DNA-PKcs蛋白在食管癌组织中的表达及临床病理相关性研究

王昆仑，徐晓霞，张忠献，刘 杨，任景丽，袁 翎

(1.郑州大学附属肿瘤医院放疗科 河南郑州 450008;2.郑州大学第二附属医院病理科 河南郑州 450014)

DNA双键断裂是细胞发生癌变和死亡的重要原因。DNA-PKcs是修复DNA双键断裂、维护生物体基因组稳定的关键酶。有研究显示DNA-PKcs蛋白的分布和肿瘤的易感性、预后以及抗肿瘤治疗的敏感性密切相关［1］，但和食管癌关系的报道较少见，因此了解DNA-PKcs在食管癌组织中的表达及其和临床病理的关系对食管癌风险评估、预后判断有现实的临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料 收集河南省肿瘤医院2009年1月至2011年12月病理诊断确诊并手术切除食管癌患者共41例，分别采集患者的食管癌组织、癌旁组织(距肿瘤边缘约1～2 cm组织)以及正常组织(距肿瘤边缘＞5 cm组织)。患者年龄 32～76岁，平均(51.27±7.19)岁，其中男性23例，女性18例，所有病例均有完整的临床资料及完好的存档蜡块。病理类型为鳞状细胞癌者28例，腺癌4例，其他病理类型9例(腺鳞癌3例，未分化癌2例，肉瘤1例，癌3例);低分化12例，中分化12例，高分化23例;病理分期为Ⅰ期5例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例。

1.2 方法和主要试剂 实验采用免疫组化SP法，使用的主要试剂包括:DNA-PKcs浓缩型单克隆抗体、SP超敏试剂盒(鼠/兔抗)、胰酶消化试剂盒，DAB显色液等。

1.3 免疫组化结果的评定 DNA-PKcs为核蛋白，细胞核被染色呈棕黄色即为阳性表达细胞。显微镜下观察免疫组化染色后的病理切片，对每1张病理切片计数5个高倍视野(40×10)中细胞阳性表达数，以视野中阳性表达数占细胞总数的百分比来表示DNA-PKcs蛋白表达水平。“－”为阳性细胞表达率小于5%、“+”为5%～50%之间、“++”为50%～90%之间、“+++”为阳性表达细胞率大于90%。

1.4 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行处理和分析，定性资料采用χ2检验或Fisher精确概率法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织、癌旁组织和正常组织中DNA-PKcs蛋白表达情况 癌组织DNA-PKcs蛋白表达阳性率最高(87.8%)，其次为癌旁组织(63.4%)，正常组织 DNAPKcs表达阳性率最低(51.2%)。癌组织、癌旁组织和正常组织3组比较DNA-PKcs蛋白表达差异有统计学意义(P＜0.05)，癌组织与癌旁组织和正常组织DNAPKcs表达两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);而癌旁组织阳性率高于正常组织，但差异无统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 癌组织、癌旁组织和正常组织中DNA-PKcs蛋白表达情况［n，(%)］

2.2 DNA-PKcs蛋白表达临床病理特征的关系 DNA-PKcs蛋白表达在高分化组中阳性率为100%，在中分化组中阳性率为50%，在低分化组中阳性率为75%，3组间差别有统计学意义(P＜0.05);DNA-PKcs蛋白表达3组间两两比较高分化组与中分化组差异有统计学意义(P＜0.05)，而其他两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。DNA-PKcs蛋白表达与患者性别、年龄、病例类型和pTNM分期无关。见表2。

3 讨论

DNA依赖蛋白激酶催化单位(DNA-PKcs)是DNA双链损伤修复中关键酶。当各种因素引起DNA双链断裂时，DNA蛋白激酶的亚单位Ku70和Ku80迅速形成异源二聚体，与受损的DNA末端结合，通过非同源性末端接合(NHEJ)途径激活DNA-PKcs组成DNA依赖蛋白激酶，在DNA修复中发挥重要作用。

研究结果表明，食管癌癌组织DNA-PKcs蛋白表达阳性率高于癌旁组织和正常组织，且差异有统计学意义，这与胡航荣［2］对食管癌不同组织之间 DNAPKcs蛋白表达阳性率研究结果一致，也与其在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌患者中不同组织表达情况一致［3-4］，提示 DNA-PKcs蛋白表达可能参与了食管正常细胞向恶性细胞转变的过程。黄梅芳等［3］发现DNA-PKcs蛋白表达与肺癌病理类型和病理分期有关，病理分期越晚，其表达越强，细支气管肺泡癌表达高于其它肺腺癌，且均高于肺腺鳞癌，而本研究结果显示，食管癌DNA-PKcs蛋白表达与病理类型和病理分期无关，提示DNA-PKcs蛋白表达情况与癌症类型有关。有研究［2］发现DNA-PKcs蛋白表达随肿瘤分化程度增高而增高，本研究结果也显示DNA-PKcs蛋白表达与食管癌组织的分化程度有关，高分化组表达强于中分化组和低分化组，且与中分化组差异有统计学意义，提示DNA-PKcs可能是预测食管癌分化程度的一项重要指标，有可能成为食管癌指示食管癌放疗预后的生物学标志物。同时食管癌低分化组DNA-PKcs蛋白表达要高于中分化组，但差异无统计学意义，可能与分化程度各组样本例数较少，产生统计学偏倚有关。

表2 DNA-PKcs蛋白表达临床病理特征的关系［n，(%)］

综上所述，DNA-PKcs蛋白表达与性别、年龄、病理类型和病理分期无关，与肿瘤分化程度有关，高分化组高于中分化组和低分化组，且癌组织表达高于癌旁组织和正常组织。这一结论可为食管癌的放疗个体化治疗方案的制定和预后判断提供依据。

［1］蔡荣，张丽珍.DNA依赖蛋白激酶的研究新进展［J］.医学综述，2013，19(7):1182-1185.

［2］胡航荣.DNA-PK在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义［D］.重庆医科大学，2007:11-12.

［3］黄梅芳，李文辉，杨振峰，等.DNA-PKcs在云南宣威富源肺腺癌组织中的表达与分期及病理相关性探讨［J］.云南医药，2009，30(4):407-410.

［4］王万鹏，宋德霸，赵龙栓.DNA-PKcs蛋白和MGMT蛋白在肝癌组织中的表达及意义［J］.山东医药，2010，50(7):70-71.