壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用

顾丽嫱

摘要：研究了壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用，分别测定在不同浓度梯度下灰霉病菌的菌落直径、产孢量、孢子萌发率，观察了壳寡糖对菌丝生长形态的影响。结果表明，壳寡糖的浓度越大对灰霉病菌的抑制作用越明显，1 500 mg/L 的壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为100%，2 d为86.32%，5 d为81.95%，菌丝形态发生显著变化，菌丝直径明显增粗，菌隔增多，该浓度下对灰霉病菌的产孢抑制率达到83.82%，抑制孢子萌发率达52.97%。壳寡糖对灰霉病菌菌丝生长2 d的EC50为346.96 mg/L，对灰霉病菌产孢的EC50为521.96 mg/L，对孢子萌发的EC50为1 451.59 mg/L。

关键词：壳寡糖；灰霉病菌；菌丝生长；产孢；EC50

1材料与方法

1.1试验材料

灰霉病菌：采自河北省唐山市郊区保护地番茄灰霉病果，PDA培养基分离、纯化。壳寡糖：相对分子质量≤3 000，脱乙酰度（DD）≥85%（浙江澳兴科技生物有限公司生产）。番茄品种：巨丰（唐山市农业科学研究院科技开发中心提供）。

1.2试验方法

1.2.1壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长和产孢影响的测定制备含壳寡糖浓度为300、600、900、1 200、1 500 mg/L 的含药平板，用打孔法反接5 mm的灰霉菌菌饼。25 ℃培养箱培养，每天测量菌落直径，待对照组菌落长满整个培养皿为止，计算菌丝生长抑制率。光暗周期12 h-12 h交替条件下继续培养产孢，分别取各浓度梯度的菌落打取直径为5 mm的菌饼5个，用2 mL无菌水配制成孢悬液，用血球计数板计数，计算产孢抑制率。分别求出毒力回归方程，计算EC50。

菌丝生长抑制率=（对照组菌落直径-处理组菌落直径）/（对照组菌落直径-5 mm）×100%；

产孢量=（孢子平均数/80）×4×106。

1.2.2壳寡糖对番茄灰霉病菌孢子萌发影响的测定灰霉病菌培养9～10 d后使其产孢，加无菌水稀释至40倍镜下每视野20～30个，用凹玻片加不同浓度的壳寡糖21 ℃黑暗培养12 h后，计算抑制孢子萌发率，求出毒力回归方程，计算EC50。

孢子萌发率=萌发孢子数/视野下总孢子数×100%；

抑制孢子萌发率=（对照孢子萌发率-处理孢子萌发率）/对照孢子萌发率×100%。

1.2.3壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝形态影响的观察在PDA平板上反接灰霉病菌2 d后，在菌落边缘加0.2 mL的不同浓度壳寡糖溶液后竖插盖玻片，待菌丝长到盖玻片上，取出，直接观察菌丝形态进行比较。

2结果与分析

2.1壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用

从表1可以看出，菌落直径随着壳寡糖浓度的增大呈现递降的趋势，浓度越大抑菌效果越明显，其中300 mg/L壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为32.12%，2 d为4735%，5 d为21.48%，1 500 mg/L的抑制率1 d时为100%，2 d为8632%，5 d为81.95%，900 mg/L以上的壳寡糖对菌丝生长的抑制率5 d内均大于50%，1 500 mg/L 的壳寡糖对菌丝生长抑制率5 d内均大于80%。由表2可见，不同处理天数下，壳寡糖对菌丝生长的抑制中浓度EC50不同。其中2 d的EC50最小，为34696 mg/L，5 d的EC50最大，为629.65 mg/L。

2.2壳寡糖对番茄灰霉病菌孢子产生及萌发的抑制作用

从表3可见，壳寡糖对灰霉病菌的产孢量和孢子萌发率都有明显的抑制作用，并且随着处理浓度的升高产孢量和萌发量降低，抑制率增大。300 mg/L条件下，比对照组产孢量减少1.84×107个，抑制率达33.82%；孢子萌发率降低1360百分点，抑制孢子萌发率达到18.38%。

