醋酸阿托西班注射液的处方工艺开发

姚志勇+李新宇+支钦

[摘要] 目的 改进醋酸阿托西班注射液处方并优化生产工艺，以增加醋酸阿托西班注射液的稳定性。 方法 以市售处方工艺为基础，在其中分别加入不同种类的抗氧剂，得到醋酸阿托西班注射液样品，将注射液样品分别置于以下条件下：温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%和温度（25±2）℃、相对湿度（60±5）%，进行加速试验，分别在0、1、2、3、6个月取样检验，通过测量外观色泽、pH值、溶液澄清度、有关物质、含量等指标和局部安全性考察，从而优选出稳定性较市售产品更好、使用安全的醋酸阿托西班注射液。 结果 经加速试验考察6个月，抗氧剂为0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠时，制备的醋酸阿托西班注射液与已上市的醋酸阿托西班注射液比较，外观色泽、酸度、溶液澄清度指标相当，有关物质与含量明显优于已上市产品，可于室温下保存，稳定性明显增加。通过局部安全性试验表明此注射剂无刺激性、致敏性和溶解性。 结论 该注射剂处方合理，制备工艺可行，产品安全，稳定性高。

[关键词] 醋酸阿托西班注射液；抗氧剂；制备工艺；稳定性；安全性

[中图分类号] R965.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）10（a）-0004-04

醋酸阿托西班是一种催产素类似物，为人工合成的环状多肽，是子宫内蜕膜、胎膜上受体的催产素竞争性拮抗剂，在临床上被用于治疗早产。醋酸阿托西班可剂量相关性地抑制宫缩，并使环状肽催产素介导的前列腺素分泌减少，达到保胎的目的[1]。有研究报道，对13例早产妇女（28～36周孕龄）使用阿托西班治疗，以10～100 μg/min的速率输注1～10 h，在宫缩描记图上观察到有6例早产妇女子宫收缩显著减少，阿托西班对母亲或胎儿的心率以及母亲的血压无不良反应[2]。另一报道对12例早产妇女（27～36周孕龄）使用阿托西班治疗，以25～100 μg/min的速率输注1.5～13.0 h，有6例患者取得了彻底安胎，阿托西班对母亲和胎儿无不良反应[3]。

已上市的醋酸阿托西班注射液只可于2～8℃保存，针对该问题，本研究加入抗氧剂以提高制剂的稳定性，可在室温下保存。因此，本研究对醋酸阿托西班注射液的处方及制备工艺进行了筛选，对其稳定性进行了研究与评价，另外对优化后的处方进行了动物局部安全性评价实验。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦）；BT 125D型十万分之一天平（上海精密科学仪器有限公司）；X0001SDP药品稳定性实验箱（上海锡为科学仪器有限公司）。

醋酸阿托西班注射液（辉凌药业，批号：AC0089G，规格：7.5 mg/ml∶5 ml），亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠均为分析纯；醋酸阿托西班（自制）。

新西兰兔，普通级，雌雄各半，体重2.0～2.5 kg（广东省医学实验动物中心）；SD大鼠，普通级，雌雄各半，体重180～220 g（广东省医学实验动物中心）。

2 方法与结果

2.1 醋酸阿托西班注射液的制备工艺初定

已上市的醋酸阿托西班注射液（生产厂家：Ferring Gmbh）的处方包含有7.5 mg/ml醋酸阿托西班，50 mg/ml甘露醇，用1 mol/L盐酸调至pH 4.5，需于2～8℃保存，本研究针对该问题加入抗氧剂以提高制剂的稳定性，使其质量更稳定，可在室温下保存。经过多次实验优化，初定的制备工艺：称量市售制剂处方量的阿托西班、甘露醇、0.1 g/100 ml抗氧剂，用处方量80%注射用水室温下搅拌至完全溶解，用盐酸调pH至4.5，加注射用水定容至全量，搅拌均匀。注射液中加入0.05%活性炭，搅拌下吸附热原30 min，脱炭过滤。滤液经1 μm钛棒过滤器过滤，再经0.22 μm微孔滤膜除菌过滤，灌装于7 ml灭菌西林瓶内（5 ml/瓶），无菌条件下压塞扎盖。

