邵金华 李军艳 刘 欢 邓 佳
(湖南科技学院 生命科学与化学工程系,湖南 永州 425199)
梓树是紫葳科梓属植物,树皮习称梓白皮,果实称梓实,均供药用,具有清热、解毒、杀虫和利尿的功能[1]。梓树是一种多功能综合利用的树种,具有广泛的应用开发价值[2]。我市梓树野生资源丰富,积极开展梓属植物的科学研究与开发应用,具有重要的意义和广泛的应用前景[3]。国内外对其在医药临床方面的研究报告很多[4],而对其根皮部的研究未见报道,本文以梓树根皮为实验材料,对其有效成分进行了系统的定性分析实验,为梓树根皮的进一步开发和提取奠定基础。
梓树根皮采自于湖南省永州市西山上,晾干,植物粉碎机粉碎,备用。
R201D-II-旋转蒸发仪,郑州长城科工贸有限公司;SHB-111-循环水式多用真空泵,郑州长盛实验设备有限公司;ZF-1-三用紫外分析仪,上海精科实业有限公司;DF-101S-集热恒温加热磁力搅拌器,郑州长盛实验设备有限公司等。
乙醇、石油醚、明胶、氢氧化钾、醋酸铅、茚三酮、氯化铁、α-萘酚、间二硝基苯、氯仿、浓硫酸、镁粉、氢氧化钠 、盐酸、苦味酸、浓盐酸、冰醋酸等均为分析试剂。
1.4.1 梓树根皮水提取液的制备
取梓树跟皮粉末5g,加50ml蒸馏水,浸泡24h,滤取部分滤液,供试检氨基酸、多肽、蛋白质。剩余滤渣在50~60℃的水溶液中水浴加热10min-1小时后过滤。滤液供检试单糖、多糖、苷类、皂苷、酚类、鞣质、有机酸、生物碱盐等。
1.4.2 梓树根皮95%乙醇提取液的制备
取梓树根皮粉末10g,加95%乙醇100ml加热回流1小时,冷却,滤过,得滤液。取1/2滤液作黄酮体、蒽醌、酚类、香豆素、内酯、有机酸、鞣质、萜类、强心苷、甾体类等检查。
1.4.3 梓树根皮酸水提取液的制备
将95%乙醇提取液剩余1/2滤液置水浴上浓缩成膏状(至无醇味),加入5%盐酸溶液摇之溶解,滤过,取滤液即得酸水提取液,作生物碱检查。
1.4.4 梓树根皮乙醚提取液的制备
取梓树根皮粉末1g,加入石油醚 10ml,60℃~90℃水浴加热 2~3个小时,过滤,滤液放在表面皿上,让石油醚挥发,残留物加95%的乙醇后进行萜类、甾类、脂肪等项的检查。
操作要点实验[5-6]
1.5.1 明胶试验
取检测液,加1%明胶溶液2~3滴,如变浑浊或有沉淀为鞣质的正反应。
1.5.2 碱性试验
取检测液,加 10% KOH液1~2滴,呈深红色为蒽醌类正反应。
1.5.3 碱性苦味酸反应
取检测液,加碱性苦味酸试剂1~3滴,观察现象。
1.5.4 开环闭环试验
取检测液,加1% NaOH 1ml,于沸水浴上加热10min后加10%盐酸后,如溶液变浑浊,再加20%NaOH溶液碱化,则又转为澄明,为内酯、香豆素类的正反应。
1.5.5 硅钨酸试验
取检测液,加入硅钨酸试剂,如有淡黄色或灰白色沉淀,则表明含有生物碱。
1.5.6 间二硝基苯试验
取检测液,加间二硝基苯试剂,出现黄褐色或紫色为甾体类正反应。
1.5.7 氯仿-浓硫酸反应
取氯仿液于干燥小试管内,沿管壁小心加浓硫酸,如氯仿层呈红色,浓硫酸层有绿色荧光,为植物甾醇的正反应。
1.5.8 茚三酮试验
取检测液,滴于滤纸上,喷洒0.2%茚三酮后于110℃加热后,观察现象,如出现蓝紫色或黄色斑点为氨基酸、多肽的正反应。
1.5.9 加热沉淀试验
取检测液,,加热至沸,如出现浑浊或沉淀时,表明有蛋白质。
1.5.10 α-萘酚试验(Molish 反应)
取检测液,,加10%α-萘酚乙醇溶液2~3滴,摇匀,沿试管壁缓缓加入1ml浓硫酸,界面出现紫色环,为糖、多糖、及苷类的正反应。
1.5.11 碱性酒石酸铜试验(Fehling反应)
取检测液,,加新配制的碱性酒石酸铜试剂,在沸水浴上加热10min。如产生砖红色沉淀为还原糖的正反应。
1.5.12 三氯化铁试验
取检测液,,加1%三氯化铁溶液1~2滴,呈蓝色或绿色为酚类的正反应。
1.5.13 泡沫试验
取检测液,在试管中,用力振摇2min,如产生的泡沫持续10min以上不消失,为皂苷的正反应。
1.5.14 pH试纸检测
取检测液,滴于滤纸上,用0.05%溴酚蓝乙醇溶液喷雾,在蓝色背景上有黄色带为有机酸的正反应。
1.5.15 紫外灯下照射
取检测液,滴于滤纸上,在紫外灯下观察,发有天蓝色、蓝绿色或黄绿色荧光带为香豆素类的正反应。
1.5.16 双缩脲实验
取检测液,加10%氢氧化钠溶液两滴,摇匀,再滴加0.5%硫酸铜溶液两滴,摇匀,如呈紫色、红色为蛋白质或多肽的正反应。
1.5.17 碱式醋酸铅反应
取检测液,加饱和碱式醋酸铅试剂,如有黄色沉淀,为黄酮类正反应。
表1 水提取液定性检测实验结果Table 1 Results of qualitative determination about water extract
表2 95%乙醇、5%盐酸提取液定性检测实验结果Table 2 Results of qualitative determination about ethanol extract
注:“++”表示反应显著,“+”表示有此反应,“-”表示无此反应
表3 石油醚提取液定性检测实验结果Table3 Results of qualitative determination about Petroleum ether extract
通过对梓树皮化学成分的初步研究,梓树根皮中可能含有蛋白质、氨基酸、多肽、皂苷、糖苷类、黄酮、有机酸类、生物碱、蒽醌类、内酯、香豆素类等化学成分。
本文首次对梓树根皮进行化学成分预实验,初步确定了其可能含有多种有效成分,为进一步对该植物的生物活性成分的确定、提取、分离、纯化研究提供了试验基础。
[1]赵永昕,帕提古丽﹒马合木提.新疆天山花楸不同部位总黄酮的提取及其含量测定[J].食品科学,2005,26 (9):414-415.
[2]王奇志,梁敬钰.梓实化学成分研究[J].中草药,2005,36(1): 15-17.
[3]李朝虹,古代梓.楸考异[J].北京林业大学学报,2007, 6(4): 20-24.
[4]王奇志,梁敬钰.梓属植物化学成分研究进展[J].中草药, 2003, 34(7):2-4.
[5]王润梅,岳志劲,张永芳.北芪菇化学成分的初步研究[J].山西大同大学学报:自然科学版,2012,28( 4): 32-34.
[6]任杰,刘洪位,郭莉,等.紫茎泽兰化学成分初步研究[J].广州化工,2011,39(15):123 -124.