美耳属球虫寄生于鸡的肠道不同部位所引起的一种肠道细胞内寄生性原虫病［2］。艾美耳球虫的生物学特点决定其难以消灭，只要有猪、鸡等的集约化养殖，就不可避免球虫的感染和球虫病的流行。目前动物球虫病的控制主要依赖抗球虫药物，而抗球虫药物长期广泛的使用已导致耐药性产生，尤其是鸡球虫，且表现出与同类药物或作用机理相同的其他药物产生一定程度的交叉耐药性，使药物的疗效下降［3］，所以迫切需要研制新的、广谱高效的抗球虫药。盐酸氟乙基硫胺素（Fluoroethyl Thiamine Hydrochloride，FTH）是广州先至饲料添加剂有限公司研制的一种新的抗球虫药物，并已获得了其研制及应用的专利［4］。化学名为氯化3-［（4-氨基-2-乙基-5-嘧啶基）-亚甲基］-5-（2-氟乙基）-4-甲基噻唑盐酸，易溶于水，在乙醇中微溶，不溶于三氯甲烷。研究表明FTH的毒性很小，对堆型、巨型等艾美耳球虫均有效。本试验通过给鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫，观察比较盐酸氟乙基硫胺素的抗球虫效果，以期为临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物与饲料 1日龄岭南黄肉鸡，购自广东省农业科学院畜牧所家禽研究室。肉鸡全价配合饲料，购自惠州元太饲料有限公司，不含任何抗菌药及抗球虫添加剂。

1.1.2 试验药品 盐酸氟乙基硫胺素（FTH），批号20130605，含量98.0%，广州先至饲料添加剂有限公司研制；氨丙啉、尼卡巴嗪、马杜拉霉素，购自SIGMA公司，批号分别为 20130214、20130306、20130223。

1.1.3 虫株 柔嫩艾美耳球虫GD株，广州英赛特生物科技有限公司保存，分离自广东江门地区某鸡场。试验前用鸡繁殖扩增，收集新鲜卵囊孢子化后4℃保存备用。

1.2 方法

1.2.1 试验分组 将14日龄时镜检粪便中无球虫卵囊的雏鸡称重后，剔除瘦弱或体重过大鸡，选择体重差异在20 g以内的健康鸡，随机分成8组，每组试验鸡30只，进行编号。第1组不给药不攻球虫作为阴性对照组，第2组攻球虫但不给药作为模型组，第3～8组分别按表1添加不同的抗球虫药物。试验分组当天按表1分别饲喂含不同药物的饲料，自由采食并饲喂到试验结束。

表1 试验动物分组

1.2.2 试验方法 除阴性对照组外，各试验组每只鸡在分组第2天经嗉囊灌服柔嫩艾美球虫孢子化卵囊2.5×105个。试验期间，每天观察记录鸡的精神状态、饮食、发病、血便情况及死亡数等。感染后第5天对各组鸡只进行血便记分，第7天各组分别称重后剖杀全部鸡只，观察盲肠病变，并进行盲肠内卵囊计数，计算抗球虫指数（Anticoccidial Index，ACI）。

1.2.3 抗球虫效果评价标准 死亡情况：记录各试验组的死亡鸡数，病理剖检确定死因，计算存活率。

血便记分：按 Morehouse和 Baron（1970）标准［5］，即0分，无血便；1分，少于25%的粪便带血；2分，25%～50%的粪便带血；3分，50%～75%的粪便带血；4分，多于75%的粪便带血。

病变记分：感染后第7天宰杀鸡，参照Johnson和Reid（1970）［6］的病变记分进行盲肠病变记分，并将病变记分换成病变值。病变值＝各试验组的平均病变记分×10。

卵囊计数和卵囊值［7］：刮取盲肠内容物用10%次氯酸钠消化15 min后，卵囊计数采用血球计数板法［5］，并换算出盲肠中的卵囊数量，卵囊数量与卵囊值之间的换算关系见表2。

表2 卵囊数与卵囊值的换算关系

抗球虫指数 （ACI）：按照下述公式计算，ACI＝（相对增重率+存活率）×100-（病变值+卵囊值）。抗球虫药效力评价标准：ACI＜120，不宜作抗球虫药；ACI在120～160之间，抗球虫效力低；ACI在160～180之间，中度抗球虫效力；ACI在180以上，高效抗球虫效力［8］。

