八珍袋泡茶中阿魏酸的含量测定

王贤英

(重庆市中药研究院，重庆 400065)

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王贤英，副主任中药师，从事药品质量检验和质量标准研究；Tel：(023)89029097，E-mail：wangxianying_315@163.com

八珍袋泡茶中阿魏酸的含量测定

王贤英

(重庆市中药研究院，重庆 400065)

目的建立HPLC测定八珍袋泡茶中阿魏酸的含量。方法采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为313 nm。结果阿魏酸进样量在0.41 ～2.46 μg线性关系良好(r=0.999 8)，平均回收率为99.02%，RSD为0.39%(n=9)。结论此方法简便、准确，可用于八珍袋泡茶中阿魏酸的含量测定。

八珍袋泡茶；HPLC；阿魏酸

八珍袋泡茶是由党参、白芍、白术等8味中药组成的复方制剂，收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第五册，具有补气益血的功效，可用于治疗气血两虚、面色萎黄、食欲不振、四肢乏力、月经过多等症状。方中当归具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功能，为临床常用药。当归含有丁二酸、豆甾醇、异菖蒲烯、菖蒲、二烯谷甾醇、豆甾醇-D-葡萄糖苷、尿嘧啶蒿本内酯、正丁烯酰内酯、阿魏酸、烟酸等成分，其中阿魏酸为主要有效成分之一。现代药理研究显示，阿魏酸具有抑制血小板聚集，抗血栓，抗心肌缺血、缺糖、缺氧等药理作用。原标准中仅收有显微特征鉴别项，无含量测定控制项。为更好地控制产品的质量，笔者参考文献[1]，采用HPLC测定方中当归所含的有效成分——阿魏酸的含量，为八珍袋泡茶的质量控制提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-2010A高效液相色谱仪；岛津AEG-45SM十万分之一电子分析天平(日本)；AB265-S分析天平(梅特勒)；SK250LH超声仪(上海科导超声仪器有限公司)；D101大孔树脂(天津市海光化工有限公司)。

1.2 试药

阿魏酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110773-201313)；八珍袋泡茶(重庆市中药研究院制药厂，批号：120901，121002，121103，规格：2.4 g/袋)。乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇、磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为迪马Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)，流速：1.0 mL·min-1；检测波长为313 nm，进样量10 μL，柱温为30 ℃。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取阿魏酸对照品10.25 mg，置50 mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.205 mg·mL-1的阿魏酸储备液；精密量取3 mL，置50 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，即得12.3 μg·mL-1的阿魏酸对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 取装量差异项下的八珍袋泡茶，研细，混匀，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，称定重量，超声处理(250 W，50 kHz)30 min，取出，放冷，称重，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备 依照处方取除当归以外的中药，按样品制备工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液制备法制成阴性对照液。

2.3 线性范围考察

分别精密吸取2.2项下对照品储备溶液(0.205 mg·mL-1)0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL，置于10 mL量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液10 μL，注入液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=2 758 530.8X+14 322.8(r=0.999 9)，阿魏酸进样量在0.41～2.46 μg与峰面积线性关系良好。

2.4 专属性试验

分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL，进样，结果供试液中阿魏酸色谱峰达到基线分离，阴性对照无干扰，见图1。

A.阿魏酸对照品 B.样品 C.阴性样品图1 八珍袋泡茶及对照品HPLC图

2.5 精密度试验

分别吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积，其RSD=0.70%。

2.6 重复性试验

取同一批号样品，制备9份供试品溶液，分别测定阿魏酸的含量，其RSD=1.35%，表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于放置0，2，4，8，12 h进样10 μL，测定阿魏酸的峰面积，其RSD=1.10%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收试验

分别取0.7，0.5，0.3 g已测定含量的八珍袋泡茶(88.5 μg·g-1)样品各3份，精密称定，分别精密加入高、中、低浓度阿魏酸对照品溶液(12.3 μg·mL-1)5.0，3.5，2.0 mL各3份，按2.2项下制备，并按2.1项下测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 八珍袋泡茶中阿魏酸回收率试验

2.9 样品测定

按2.2项下供试品溶液制备方法和2.1项测定方法，分别对120901，121002，121103 3批样品进行测定，结果阿魏酸的含量分别为88.5，91.2，90.4 μg·g-1。

3 讨论

3.1 提取溶媒的选择

在供试品溶液制备中，分别选用了水、70%甲醇、甲醇进行超声提取，结果表明用70%甲醇溶液作为提取溶媒，测得的图谱分离效果、峰形及含量为最好，所以选择70%甲醇进行超声提取。

3.2 提取时间的选择

选择了超声处理15 min、30 min、1 h，结果超声处理30 min和1 h含量无明显差异，故选定超声处理30 min。

3.3 波长的选择

经采用DAD对阿魏酸对照品色谱峰和供试品溶液中阿魏酸色谱峰在200～400 nm进行扫描，结果两者光谱图一致，均在313 nm有最大吸收。

3.4 流动相的考察

选择了流动相甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶0.75)[2]、乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)[3]、甲醇-水-冰醋酸(28∶71∶1)[4]、甲醇-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱)[5]、乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)[6]、甲醇-0.7%冰醋酸溶液(30∶70)[7]和乙腈-水(17∶83)进行试验，最后选定了正文中的流动相，能使样品的阿魏酸色谱峰达到很好的基线分离。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：124.

[2] 李震宇，杨爱淑.八珍益母胶囊中阿魏酸含量测定[J].中国科技纵横，2012，(3)：253.

[3] 李震宇.八珍丸中阿魏酸含量测定[J].中国新技术新产品，2012，(5)：7.

[4] 周建军，曹亮，耿直，等.归脾丸中阿魏酸含量测定的方法优化[J].时珍国医国药，2011，22(4)：1010-1012.

[5] 周永其，胡道德，刘亮，等.灵杞黄斑颗粒中阿魏酸含量测定[J].医药导报，2012，31(2)：224-226.

[6] 孙立恩.产妇安合剂中阿魏酸含量测定[J].海峡药学，2010，22(10)：74-75.

[7] 张小谦，刘翼华.明目十六味丸中阿魏酸含量测定的方法学考察[J].中国医药指南，2011，9(35)：316-318.

DeterminationofFerulicacidinBazhenDaipaochabyHPLC

WANGXianying

(ChongqingInstituteofChineseMateriaMedica，Chongqing400065，China)

Objective：To develop an HPLC method for determination of Ferulic acid in Bazhen Daipaocha.MethodsThe column was Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，acetonitrile-phosphoric acid (17∶83) as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL·min-1and the detecting wavelength was set at 313 nm.ResultsThere was a good linear relationship for Ferulic acid within the range of 0.41～2.46 μg.The average recovery rate was 99.02% and RSD was 0.39% (n=9).ConclusionThe method is simple，quick and can be used to determin the Ferulic acid of Bazhen Daipaocha.

Bazhen Daipaocha；HPLC；Ferulic acid

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.02.014

2013-11-05)