2.3壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝形态的影响

通过显微观察，对照组菌丝细长、细胞壁光滑（图1）；而不同浓度梯度的壳寡糖溶液处理组菌丝则出现不同程度的肿胀、菌丝变粗、分隔增多现象。壳寡糖浓度越大菌丝形态变化越明显（图2、图3）。

3结论与讨论

为了减少对灰霉病防治的农药使用，科研人员研究了不同抑菌物质对灰霉病菌的抑制作用。黄芳等研究结果表明，用0.1% 硼处理灰霉病菌孢子后， 显著抑制了孢子萌发和芽管伸

长[4]；白文苑等研究苍耳的丙酮提取物，其抑制菌丝生长的EC50 为20. 27 mg/mL，在30 mg/mL 浓度下，对番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌发的抑制率均在70%以上，对孢子形成和孢子萌发的EC50 分别为9. 06 、15. 21 mg/mL[5]；廖敏等研究结果表明，硅酸钠在一定程度上能抑制灰霉病菌的生长[6]。本试验研究可食用的壳寡糖对番茄灰霉病菌生长的影响，结果表明，1 500 mg/L壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率均在80%以上，壳寡糖对菌丝生长2dEC50使用浓度为

346.96 mg/L，低于苍耳丙酮提取物；而对菌丝形态变化的观察表明，在浓度为1 500 mg/L时，出现最大程度的肿胀、菌丝变粗、分隔增多的现象。1 500 mg/L壳寡糖对灰霉菌产孢量抑制率高达83. 82%，对孢子萌发的最大抑制率达55.97%。表明壳寡糖对番茄灰霉病菌生长有一定的抑制作用，本试验结果为壳寡糖作为一种绿色药剂防治番茄灰霉病提供了科学依据。

参考文献：

[1]王克勤. 灰霉病菌抗药性研究进展及防治对策[J]. 黑龙江农业科学，2000，7（5）：40-42.

[2]张新虎，何静，沈慧敏. 苍耳提取物对番茄灰霉病菌的抑制作用及抑菌机理初探[J]. 草业学报，2008，17（3）：99-104.

[3]张筠，杜鹏，张亚东. 壳寡糖抑菌作用的研究[J]. 食品工业科技，2009，30（1）：88-90.

[4]黄芳，王建明，徐玉梅. 硼抑制灰霉病菌孢子萌发机制的初步研究[J]. 植物病理学报，2008，38（4）：370-376.

[5]白文苑，沈慧敏. 苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性[J]. 甘肃农业大学学报，2008，43（4）：82-86.

[6]廖敏，李淼. 硅对草莓灰霉病的防治效果研究[J]. 宿州教育学院学报，2011，14（2）：174-176.王程亮，徐丽君，倪萌，等. 无锡地区桃园梨小食心虫发生规律[J]. 江苏农业科学，2014，42（9）：117-119.

摘要：研究了壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用，分别测定在不同浓度梯度下灰霉病菌的菌落直径、产孢量、孢子萌发率，观察了壳寡糖对菌丝生长形态的影响。结果表明，壳寡糖的浓度越大对灰霉病菌的抑制作用越明显，1 500 mg/L 的壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为100%，2 d为86.32%，5 d为81.95%，菌丝形态发生显著变化，菌丝直径明显增粗，菌隔增多，该浓度下对灰霉病菌的产孢抑制率达到83.82%，抑制孢子萌发率达52.97%。壳寡糖对灰霉病菌菌丝生长2 d的EC50为346.96 mg/L，对灰霉病菌产孢的EC50为521.96 mg/L，对孢子萌发的EC50为1 451.59 mg/L。

关键词：壳寡糖；灰霉病菌；菌丝生长；产孢；EC50

1材料与方法

1.1试验材料

灰霉病菌：采自河北省唐山市郊区保护地番茄灰霉病果，PDA培养基分离、纯化。壳寡糖：相对分子质量≤3 000，脱乙酰度（DD）≥85%（浙江澳兴科技生物有限公司生产）。番茄品种：巨丰（唐山市农业科学研究院科技开发中心提供）。