2.2 醋酸阿托西班注射液的处方筛选

2.2.1 抗氧剂的选择

为选择合适的抗氧剂种类及浓度，进行了进一步的探讨研究，经过多次分析验证[4-5]，抗氧剂选自0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠、0.1 g/100 ml焦亚硫酸钠。

在已上市的醋酸阿托西班注射液中于无菌室分别加入不同种类的抗氧剂，得到醋酸阿托西班注射液样品。

参照相关文献[6]进行加速实验，条件：①温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%；②温度（25±2）℃、相对湿度（60±5）%。分别在0、1、2、3、6个月取样检验，通过测量外观色泽、pH值、溶液澄清度、有关物质、含量指标来考察已上市醋酸阿托西班注射液和自制的醋酸阿托西班注射液样品的稳定性，结果见图1、图2。

2.2.2 含量测定方法[7-9]

流动相A：25 mmol/L的磷酸二氢钾，用30%三氟乙酸溶液调pH值至3.5；流动相B：乙腈∶甲醇=50∶50；梯度洗脱程序：B在15 min内由40变至60；色谱柱：C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；波长220 nm，流速1.0 ml/min，柱温：室温；样品配制：加注射用水配制成0.75 mg/ml的溶液；含量：每毫升含阿托西班应为6.8～8.0 mg。

2.2.3 有关物质测定方法[10]

用STPAK C18-ES色谱柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）或相当柱；以磷酸二氢钾溶液（25 mmol/L磷酸二氢钾溶液，用30%三氟乙酸溶液调pH值至3.5）作为流动相A；以乙腈∶甲醇（60∶40）作为流动相B；检测波长为220 nm；流速为1.0 ml/min；柱温为室温；按表1进行梯度洗脱。理论塔板数按阿托西班峰计算应>5000，阿托西班峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求，阿托西班峰的拖尾因子应<2。

测定方法：取本品适量，加水稀释制成每毫升中含阿托西班0.75 mg的溶液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1 ml置于100 ml容量瓶中，加水定量稀释至刻度作为对照品溶液。分别精密量取上述两种溶液20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。按面积归一化法计算，阿托西班有关物质单杂不得>0.5%，其他杂质总量不得>1.5%。

结果表明，经加速试验考察6个月，抗氧剂为0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠时，制备的醋酸阿托西班注射液与已上市的醋酸阿托西班注射液比较，外观色泽、酸度、溶液澄清度指标相当，有关物质与含量明显好于已上市产品，可于室温下保存，稳定性明显增加。抗氧剂为0.1 g/100 ml焦亚硫酸钠，与已上市的醋酸阿托西班注射液比较，外观色泽、酸度、溶液澄清度、有关物质、含量与已上市的供试品相比，稳定性没有得到改善。

因此，最终抗氧剂选择0.1 g/100 ml亚硫酸氢钠，按照“2.1”项制备工艺制得醋酸阿托西班注射液，进行以下试验。

2.3 醋酸阿托西班注射液的局部安全性考察

进行局部给药毒性试验，包括肌内注射刺激性试验、过敏性试验及溶血性试验[11-13]。

2.3.1 肌内注射局部刺激反应试验

2.3.1.1 方法 取新西兰兔6只，体重2.0～2.5 kg，分别于新西兰兔左侧股四头肌处注射本品1 ml，右侧注射同体积生理盐水。于末次给药48 h后取4只动物，用20%乌拉坦，剂量为5 ml/kg静脉麻醉，解剖股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，余下2只动物于末次给药后14 d再按上述方法进些剖解观察。

2.3.1.2 结果 根据刺激反应症状和评分标准，新西兰兔肌内注射醋酸阿托西班48 h后，给药部位仅有轻度充血（直径<0.5 cm），无明显刺激反应，其平均刺激反应分值均<2.0，停药后14 d，给药部位亦无明显刺激反应，表明本研究制备的醋酸阿托西班注射液样品无刺激性。

