肾虚型自然流产模型大鼠不同干预方法对其子代生长发育及行为学的影响

2014-11-15 22:34赵静等
中外医疗 2014年19期

赵静等

[摘要] 目的 探究低剂量助孕丸、高剂量助孕丸和达芙通对肾虚型自然流产模型大鼠其子代生长发育及行为学的影响。 方法将14只SPF级母鼠随机分成5组,模型组、低剂量助孕丸组、高剂量助孕丸组、达芙通组、空白组,繁殖出子代小鼠,记录子鼠第1、7、13、19天的体重并绘制出生长曲线图,观测初生子鼠翻身试验、3周时平行爬杆实验爬行距离及跌落次数。结果 ①不同干预组对子鼠D7、D13、D19的体重影响差异有统计学意义(P<0.01),②不同干预组对子鼠初生翻身试验的影响差异无统计学意义(P>0.05),③不同干预组对子鼠平行爬杆实验爬行距离、跌落次数的影响差异有统计学意义(P<0.01)。结论 肾虚型自然流产模型大鼠对其子代的体重、平行爬杆距离及跌落次数均有影响,达芙通、助孕丸能对该类子鼠的体重、平行爬杆距离及跌落次数产生积极的影响,助孕丸的影响与其剂量有关,达芙通、助孕丸对子鼠生长发育的影响会随着子鼠的生长而改变。

[关键词] 肾虚型自然流产模型;子代生长发育;子代行为学

[中图分类号] R114 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)07(a)-0041-02

目前,大量的研究证实,母鼠妊娠期间暴露于一些特殊环境,接触一些特殊物质,会对其子代生长发育及行为学产生影响。如刘艳华等[1]、刘婉华等[2]、丁淑瑾等[3]等均证实了这一点。基于以上认识,该研究2011—2013年从中医角度,肾虚型自然流产模型大鼠进行不同干预处理,从而观察其子代生长发育及行为学的影响,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

羟基脲(规格:10 mg×20片/盒,国药准字:H37021289);助孕丸(规格:36 g/瓶;达芙通地屈孕酮片,规格:10 mg×20片/盒,批准文号:H20090470)。

1.2 动物

SPF级雄性SD大鼠5只,购自中山大学实验动物中心,合格证号:0112829;SPF级雌性SD大鼠14只,购自广东省医学实验动物中心,合格证号:0116331;饲养于广州中医药大学第一附属医院SPF级实验中心,检疫合格后于标准条件(22~25 ℃,14 h照明)下饲养。

2 方法

2.1 分组

按随机数字表将雌性大鼠分为5组,模型组(3只)、低剂量助孕丸组(3只)、高剂量助孕丸组(3只)、达芙通组(3只),空白组(2只)。

2.2 确定妊娠

将雌鼠与雄鼠按2∶1的比例于每晚7点至次日早上7点合笼交配,第2天7:30—8:30行阴道涂片检查,以涂片中发现大量精子确定为妊娠第1天。连续合笼7 d未见大量精子则停止合笼,14 d后再次合笼。

2.3 造模模型组

妊娠第2~8天早上9点以羟基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4点以生理盐水灌胃;低剂量助孕丸组:妊娠第2~8天上午以羟基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4点以助孕丸3号浓缩干粉3.54 g/(kg·d)(成人等效剂量)灌胃;高剂量助孕丸组:妊娠第2~8天早上8点以羟基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4点以助孕丸3号浓缩干粉7.08 g/(kg·d)(成人等效剂量2倍)灌胃;达芙通组:妊娠第2~8天早上8点以羟基脲450 mg/(kg·d)灌胃,下午4点以达芙通3 mg/(kg·d)灌胃;空白组:妊娠第2~8天早上8点及下午4点均以生理盐水450 mg/(kg·d)灌胃。

造模完成后妊娠母鼠于孕18 d独立分笼,于孕(21±2)d产下子鼠,产下子鼠当天确定为出生第1天。

2.4 指标监测

①母鼠怀孕及产子情况;②子鼠体重:对子鼠出生第1、7、13、19天分别称重;③初生鼠翻身实验:对子代初生鼠于当天做翻身实验,方法是将初生鼠四脚朝天,背于实验台,观察在10 s内能翻身者,四脚着地者为翻身成功,否则为失败;④平行爬杆距离及跌落次数:将3周子鼠置于直径约2 cm 的钢管上,用秒表计算1 min内爬行距离及跌落次数。