2 结果

2.1 试验鸡临床症状 阳性对照组：感染后第3天，鸡采食量下降、精神沉郁，第4天出现血便，共死亡10只。剖解死亡鸡见盲肠高度肿大，内充满血凝块，肠粘膜见大量出血点。存活鸡羽毛松乱，双翅下垂，少数鸡缩颈闭眼。阴性对照组：鸡食欲精神都正常，未见血便等异常。各用药试验组：50 mg／kg盐酸氟乙基硫胺素组鸡群出现少数采食量下降、精神沉郁，第4天出现少量血便，但未见死亡；125 mg／kg和 200 mg／kg盐酸氟乙基硫胺素组的鸡群食欲精神都正常，无血便或死亡等异常；125 mg／kg氨丙啉组和尼卡巴嗪组采食量略微减少，少数鸡体重增长减慢，未见血便或死亡；5 m／kg马杜拉霉素组采食量略微减少，个别鸡出现精神沉郁，但无血便及死亡。

2.2 试验组鸡的盲肠平均病变记分 阳性组的平均病变计分为32.6分，氨丙啉组为4分，马杜拉霉素组为6分，50 mg／kg盐酸氟乙基硫胺素组为11.2，盐酸氟乙基硫胺素组（高、中剂量）、尼卡巴嗪组及阴性组均为0分。

2.3 试验组的相对增重率、存活率、病变值、卵囊值和ACI 结果见表3。50 mg／kg盐酸氟乙基硫胺素组ACI值为168.4，属中效抗球虫药物；高、中剂量组盐酸氟乙基硫胺素、氨丙啉、尼卡巴嗪及马杜拉霉素均属于高效抗球虫药物，ACI值分别为200.8、201.6、191.2、192.9 和 186.7，但盐酸氟乙基硫胺素在病变值和卵囊值方面均优于氨丙啉和马杜拉霉素，且在增重方面优于尼卡巴嗪。

表3 盐酸氟乙基硫胺素及对照药物的抗球虫效果结果

3 分析与讨论

50 mg／kg盐酸氟乙基硫胺素抗球虫效果低于125 mg／kg、200 mg／kg 剂量组，但高、中剂量组无明显差异，表明抗球虫效果与给药剂量有关。125 mg／kg盐酸氟乙基硫胺素组鸡群食欲精神都正常，无卵囊排出，增重率无影响，血便和盲肠病变记分均为0分，表明体内球虫的繁殖受到抑制或被杀灭，ACI值为201.6，属于高效抗球虫药物，能够很好地控制球虫病；而125 mg／kg氨丙啉组有少量卵囊排出，相对增重率稍降低，盲肠轻度病变，ACI值为191.2；125 mg／kg尼卡巴嗪组相对增重率降低，无卵囊排出及盲肠病变，ACI值为192.9；5 mg／kg马杜拉霉素组有少量卵囊排出，相对增重率稍降低，盲肠有病变，ACI值为186.7。表明盐酸氟乙基硫胺素在抗鸡柔嫩艾美球虫效果方面优于氨丙啉、马杜拉霉素及尼卡巴嗪。

氨丙啉的作用机理是竞争性抑制球虫对硫胺素（维生素B1）的摄取，峰期为第3天，主要抑制球虫第一代裂殖体，对有性繁殖阶段和子孢子也有抑制作用；尼卡巴嗪的药理作用峰期为第4天，抑制球虫第二代裂殖体；马杜拉霉素是一价单糖苷离子载体抗球虫药，能干扰球虫的早期阶段即孢子期和第一代裂殖体［9］。盐酸氟乙基硫胺素的作用机理与氨丙啉相似，取代硫胺素，干扰虫体细胞的糖代谢。本试验结果表明盐酸氟乙基硫胺素作为新型抗球虫药其效果优于氨丙啉、马杜拉霉素及尼卡巴嗪。盐酸氟乙基硫胺素与其他抗球虫药的化学结构和作用峰期不同，可定期或季节性地与其他性质不同的抗球虫药穿梭使用，这样不仅减少或避免耐药性的产生，而且可提高药物的防治效果［10］。

