中成药非法添加盐酸西布曲明的快速检测方法研究

★ 杨建冬 余葱葱

(1.宜春市食品药品检验所 江西宜春336000;2.四川省中西医结合医院亚健康监测与评估实验室 四川成都610041)

中西医结合是我国现代卫生事业发展的一大显著特色。合理的中西药联用可使临床疗效增强，近年来一些制假者和不法商贩利用中成药所含成分复杂、质量标准不完善的缺点，在中成药和保健食品中非法添加化学药品，而中成药中擅自加入西药成分，可能会产生不可预知的严重后果。盐酸西布曲明作为一种新型减肥药，其效果是显著的，但近年来盐酸西布曲明在欧盟、澳大利亚等国家和地区进行的临床研究显示，使用该药可能增加受试者严重心血管疾病风险，包括非致死性心梗，非致死性卒中，可复苏的心脏骤停，心血管死亡等。基于国际上对该品种的最新评估结果，2010年10月国家食品药品监督管理局决定停止盐酸西布曲明制剂和原料药在我国的生产、销售和使用。然而，在中成药中擅自非法添加盐酸西布曲明的事件仍有发生。本实验通过利用TLC和HPLC法建立中成药中添加盐酸西布曲明的定性分析方法，该方法能快速有效的检出中成药中的盐酸西布曲明，为消费者的用药安全提供保障。

1 仪器和材料

1.1 仪器 惠普HP1100高效液相色谱仪;N2000色谱工作站;硅胶G板为(自制);929型全自动簿层铺板器;TU1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

1.2 材料 盐酸西布曲明对照品(中国药品生物制品检定所，批号100624-200401);试验样品为市场随机抽检所得;甲醇为色谱纯和分析纯;三氯甲烷，醋酸乙酯，乙酸均为分析纯，改良碘化铋钾溶液。

2 方法

2.1 对照品溶液的配制 取盐酸西布曲明对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液的配制 取本品(口服液5支，混匀，取半支量;胶囊10粒，内容物混匀，称取2粒的量;片剂取10片，研细，混匀，称取相当于2片的量)，置25mL容量瓶中，加甲醇适量，固体制剂超声15min，放冷，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液。即得。

2.3 TLC鉴别 分别取供试品溶液，对照品溶液各10μL，点于经活化的硅胶G板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇(16∶0.5∶0.5)，并滴加乙酸2滴为展开剂，饱和20min后，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾溶液显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，不得显相同颜色的斑点。

2.4 HPLC检查 用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂色谱柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(60∶40，用磷酸调至2.9～3.1)为流动相，检测波长为223nm，进样量均为10μL，注入液相色谱仪中。供试品色谱中，不得出现与对照品保留时间相同的色谱峰。

3 结果与讨论

3.1 TLC鉴别 观察TLC簿层色谱图，其斑点颜色及位置，对应于盐酸西布曲明对照品及阳性对照，供试品呈现出相同的橘红色斑点，样品中其他成分能与西布曲明很好的分离，不干扰鉴别。

3.1.1 展开剂的选择 此实验中由于我们是在中等极性溶剂体系中进行，根据多数文献中报道该类化合物中展开剂选择，最终选择以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇 -浓氨试液(12∶6∶3∶0.5)为展开剂［1］和以氯仿-甲醇(8∶1)为展开剂［2］进行实验摸索，经过考虑环保与实验效果，选择以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇为展开剂，在不断的混合配比后，发现比例在(16∶0.5∶0.5)时能很好的符合上述展开剂的条件，但斑点有拖尾现象，考虑盐酸西布曲明具酸性，于是在原比例展开剂中滴加乙酸2滴并混和，发现展开后组分分离效果好;斑点圆而且集中。

3.1.2 显色剂的选择 一般来说在TLC需要显色，先采用紫外光显色，如果紫外光显色不能成功再考虑使用显色剂。在本实验中由于照紫外后发现其显色效果没有使用显色剂好。参考部分文献后，采用4%氢氧化钠溶液及稀碘化铋钾为显色剂进行显色［1］和改良碘化铋钾溶液显［2］，实验探索后，发现在选用改良碘化铋钾溶液显色进行显色，灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比。

3.1.3 簿层检测的样品检测结果

阳性某生物科技有限公司 20060410 阳性某保健品公司 20070106 阴性某药业公司 20070915生产厂家 批号 结果某药业公司(美国) 20070206阴性

3.2 HPLC定性分析

3.2.1 检测波长的选择 分取一定量甲醇和对照品溶液，先取适量甲醇置于1cm的石英吸收池中，在200nm～400nm处进行基线校准，将第一个吸收池吸中的甲醇溶液倒出，取适量对照品溶液，加入到吸收池中，在200nm～400nm处进行扫描，发现在222nm和200nm附近有吸收峰，但是考虑到甲醇溶液的末端吸收和部分文献的选择，而且该波长出的波基线平稳波形好。所以选择223nm作为检测波长。

图1 高效液相色谱图

3.2.2 流动相的选择 实验中参考部分文献，以文献记载流动相:甲醇 - 水(80∶20，pH4.5)［2］为基础，为考虑实验效果，分别采用10%，20%，70%，80%，90%，100%的甲醇(或乙睛)和0.05mol/L磷酸二氢钾溶液的混合液作为流动相，改变甲醇(或乙睛)溶液和磷酸二氢钾溶液的比值，发现当该比值在(40∶60)在相较于其他比例时更容易出峰，然后用100%的甲醇/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂甲醇的比例和用磷酸调节pH。每次减少10%的有机溶剂甲醇的量，保留因子约增加3倍，调整的过程中，观察各个峰的分离情况，发现当甲醇100%/0.05mol/L磷酸二氢钾溶液且流动相pH为2.9～3.1时出峰好，分离效果佳，而西布曲明用甲醇做时观察峰的分离能达到理想效果，实验中由于时间有限，所以在没做乙腈做流动相时的实验，所以最终选定100%的甲醇和和0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(60∶40，用磷酸调至pH2.9～3.1)作为流动相。

3.2.3 样品的高效液相色谱图 见图1。

3.3 讨论 确定样品中有没有加入盐酸西布曲明相对较容易，通过簿层色谱就能分离检视了，做簿层色谱中发现在盐酸西布曲明的相应斑点处有相应的斑点。若是要最终确定是否添加有西布曲明则需要进一步的实验确定。应采用高效液相色谱法进行定性的检测，对确定为西布曲明有决定性的作用。

曾分别采用50%甲醇，甲醇，二次水为溶剂，进行样品的提取溶剂的比较，试验结果证明，在其他条件完全相同的情况下，其中50%甲醇会使药品中的有效成分溶解不完全，而二次水提取的样品杂质峰较多，所以选择了甲醇作为溶剂本实验在开始时供试品溶液的制备时采用了超声10，15，20min比较，发现15min的效果要好于10min的，但是20min的于15min的无明显差异。所以采用以甲醇为溶剂经过超声处理15min的提取方法。

以上结果表明:本实验能有效的检测出中成药中非法添加的盐酸西布曲明，对于控制中药品种质量有实际意义。

［1］刘吉金，李军等.减肥食品或保健品中非法添加盐酸西布曲明、盐酸芬氟拉明、酚酞的快速检测方法研究［J］.药物分析杂志，2006，26(6):793.

［2］胡娟，郑春松，朱新法的等.减肥中成药中添加西布曲明西药成分的检测［J］.中国药学杂志，2006，41(12):945.