2.5 统计方法

所有计量数据均以(x±s)表示,运用SPSS15.0统计软件对数据进行分析,组间比较采用ANOVA分析。

3 实验结果

3.1 不同干预组产子情况

模型组产子(7.50±0.500),低剂量助孕丸组(12.00±1.000),高剂量助孕丸组(10.00±1.000),达芙通组(5.00±1.000),空白组(9.00±0.000)。

3.2 子鼠体重

经统计,不同干预组子鼠在D1平均体重差异无统计学意义(P=0.500 >0.05),D7、D13、D19差异有统计学意义。与模型组比较,D7,达芙通组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.003 <0.01),空白组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.002 <0.01),D13,空白组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.006 <0.01),达芙通组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.000 <0.01),D19,空白组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.005 <0.01),高剂量助孕丸组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.030 <0.05),达芙通组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.000 <0.01)。与空白组相比较,D7,空白组高于模型组,差异有统计学意义(P=0.002 <0.01),空白组高于高助孕丸组,差异有统计学意义(P=0.001 <0.01);D13,达芙通组高于空白组,差异有统计学意义(P=0.000 <0.01),高助孕丸组高于空白组,差异有统计学意义(P=0.000 <0.01),低助孕丸组高于空白组(P=0.001 <0.01),D19,达芙通组高于空白组,差异有统计学意义(P=0.001 <0.01),空白组高于低剂量助孕丸组,差异有统计学意义(P=0.001 <0.01)。见表1。endprint

3.3 子鼠行为学实验及比较

3.3.1 初生鼠翻身实验 成功率:模型组(0.60±0.507),低剂量助孕丸组(0.52±0.511),高剂量助孕丸组(0.78±0.411),达芙通组(0.00±0.000),空白组(0.44±0.527)。经统计,差异有统计学意义(F=2.237,P=0.076),不同干预组初生翻身实验结果无显著差异。

3.3.2 子鼠平行爬杆实验爬行距离 模型组(35.00±25.386),低剂量助孕丸组(67.86±42.416),高剂量助孕丸组(32.44±19.648),达芙通组(122.40±38.017),空白组(86.67±43.116)。经统计,差异有统计学意义(F=8.380,P=0.000),不同干预组平行爬杆实验爬行距离有显著差异。达芙通组高于模型组(P=0.000),空白组高于模型组(P=0.001),低剂量助孕丸组高于模型组(P=0.008),空白组高于高剂量助孕丸组(P=0.002)。

3.3.3 子鼠平行爬杆实验跌落次数 模型组(2.33±1.345),低剂量助孕丸组(1.61±1.469),高剂量助孕丸组(1.33±1.323),达芙通组(0.00±0.000),空白组(0.11±0.333)。经统计,差异有统计学意义(F=6.203,P=0.000),不同干预组平行爬杆实验跌落次数有显著性差异。空白组低于模型组(P=0.000),达芙通组低于模型组(P=0.001),空白组低于低剂量助孕丸组(P=0.004)。

3 讨论

体重是反映子鼠生理变化的基本指标,而初生翻身试验、平行爬杆距离、跌落次数是反映子鼠行为症状的基本指标[4]。这些指标一起可以用来评价子鼠生长发育及行为学的情况。邢志强[5]、丁瑜等[6]、张婧等[7]、李学伟[8]的实验发现母鼠妊娠期暴露于一些特殊的物质,如:氟西汀、邻苯二甲酸、双酚A、氰戊菊酯、会对子鼠的行为学产生影响。张先庚等[9]的实验发现优裕环境母鼠胎教可以增加子鼠的体重、身长,从而促进子鼠的生长发育;母代的地震恐惧影响可以遗传到子代,并降低体重和身长,延缓子代的生长发育:金匮肾气丸可纠正地震恐惧导致的子鼠发育迟缓。王米渠等[10]通过猫吓孕鼠造模“恐伤肾”的实验方法,对第二代初生鼠、青年鼠、成年鼠的诸种行为遗传测试,其结果表明受惊恐的子代鼠在“作强”(体力、心力、性力)行为的活动水平降低。

