不同种源金银花陕西引种后主要成分的比较分析

孙宁宁，程巧凡，郭增军（1.西安交通大学药学院，西安 710061；.西安碑林药业股份有限公司，西安 710048）

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花；夏初花开放之前采收，干燥；具有清热解毒、疏散风热的功效，用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症［1］。现代医学研究证明，金银花具有抑菌、抗病毒、解热、抗炎、利胆、保肝、降血脂、抗生育的作用，同时对免疫系统有一定的作用［2］。其中抑菌、抗病毒、解热抗炎作用尤为显著，在大多数该类疗效处方中均含有金银花。我国金银花野生资源丰富，有研究资料表明，忍冬属植物全世界约有200种，我国有98种，广泛分布于全国各省区，而以西南部种类最多，其中可供药用的品种达47种［3］。近年来市场需求日益增加，野生资源不能满足市场需要，金银花种植发展迅猛，山东、河南、湖南、河北、山西、甘肃、四川、贵州、新疆等地均有栽培。传统中医认为，河南所产“密银华”和山东所产“济银花”质量最好，为道地药材［4］。习惯认为山东产量大，而河南品质佳［5］。金银花的有效成分主要有有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类、挥发油类、微量元素类等，《中国药典》2010年版金银花的检测是以木犀草苷和绿原酸为指标，其中绿原酸的含量多随产地、加工方法等的不同有较大的差异［6］。为研究不同种源金银花在陕西引种后的质量状况，对种源地为山东九间棚和河南封丘的金银花引种到陕西临潼后，比较分析其传统药用部位花、非药用部位茎和叶中主要成分绿原酸及木犀草苷引种前后的变化，并与陕西产野生金银花进行比较，为陕西引种金银花的质量控制提供一定的科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Dionex UltiMate3000SD全自动高效液相色谱仪（美国戴安公司）；AS10200AD超声波清洗器；Denver TP214分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司）。

1.2 试药 绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110753－200413）；木犀草苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：111720－201106）；甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；实验所用药材分别购自山东九间棚、河南封丘，陕西临潼引种的山东九间棚、河南封丘及陕西临潼产金银花药材。样品编号：1＃山东九间棚（花），2＃陕西临潼引种山东九间棚（花），3＃陕西临潼引种山东九间棚（茎），4＃陕西临潼引种山东九间棚（叶），5＃河南封丘（花），6＃陕西临潼引种河南封丘（花），7＃陕西临潼引种河南封丘（茎），8＃陕西临潼引种河南封丘（叶），9＃陕西临潼野生（花），10＃陕西临潼野生（茎），11＃陕西临潼野生（叶）。

2 方法与结果

2.1 绿原酸含量测定 按照2010年版《中国药典》一部金银花药材含量测定项下的方法测定。

2.1.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈－4mL·L－1磷酸溶液（13∶87）；检测波长327nm；进样量10μL；流速1.0mL·L－1；柱温室温。

2.1.2 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，加体积分数50%的甲醇溶液制成1μg·mL－1的绿原酸对照品溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 取不同产地的金银花药材、陕西临潼野生及引种的金银花茎、花、叶粉末各0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数50%甲醇50mL，称定质量，超声处理30min，放冷，再称定质量，用体积分数50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置于25mL棕色瓶中，加体积分数50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.1.4 测定法 分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。绿原酸对照品、不同产地金银花中绿原酸色谱图见图1。

图1 HPLC图1.绿原酸对照品；2.陕西临潼产金银花；3.山东九间棚金银花；4.河南封丘金银花Fig.1 HPLC chromatograms1.chlorogenic acid reference；2.Shaanxi Lintong；3.Shandong Jiujianpeng；4.He′nan Fengqiu

2.1.5 测定结果 精密称定不同产地金银花药材各3批按以上方法测定绿原酸的含量，每种产地测定值取平均值，结果见表1。

2.2 木犀草苷含量测定 按照《中国药典》2010年版金银花药材项下的含量测定方法。

2.2.1 色谱条件 用苯基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈（A）和5mL·L－1冰醋酸水溶液（B）为流动相，采用梯度洗脱（0～15min，10%～20%A；15～30min，20%A；30～40min，20%～30%A）。流速1.0mL·L－1；检测波长350nm；进样量10μL。