1.2试验方法

1.2.1壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长和产孢影响的测定制备含壳寡糖浓度为300、600、900、1 200、1 500 mg/L 的含药平板，用打孔法反接5 mm的灰霉菌菌饼。25 ℃培养箱培养，每天测量菌落直径，待对照组菌落长满整个培养皿为止，计算菌丝生长抑制率。光暗周期12 h-12 h交替条件下继续培养产孢，分别取各浓度梯度的菌落打取直径为5 mm的菌饼5个，用2 mL无菌水配制成孢悬液，用血球计数板计数，计算产孢抑制率。分别求出毒力回归方程，计算EC50。

菌丝生长抑制率=（对照组菌落直径-处理组菌落直径）/（对照组菌落直径-5 mm）×100%；

产孢量=（孢子平均数/80）×4×106。

1.2.2壳寡糖对番茄灰霉病菌孢子萌发影响的测定灰霉病菌培养9～10 d后使其产孢，加无菌水稀释至40倍镜下每视野20～30个，用凹玻片加不同浓度的壳寡糖21 ℃黑暗培养12 h后，计算抑制孢子萌发率，求出毒力回归方程，计算EC50。

孢子萌发率=萌发孢子数/视野下总孢子数×100%；

抑制孢子萌发率=（对照孢子萌发率-处理孢子萌发率）/对照孢子萌发率×100%。

1.2.3壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝形态影响的观察在PDA平板上反接灰霉病菌2 d后，在菌落边缘加0.2 mL的不同浓度壳寡糖溶液后竖插盖玻片，待菌丝长到盖玻片上，取出，直接观察菌丝形态进行比较。

2结果与分析

2.1壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用

从表1可以看出，菌落直径随着壳寡糖浓度的增大呈现递降的趋势，浓度越大抑菌效果越明显，其中300 mg/L壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为32.12%，2 d为4735%，5 d为21.48%，1 500 mg/L的抑制率1 d时为100%，2 d为8632%，5 d为81.95%，900 mg/L以上的壳寡糖对菌丝生长的抑制率5 d内均大于50%，1 500 mg/L 的壳寡糖对菌丝生长抑制率5 d内均大于80%。由表2可见，不同处理天数下，壳寡糖对菌丝生长的抑制中浓度EC50不同。其中2 d的EC50最小，为34696 mg/L，5 d的EC50最大，为629.65 mg/L。

2.2壳寡糖对番茄灰霉病菌孢子产生及萌发的抑制作用

从表3可见，壳寡糖对灰霉病菌的产孢量和孢子萌发率都有明显的抑制作用，并且随着处理浓度的升高产孢量和萌发量降低，抑制率增大。300 mg/L条件下，比对照组产孢量减少1.84×107个，抑制率达33.82%；孢子萌发率降低1360百分点，抑制孢子萌发率达到18.38%。

2.3壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝形态的影响

通过显微观察，对照组菌丝细长、细胞壁光滑（图1）；而不同浓度梯度的壳寡糖溶液处理组菌丝则出现不同程度的肿胀、菌丝变粗、分隔增多现象。壳寡糖浓度越大菌丝形态变化越明显（图2、图3）。

3结论与讨论

为了减少对灰霉病防治的农药使用，科研人员研究了不同抑菌物质对灰霉病菌的抑制作用。黄芳等研究结果表明，用0.1% 硼处理灰霉病菌孢子后， 显著抑制了孢子萌发和芽管伸

长[4]；白文苑等研究苍耳的丙酮提取物，其抑制菌丝生长的EC50 为20. 27 mg/mL，在30 mg/mL 浓度下，对番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌发的抑制率均在70%以上，对孢子形成和孢子萌发的EC50 分别为9. 06 、15. 21 mg/mL[5]；廖敏等研究结果表明，硅酸钠在一定程度上能抑制灰霉病菌的生长[6]。本试验研究可食用的壳寡糖对番茄灰霉病菌生长的影响，结果表明，1 500 mg/L壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率均在80%以上，壳寡糖对菌丝生长2dEC50使用浓度为

346.96 mg/L，低于苍耳丙酮提取物；而对菌丝形态变化的观察表明，在浓度为1 500 mg/L时，出现最大程度的肿胀、菌丝变粗、分隔增多的现象。1 500 mg/L壳寡糖对灰霉菌产孢量抑制率高达83. 82%，对孢子萌发的最大抑制率达55.97%。表明壳寡糖对番茄灰霉病菌生长有一定的抑制作用，本试验结果为壳寡糖作为一种绿色药剂防治番茄灰霉病提供了科学依据。

参考文献：

[1]王克勤. 灰霉病菌抗药性研究进展及防治对策[J]. 黑龙江农业科学，2000，7（5）：40-42.