该实验以罗颂平教授研究团队病证结合肾虚型先兆流产模型为基础,探索不同干预方法对其子代行为学的影响。该实验的结果提示:母鼠肾虚会影响到子鼠生长发育及行为学,达芙通、助孕丸能对肾虚型母鼠产下的子鼠的生长发育和行为学起到积极的作用,这一点与其他实验结果相同,但助孕丸的剂量仍需斟酌。该实验未从细胞学、分子生物学、免疫学等角度进入深入研究探讨分析,这一点也是作者将来进一步研究的方向。

[参考文献]

[1] 刘艳华,刘秋芳.邻苯二甲酸二( 2-乙基) 己酯( DEHP) 胚胎期暴露对子代大鼠神经行为发育的影响[J].毒理学杂志,2011,25(6):414-416

[2] 刘婉华,郝红军.不同剂量的He-Ne激光对妊娠母鼠子代的生长及行为的影响[J].激光杂志,2003,24(5):96-97.

[3] 丁淑瑾,王志新.母源性十溴联苯醚胃灌后对出生子鼠数量及体重的影响[J].实用医学杂志,2010,24(12):2056-2057.

[4] 王米渠.中国遗传学[M].西宁:青海人民出版社,1997.

[5] 邢志强.母鼠孕前慢性应激和氟西汀治疗对母鼠及其子代行为学和神经生物学的影响[D].汕头:汕头大学,2011.

[6] 丁瑜,高宇.妊娠中末期邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯暴露对母鼠妊娠结局及子鼠生长发育的影响[J].上海交通大学学报,2011(31):225-227.

[7] 张婧,徐晓红.围生期双酚 A 暴露对不同性别子代小鼠行为的影响[J].心理学报,2009(9):832-841.

[8] 李学伟.胚胎期母体暴露氰戊菊酯加速CD-1小鼠年龄相关性行为改变[D].合肥:安徽医科大学,2011.

[9] 张先庚,张辉.优裕环境胎教与地震恐惧胎损的SD 大鼠母子两代行为遗传学研究[J].辽宁中医杂志,2012,39(7):1403-1404.

[10] 王米渠,骆永珍.”肾主生殖”母鼠与子代行为遗传的免疫学研究[J].贵阳中医学院学报,1997,19(1):53-54.

(收稿日期:2014-03-24)endprint

3.3 子鼠行为学实验及比较

3.3.1 初生鼠翻身实验 成功率:模型组(0.60±0.507),低剂量助孕丸组(0.52±0.511),高剂量助孕丸组(0.78±0.411),达芙通组(0.00±0.000),空白组(0.44±0.527)。经统计,差异有统计学意义(F=2.237,P=0.076),不同干预组初生翻身实验结果无显著差异。

3.3.2 子鼠平行爬杆实验爬行距离 模型组(35.00±25.386),低剂量助孕丸组(67.86±42.416),高剂量助孕丸组(32.44±19.648),达芙通组(122.40±38.017),空白组(86.67±43.116)。经统计,差异有统计学意义(F=8.380,P=0.000),不同干预组平行爬杆实验爬行距离有显著差异。达芙通组高于模型组(P=0.000),空白组高于模型组(P=0.001),低剂量助孕丸组高于模型组(P=0.008),空白组高于高剂量助孕丸组(P=0.002)。

3.3.3 子鼠平行爬杆实验跌落次数 模型组(2.33±1.345),低剂量助孕丸组(1.61±1.469),高剂量助孕丸组(1.33±1.323),达芙通组(0.00±0.000),空白组(0.11±0.333)。经统计,差异有统计学意义(F=6.203,P=0.000),不同干预组平行爬杆实验跌落次数有显著性差异。空白组低于模型组(P=0.000),达芙通组低于模型组(P=0.001),空白组低于低剂量助孕丸组(P=0.004)。