病理切片结果：给药及停药后，受试给药组与对照组镜下见细胞完整，横纹清晰，未见细胞出现变性或坏死变化，间质未见水肿及炎症细胞浸润，表明本研究制备的醋酸阿托西班注射液样品肌内注射无刺激性。

2.3.2 全身被动过敏试验

2.3.2.1 方法 ①致敏：选取健康SD大鼠16只，体重180～220 g，随机分成受试药（批号：110301，规格：7.5 mg/ml∶5 ml，南京星银药业集团有限公司）低剂量组（6.6 mg/ml，0.5 ml/只）、受试药高剂量组（13.2 mg/ml，0.5 ml/只）、生理盐水阴性对照组和卵蛋白（Sigma产品，临用前生理盐水配制成10 mg/ml混悬液备用）阳性对照组（10 mg/ml，0.5 ml/只），每组4只。每组每只大鼠隔日腹腔注射完全氟式佐剂（规格：10 ml/瓶，批号：90007-81-2，Sigma化学试剂有限公司）（0.5 ml/只）及相应的药液一次，共注射5次。②抗血清制备：致敏末次注射后第10天眼眶取血，离心10 min，3000 r/min，分离血清，-20℃保存，2周内备用。③观察指标：被动致敏48 h后进行抗原攻击，各组静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加等量的0.5%伊文思染料进行激发30 min后，将动物处死，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的蓝色斑点大小，直径>5 mm者判定为阳性。

2.3.2.2 结果 阴性对照组、高剂量组、低剂量组均未见蓝斑，阳性对照卵蛋白组蓝斑直径>5 mm，表明本研究制备的醋酸阿托西班注射液样品不会引起大鼠被动皮肤过敏。

2.3.3 溶血性试验

制备2%新西兰兔红细胞悬液。取试管7支，按表2加入各种液体。将各试管轻轻摇匀，置37℃恒温水浴中孵育，观察0.5、1、2、3、6 h的结果。

结果显示，蒸馏水对照管在0.5 h完全溶血。生理盐水和各醋酸阿托西班注射液在6 h内均无溶血现象。轻轻振摇，生理盐水和各浓度醋酸阿托西班注射液管底沉积的红细胞均能完全分散，表明本研究制备的醋酸阿托西班注射液样品无红细胞凝集反应。

肌肉刺激性、过敏性及体外溶血性实验表明，本研究制备的醋酸阿托西班注射液样品无明显的刺激性、过敏性，也不会引起溶血反应，表明本研究制备的醋酸阿托西班注射液样品安全性好，可供临床静脉注射与肌内注射应用。

3 讨论

醋酸阿托西班注射液是由Ferring GmbH研制的一种由9个氨基酸组成的二硫键型的环肽多肽，是一种抗早产药，为欧洲医药学会推荐的一线用药，其是一种催产素的竞争性抑制剂，通过结合在子宫肌层和蜕膜的催产素受体上，阻止催产素在靶细胞上发挥作用，从而达到预防早产的目的[14-16]。

注射剂中常用的抗氧剂包括焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、硫脲和抗坏血酸等，其中亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠的水溶液pH在4.0～5.5，适合在酸性溶液中应用。由于本注射剂为酸性注射剂，其pH为4.5，因此选择此两种抗氧剂来进行处方优化。

本研究在醋酸阿托西班注射液原处方的基础上，添加抗氧剂，以外观、pH值、溶液澄清度、有关物质、含量为指标，进行加速稳定性考察，结果显示，添加0.1%亚硫酸氢钠可显著提高醋酸阿托西班注射液的稳定性，同时改善原制剂的储存条件，使之可在室温下保存，方便运输和储存。按照优化后处方和生产工艺制备的产品质量稳定，局部用药安全，可确定为最优处方和生产工艺。

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（收稿日期：2014-08-15 本文编辑：林利利）

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（收稿日期：2014-08-15 本文编辑：林利利）