[2]张新虎，何静，沈慧敏. 苍耳提取物对番茄灰霉病菌的抑制作用及抑菌机理初探[J]. 草业学报，2008，17（3）：99-104.

[3]张筠，杜鹏，张亚东. 壳寡糖抑菌作用的研究[J]. 食品工业科技，2009，30（1）：88-90.

[4]黄芳，王建明，徐玉梅. 硼抑制灰霉病菌孢子萌发机制的初步研究[J]. 植物病理学报，2008，38（4）：370-376.

[5]白文苑，沈慧敏. 苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性[J]. 甘肃农业大学学报，2008，43（4）：82-86.

[6]廖敏，李淼. 硅对草莓灰霉病的防治效果研究[J]. 宿州教育学院学报，2011，14（2）：174-176.王程亮，徐丽君，倪萌，等. 无锡地区桃园梨小食心虫发生规律[J]. 江苏农业科学，2014，42（9）：117-119.

摘要：研究了壳寡糖对番茄灰霉病菌的抑制作用，分别测定在不同浓度梯度下灰霉病菌的菌落直径、产孢量、孢子萌发率，观察了壳寡糖对菌丝生长形态的影响。结果表明，壳寡糖的浓度越大对灰霉病菌的抑制作用越明显，1 500 mg/L 的壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为100%，2 d为86.32%，5 d为81.95%，菌丝形态发生显著变化，菌丝直径明显增粗，菌隔增多，该浓度下对灰霉病菌的产孢抑制率达到83.82%，抑制孢子萌发率达52.97%。壳寡糖对灰霉病菌菌丝生长2 d的EC50为346.96 mg/L，对灰霉病菌产孢的EC50为521.96 mg/L，对孢子萌发的EC50为1 451.59 mg/L。

关键词：壳寡糖；灰霉病菌；菌丝生长；产孢；EC50

1材料与方法

1.1试验材料

灰霉病菌：采自河北省唐山市郊区保护地番茄灰霉病果，PDA培养基分离、纯化。壳寡糖：相对分子质量≤3 000，脱乙酰度（DD）≥85%（浙江澳兴科技生物有限公司生产）。番茄品种：巨丰（唐山市农业科学研究院科技开发中心提供）。

1.2试验方法

1.2.1壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长和产孢影响的测定制备含壳寡糖浓度为300、600、900、1 200、1 500 mg/L 的含药平板，用打孔法反接5 mm的灰霉菌菌饼。25 ℃培养箱培养，每天测量菌落直径，待对照组菌落长满整个培养皿为止，计算菌丝生长抑制率。光暗周期12 h-12 h交替条件下继续培养产孢，分别取各浓度梯度的菌落打取直径为5 mm的菌饼5个，用2 mL无菌水配制成孢悬液，用血球计数板计数，计算产孢抑制率。分别求出毒力回归方程，计算EC50。

菌丝生长抑制率=（对照组菌落直径-处理组菌落直径）/（对照组菌落直径-5 mm）×100%；

产孢量=（孢子平均数/80）×4×106。

1.2.2壳寡糖对番茄灰霉病菌孢子萌发影响的测定灰霉病菌培养9～10 d后使其产孢，加无菌水稀释至40倍镜下每视野20～30个，用凹玻片加不同浓度的壳寡糖21 ℃黑暗培养12 h后，计算抑制孢子萌发率，求出毒力回归方程，计算EC50。

孢子萌发率=萌发孢子数/视野下总孢子数×100%；

抑制孢子萌发率=（对照孢子萌发率-处理孢子萌发率）/对照孢子萌发率×100%。

1.2.3壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝形态影响的观察在PDA平板上反接灰霉病菌2 d后，在菌落边缘加0.2 mL的不同浓度壳寡糖溶液后竖插盖玻片，待菌丝长到盖玻片上，取出，直接观察菌丝形态进行比较。