3 讨论

体重是反映子鼠生理变化的基本指标,而初生翻身试验、平行爬杆距离、跌落次数是反映子鼠行为症状的基本指标[4]。这些指标一起可以用来评价子鼠生长发育及行为学的情况。邢志强[5]、丁瑜等[6]、张婧等[7]、李学伟[8]的实验发现母鼠妊娠期暴露于一些特殊的物质,如:氟西汀、邻苯二甲酸、双酚A、氰戊菊酯、会对子鼠的行为学产生影响。张先庚等[9]的实验发现优裕环境母鼠胎教可以增加子鼠的体重、身长,从而促进子鼠的生长发育;母代的地震恐惧影响可以遗传到子代,并降低体重和身长,延缓子代的生长发育:金匮肾气丸可纠正地震恐惧导致的子鼠发育迟缓。王米渠等[10]通过猫吓孕鼠造模“恐伤肾”的实验方法,对第二代初生鼠、青年鼠、成年鼠的诸种行为遗传测试,其结果表明受惊恐的子代鼠在“作强”(体力、心力、性力)行为的活动水平降低。

该实验以罗颂平教授研究团队病证结合肾虚型先兆流产模型为基础,探索不同干预方法对其子代行为学的影响。该实验的结果提示:母鼠肾虚会影响到子鼠生长发育及行为学,达芙通、助孕丸能对肾虚型母鼠产下的子鼠的生长发育和行为学起到积极的作用,这一点与其他实验结果相同,但助孕丸的剂量仍需斟酌。该实验未从细胞学、分子生物学、免疫学等角度进入深入研究探讨分析,这一点也是作者将来进一步研究的方向。

[参考文献]

[1] 刘艳华,刘秋芳.邻苯二甲酸二( 2-乙基) 己酯( DEHP) 胚胎期暴露对子代大鼠神经行为发育的影响[J].毒理学杂志,2011,25(6):414-416

[2] 刘婉华,郝红军.不同剂量的He-Ne激光对妊娠母鼠子代的生长及行为的影响[J].激光杂志,2003,24(5):96-97.

[3] 丁淑瑾,王志新.母源性十溴联苯醚胃灌后对出生子鼠数量及体重的影响[J].实用医学杂志,2010,24(12):2056-2057.

[4] 王米渠.中国遗传学[M].西宁:青海人民出版社,1997.

[5] 邢志强.母鼠孕前慢性应激和氟西汀治疗对母鼠及其子代行为学和神经生物学的影响[D].汕头:汕头大学,2011.

[6] 丁瑜,高宇.妊娠中末期邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯暴露对母鼠妊娠结局及子鼠生长发育的影响[J].上海交通大学学报,2011(31):225-227.

[7] 张婧,徐晓红.围生期双酚 A 暴露对不同性别子代小鼠行为的影响[J].心理学报,2009(9):832-841.

[8] 李学伟.胚胎期母体暴露氰戊菊酯加速CD-1小鼠年龄相关性行为改变[D].合肥:安徽医科大学,2011.

[9] 张先庚,张辉.优裕环境胎教与地震恐惧胎损的SD 大鼠母子两代行为遗传学研究[J].辽宁中医杂志,2012,39(7):1403-1404.

[10] 王米渠,骆永珍.”肾主生殖”母鼠与子代行为遗传的免疫学研究[J].贵阳中医学院学报,1997,19(1):53-54.

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3.3 子鼠行为学实验及比较

3.3.1 初生鼠翻身实验 成功率:模型组(0.60±0.507),低剂量助孕丸组(0.52±0.511),高剂量助孕丸组(0.78±0.411),达芙通组(0.00±0.000),空白组(0.44±0.527)。经统计,差异有统计学意义(F=2.237,P=0.076),不同干预组初生翻身实验结果无显著差异。

3.3.2 子鼠平行爬杆实验爬行距离 模型组(35.00±25.386),低剂量助孕丸组(67.86±42.416),高剂量助孕丸组(32.44±19.648),达芙通组(122.40±38.017),空白组(86.67±43.116)。经统计,差异有统计学意义(F=8.380,P=0.000),不同干预组平行爬杆实验爬行距离有显著差异。达芙通组高于模型组(P=0.000),空白组高于模型组(P=0.001),低剂量助孕丸组高于模型组(P=0.008),空白组高于高剂量助孕丸组(P=0.002)。