2.2.2 对照品溶液制备 精密称取木犀草苷对照品适量，加体积分数70%乙醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

2.2.3 样品溶液的制备 分别精密称定几种样品粉末各2.0g，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数70%乙醇50mL，称定质量，超声处理1h，放冷，再称定质量，用体积分数70%乙醇补足减失的质量，摇匀，过滤，精密量取滤液10mL，回收溶剂至干，残渣用体积分数70%乙醇溶解，转移至5mL量瓶中，加体积分数70%乙醇至刻度，摇匀即得。

2.2.4 测定法 分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。

2.2.5 测定结果 精密称定不同产地金银花药材各3批按以上方法测定木犀草苷的含量，每种产地测定值取平均值，结果见表1。

表1 不同产地忍冬中不同药用部位的绿原酸及木犀草苷含量Tab.1 The content of chlorogenic acid and luteoloside extracted from different samples（n＝3）

3 讨论

《中国药典》中规定的金银花的指标性成分为绿原酸和木犀草苷。由表1可知，在金银花中，绿原酸的含量为：山东九间棚＞河南封丘＞引种山东九间棚＞引种河南封丘＞陕西临潼本地野生；木犀草苷的含量为：河南封丘＞山东九间棚＞引种河南封丘＞引种山东九间棚＞陕西临潼本地产。2种成分均高于2010年版《中国药典》中规定的绿原酸含量不得少于1.5%、木犀草苷含量不得少于0.05%的标准。

从表1中可以看出，山东九间棚种金银花，原产地药材和引种地药材中绿原酸含量均高于河南封丘种，但源于河南封丘种的金银花，其中的木犀草苷含量要高于山东九间棚种。对比原产地和引种栽培地药材中的含量，2种成分均低于原产地。陕西临潼的地理位置是北纬34.36°、东经109.21°，其维度与河南封丘（北纬34.35°、东经114.14°）和山东九间棚（北纬35.05°、东经118.35°）相近。气候适宜忍冬的生长，对将河南封丘和山东九间棚忍冬优良种移栽后有效成分含量下降的问题，需要从后继的分子生药学数据进行说明。

考察引种种和本地野生种中有效成分含量的变化，从表1中可以看出，引种种的有效成分含量均明显高于本地野生种，这一结果说明，引种种与本地野生种相比，具有较好的二次产物代谢基因。考察引种种不同药用部位中的有效成分含量，结果表明，河南封丘的引种种无论是绿原酸还是木犀草苷，均优于山东九间棚引种种。同时，考察茎和叶中含量的差异，由表1可知，在引种种或本地野生种不同部位中，绿原酸的含量均是花蕾＞叶＞茎。经统计分析，花蕾中绿原酸含量与叶、茎的含量差异显著。张永清等［7］运用紫外分光光度法对金银花茎、叶、花不同器官中的绿原酸含量进行了测定，研究结果与本实验结果一致。

综上所述：2种引种种的有效成分含量均低于原产地，但明显高于本地野生种，且符合《中国药典》2010年版的要求。引种种的栽培能在一定程度上提高陕西产金银花的市场竞争力，并且可以补充金银花市场需要，有较高的市场价值。

［1］国家药典委员会.中国药典2010年版［S］.一部 .北京：中国医药科技出版社，2010：205－206.

［2］常锁.金银花药理研究概况［J］.中国民族民间医药，2010，19（1）：49.

［3］石钺，石任兵，陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展［J］.中国药学杂志，1999，34（11）：724－727.

［4］庞瑞.金银花有效成分的药理学研究进展［J］.陕西中医学院学报，2011，34（3）：77－79.

［5］徐炳声.金银花的原植物研究［J］.药学学报，1979，14（1）：23－24.

［6］李树本，石玉.六种金银花中绿原酸含量分析［J］.西北药学杂志，1986，1（3）：26－28.

［7］张永清 ，徐凌川 ，丁丽萍.忍冬不同部位中绿原酸的含量测定［J］.中国中药杂志，1996，21（4）：204－205.