抗硫胺素类药物主要有二甲硫胺、氯硫胺、氨丙啉等。二甲硫胺最早由日本研制合成，我国也由东北制药总厂研制成功，并被农业部批准生产，禁用于产蛋鸡，抗球虫谱窄［11］。孙宝贵等研究结果显示饲料添加1250 mg／kg二甲硫胺，鸡的食欲明显减少，剂量增至1875 mg／kg时出现动物死亡［12］。氨丙啉对柔嫩、堆型艾美尔球虫效果较好，鸡和火鸡的艾美尔球虫多数对氨丙啉有耐药性，在临床上常与乙氧酰胺苯甲酯等其他药物组成复方来增强其抗虫效果［13］。盐酸氟乙基硫胺素是新研制的专利化学物（ZL201210151345.8），研究表明其在抗球虫谱、毒性等方面明显优于同类药物。

因抗球虫药的长期滥用和球虫本身生物学特性的改变，致使鸡球虫对抗球虫药物的敏感性降低或无效。球虫可通过代谢途径变化对药物进行修饰，并调动自我防御机制，从而使药物失去其活性［14］。现代理论认为，耐药性的产生是在药物的选择压力下，突变个体的多次重复选择，将微弱的耐药性积累的结果。球虫也能够在生长和繁殖时发生突变，有些突变对球虫生存和繁殖有利，这样的个体在药物的作用下能够生存下来，而没有发生突变的个体会被抑制或杀死。经过多次这样的过程，就产生了对抗球虫药的耐药性［15］，所以需要研发新的高效抗球虫药。盐酸氟乙基硫胺素属于新型高效抗鸡球虫药物，有广阔的市场应用前景。

［1］Guyou-Fang， Guoguang-Fu， Chenhui-Lian.Resistance of five Eimeria tenella isolates to four anticoccidiosis drugs ［J］.Acta Parasitol Med Entomol Sin， 2006， （3）： 185-189.

［2］Del Cacho E.Effect of the quinolone coccidiostat decoquinate on the rearrangement of chromosomes of Eimeria tenella ［J］.International Journalfor Parasitology， 2006， 36 （ 14）：1515-1520.

［3］李佩国，李蕴玉，张香斋，等.我国鸡球虫耐药性现状及其对策［J］.河北科技师范学院学报， 2006， 20（3）：70.

［4］彭险峰，覃宗华，刘起军.氟乙基硫胺素或其盐及其在制备抗球虫药物中的应用：中国，ZL201210151345.8［P］.2012-05-15.

［5］Morehouse N F， Baron R R.Coccidiosis： Evaluation of coccidiostats by mortality， weight gains and fecal scores［J］.Exp Parasitol，1970， 28： 25-29.

［6］Johnsan J， Reid W M.Anticoccidiosis drugs： lesionscoring techniques in battery and floor-open experiments with chickens［J］.Exp Parasitol， 1970， 28： 30-36.

［7］李国清.鸡球虫病学［M］.北京：中国农业大学出版社，1998：298.

［8］尹卫卫，王飒爽，王红梅，等.五种抗球虫药物对鸡柔嫩艾美耳球虫病的疗效观察［J］.动物医学进展，2010，31（12）：43.

［9］陈杖榴，朱蓓蕾，佟恒敏，等.兽医药理学第2版［M］.北京：中国农业出版社，2008：286-287.

［10］赵洪梅.鸡球虫病及抗球虫药的临床应用综述［J］.养殖与饲料，2008，11：52-54.

［11］任贺挺，李长喜.几种兽用抗球虫药物的简介［J］.养殖技术顾问，2010，6：197.

［12］孙宝贵，孟彦泥，刘志祥.二甲硫胺防治鸡球虫病的研究I笼饲染病预防和安全性试验［J］.沈阳农业大学学报，1988，19（2）： 35-40.

［13］中国兽药典委员会.兽药使用指南（化学药品卷2010版）［M］.北京：中国农业出版社，2011：182.

［14］方素芳，崔 平，朱继斌.鸡球虫耐药性产生机理及检测方法研究进展［J］.中国家禽， 2006，28（13）： 59-61.

［15］严 明，季 辉，江善祥.鸡球虫耐药性机制研究进展［J］.养禽与禽病防治， 2012，11：2-5.