3.3.3 子鼠平行爬杆实验跌落次数 模型组(2.33±1.345),低剂量助孕丸组(1.61±1.469),高剂量助孕丸组(1.33±1.323),达芙通组(0.00±0.000),空白组(0.11±0.333)。经统计,差异有统计学意义(F=6.203,P=0.000),不同干预组平行爬杆实验跌落次数有显著性差异。空白组低于模型组(P=0.000),达芙通组低于模型组(P=0.001),空白组低于低剂量助孕丸组(P=0.004)。

3 讨论

体重是反映子鼠生理变化的基本指标,而初生翻身试验、平行爬杆距离、跌落次数是反映子鼠行为症状的基本指标[4]。这些指标一起可以用来评价子鼠生长发育及行为学的情况。邢志强[5]、丁瑜等[6]、张婧等[7]、李学伟[8]的实验发现母鼠妊娠期暴露于一些特殊的物质,如:氟西汀、邻苯二甲酸、双酚A、氰戊菊酯、会对子鼠的行为学产生影响。张先庚等[9]的实验发现优裕环境母鼠胎教可以增加子鼠的体重、身长,从而促进子鼠的生长发育;母代的地震恐惧影响可以遗传到子代,并降低体重和身长,延缓子代的生长发育:金匮肾气丸可纠正地震恐惧导致的子鼠发育迟缓。王米渠等[10]通过猫吓孕鼠造模“恐伤肾”的实验方法,对第二代初生鼠、青年鼠、成年鼠的诸种行为遗传测试,其结果表明受惊恐的子代鼠在“作强”(体力、心力、性力)行为的活动水平降低。

该实验以罗颂平教授研究团队病证结合肾虚型先兆流产模型为基础,探索不同干预方法对其子代行为学的影响。该实验的结果提示:母鼠肾虚会影响到子鼠生长发育及行为学,达芙通、助孕丸能对肾虚型母鼠产下的子鼠的生长发育和行为学起到积极的作用,这一点与其他实验结果相同,但助孕丸的剂量仍需斟酌。该实验未从细胞学、分子生物学、免疫学等角度进入深入研究探讨分析,这一点也是作者将来进一步研究的方向。

[参考文献]

[1] 刘艳华,刘秋芳.邻苯二甲酸二( 2-乙基) 己酯( DEHP) 胚胎期暴露对子代大鼠神经行为发育的影响[J].毒理学杂志,2011,25(6):414-416

[2] 刘婉华,郝红军.不同剂量的He-Ne激光对妊娠母鼠子代的生长及行为的影响[J].激光杂志,2003,24(5):96-97.

[3] 丁淑瑾,王志新.母源性十溴联苯醚胃灌后对出生子鼠数量及体重的影响[J].实用医学杂志,2010,24(12):2056-2057.

[4] 王米渠.中国遗传学[M].西宁:青海人民出版社,1997.

[5] 邢志强.母鼠孕前慢性应激和氟西汀治疗对母鼠及其子代行为学和神经生物学的影响[D].汕头:汕头大学,2011.

[6] 丁瑜,高宇.妊娠中末期邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯暴露对母鼠妊娠结局及子鼠生长发育的影响[J].上海交通大学学报,2011(31):225-227.

[7] 张婧,徐晓红.围生期双酚 A 暴露对不同性别子代小鼠行为的影响[J].心理学报,2009(9):832-841.

[8] 李学伟.胚胎期母体暴露氰戊菊酯加速CD-1小鼠年龄相关性行为改变[D].合肥:安徽医科大学,2011.

[9] 张先庚,张辉.优裕环境胎教与地震恐惧胎损的SD 大鼠母子两代行为遗传学研究[J].辽宁中医杂志,2012,39(7):1403-1404.

[10] 王米渠,骆永珍.”肾主生殖”母鼠与子代行为遗传的免疫学研究[J].贵阳中医学院学报,1997,19(1):53-54.

(收稿日期:2014-03-24)endprint