2结果与分析

2.1壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用

从表1可以看出，菌落直径随着壳寡糖浓度的增大呈现递降的趋势，浓度越大抑菌效果越明显，其中300 mg/L壳寡糖对菌丝生长的抑制率1 d时为32.12%，2 d为4735%，5 d为21.48%，1 500 mg/L的抑制率1 d时为100%，2 d为8632%，5 d为81.95%，900 mg/L以上的壳寡糖对菌丝生长的抑制率5 d内均大于50%，1 500 mg/L 的壳寡糖对菌丝生长抑制率5 d内均大于80%。由表2可见，不同处理天数下，壳寡糖对菌丝生长的抑制中浓度EC50不同。其中2 d的EC50最小，为34696 mg/L，5 d的EC50最大，为629.65 mg/L。

2.2壳寡糖对番茄灰霉病菌孢子产生及萌发的抑制作用

从表3可见，壳寡糖对灰霉病菌的产孢量和孢子萌发率都有明显的抑制作用，并且随着处理浓度的升高产孢量和萌发量降低，抑制率增大。300 mg/L条件下，比对照组产孢量减少1.84×107个，抑制率达33.82%；孢子萌发率降低1360百分点，抑制孢子萌发率达到18.38%。

2.3壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝形态的影响

通过显微观察，对照组菌丝细长、细胞壁光滑（图1）；而不同浓度梯度的壳寡糖溶液处理组菌丝则出现不同程度的肿胀、菌丝变粗、分隔增多现象。壳寡糖浓度越大菌丝形态变化越明显（图2、图3）。

3结论与讨论

为了减少对灰霉病防治的农药使用，科研人员研究了不同抑菌物质对灰霉病菌的抑制作用。黄芳等研究结果表明，用0.1% 硼处理灰霉病菌孢子后， 显著抑制了孢子萌发和芽管伸

长[4]；白文苑等研究苍耳的丙酮提取物，其抑制菌丝生长的EC50 为20. 27 mg/mL，在30 mg/mL 浓度下，对番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌发的抑制率均在70%以上，对孢子形成和孢子萌发的EC50 分别为9. 06 、15. 21 mg/mL[5]；廖敏等研究结果表明，硅酸钠在一定程度上能抑制灰霉病菌的生长[6]。本试验研究可食用的壳寡糖对番茄灰霉病菌生长的影响，结果表明，1 500 mg/L壳寡糖对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率均在80%以上，壳寡糖对菌丝生长2dEC50使用浓度为

346.96 mg/L，低于苍耳丙酮提取物；而对菌丝形态变化的观察表明，在浓度为1 500 mg/L时，出现最大程度的肿胀、菌丝变粗、分隔增多的现象。1 500 mg/L壳寡糖对灰霉菌产孢量抑制率高达83. 82%，对孢子萌发的最大抑制率达55.97%。表明壳寡糖对番茄灰霉病菌生长有一定的抑制作用，本试验结果为壳寡糖作为一种绿色药剂防治番茄灰霉病提供了科学依据。

参考文献：

[1]王克勤. 灰霉病菌抗药性研究进展及防治对策[J]. 黑龙江农业科学，2000，7（5）：40-42.

[2]张新虎，何静，沈慧敏. 苍耳提取物对番茄灰霉病菌的抑制作用及抑菌机理初探[J]. 草业学报，2008，17（3）：99-104.

[3]张筠，杜鹏，张亚东. 壳寡糖抑菌作用的研究[J]. 食品工业科技，2009，30（1）：88-90.

[4]黄芳，王建明，徐玉梅. 硼抑制灰霉病菌孢子萌发机制的初步研究[J]. 植物病理学报，2008，38（4）：370-376.

[5]白文苑，沈慧敏. 苍耳愈伤组织提取物对番茄灰霉病菌的抑菌活性[J]. 甘肃农业大学学报，2008，43（4）：82-86.

[6]廖敏，李淼. 硅对草莓灰霉病的防治效果研究[J]. 宿州教育学院学报，2011，14（2）：174-176.王程亮，徐丽君，倪萌，等. 无锡地区桃园梨小食心虫发生规律[J]. 江苏农业科学，2014，42（9）：117-119.