复方奥美拉唑胶囊质量控制方法的研究

胡晨，邓紫薇，王旭，房志仲，朱立勤

（1.天津医科大学一中心临床学院，天津300192；2.天津市第一中心医院药学部，天津300192；3.天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）

奥美拉唑（o meprazole，OMP） 是一种 H＋－K＋－ATP酶（质子泵）抑制剂，OMP与特异性 H＋－K＋－ATP酶有两个结合位点，对胃酸分泌有明显抑制作用，起效迅速，适用于消化性溃疡(胃、十二指肠溃疡)、反流性食管炎和胃泌素瘤[1-2]。该药作为第一代质子泵抑制剂具有疗效显著、复发率低、不良反应少及服用方便等特点，临床应用广泛[3]。2006年，由Santarus公司研制、商品名为Zegerid的复方奥美拉唑胶囊上市，即将OMP与碳酸氢钠制成复方制剂，为首个上市的质子泵抑制剂速释制剂，每粒胶囊中含OMP 20mg与碳酸氢钠1 100mg，处方中碳酸氢钠可以保护OMP不被降解，同时起到中和胃酸的作用，起效迅速[4]。碳酸氢钠为吸收性抗酸药，口服能被吸收而影响体液的酸碱平衡。主要用于治疗胃酸过多症、代谢性酸中毒、与磺胺类药合用碱化尿液[5]。根据文献报道，笔者研制了该复方胶囊，并建立了相应的质控方法，为申报仿制药物制剂奠定理论基础。

1 材料和方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 美国高效液相色谱仪Spectra-Physics，检测器 Spectra Focus100，输液泵 SP8810，Anastar色谱工作站；色谱柱TIANHE誖KromasilC18（200 mm×4.6 mm，5μm）；紫外可见分光光度计（UV－3310，日立公司)；RCZ-8A智能药物溶出仪（天津市鑫州科技有限公司）；KQ-100B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ALC-210.4型电子分析天平（北京赛多利斯系统仪器有限公司）；80-2B型台式离心机（上海安亭科学仪器有限公司）；酸度计PHS-25（数显）pH计（上海精密科学仪器有限公司）。

1.1.2 试剂 奥美拉唑对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100367-201104）；奥美拉唑原料（湖北远诚药业，批号：A-10411107001）；复方奥美拉唑胶囊（本室自制）；甲醇（天津市康科德科技有限公司，色谱纯）；乙腈（天津市康科德科技有限公司，色谱纯）；其它试剂均为市售分析纯；重蒸水（自制）。

1.2 方法

1.2.1 奥美拉唑的质量控制方法

1.2.1.1 紫外分光光度法的建立[6～7]

1.2.1.1.1 样品溶液的制备：（1）对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的OMP对照品10mg置100mL量瓶中，加入少量甲醇超声溶解，再稀释至刻度。过滤，所得续滤液作为浓度为100μg/mL储备液；（2）样品溶液的制备：取20粒胶囊内容物，混匀，研细后，取 118.7mg（相当于 OMP 2mg），置 50 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释，超声20min，静置至室温，用甲醇稀释定容。取一定量的溶液，离心，3 000 r/min，5min。取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤。取续滤液2.5mL置10mL棕色量瓶中，用甲醇稀释定容，即得样品溶液；（3）空白溶液的制备：按照制剂处方去除OPM制成空白胶囊，其它操作同样品溶液的制备过程，得到空白溶液。

1.2.1.1.2 标准曲线的绘制：精密吸取0.2、0.5、0.75、1、1.25、1.5、1.7mL 储备液于 10mL 的量瓶中，稀释成 2、5、7.5、10、12.5、15、17 μg/mL 标准溶液，以甲醇为空白溶液，测定其吸光度，计算回归方程。

1.2.1.1.3 精密度试验：将OMP对照品配制成10 μg/mL浓度溶液，用甲醇定容，一天内重复测定6次，得日内精密度；连续测定6 d，得日间精密度，计算RSD。

1.2.1.1.4 稳定性试验：按照“1.2.1.1.1⑵”项下操作，其中一份避光放置，一份不避光，分别在0、3、6、9、12、24 h 测定其吸光度，计算 RSD。

1.2.1.1.5 重复性试验：精密量取同一批样品适量，共6份，分别按照“1.2.1.1.1⑵”项下供试品制备方法制备供试品溶液，在302 nm处测定吸光度，结果OPM的RSD=0.66%（n=6），表明本方法重复性良好。

1.2.1.1.6 含量测定：按照“1.2.1.1.1⑵”项下操作，制备样品溶液，在302 nm处测定吸光度，计算含量。

1.2.1.1.7 回收率试验：精密称取干燥至恒重的OMP对照品50mg，于50mL量瓶中，配制成1mg/mL储备液，分别吸取0.8、1、1.2mL（即处方量80%、100%、120%），分别加入处方量的辅料置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解，超声振荡20min后定容至刻度，3 000 r/min离心10min，吸取5mL置10mL棕色量瓶中，照分光光度法在302 nm波长下测定其吸光度值，并将测得值与加入值比较，计算其回收率。

1.2.1.2 HPLC方法的建立[8～9]

1.2.1.2.1 色谱条件的选择：选用反向硅胶色谱柱TIANHE誖 Kromasil-C18柱（200mm×4.6mm，5μm）为固定相，流动相：甲醇-水-磷酸-三乙胺=60∶40∶0.12∶0.3，流速为 0.8mL/min，柱温为室温。

1.2.1.2.2 专属性试验：分别以流动相作溶剂，配制复方奥美拉唑胶囊的溶液、OMP原料药溶液及各种辅料的溶液。将所配溶液按照确定色谱条件进行测定，记录色谱图。

1.2.1.2.3 样品溶液的制备：⑴对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的OMP对照品10mg，于50 mL量瓶中，先加入少量流动相超声溶解，再稀释至刻度，过滤，所得续滤液作为浓度为200μg/mL储备液；⑵样品溶液的制备：按照“1.2.1.1.1⑵”项下操作，即得样品溶液；⑶空白溶液的制备：按照“1.2.1.1.1⑶”项下操作，得到空白溶液。

1.2.1.2.4 标准曲线的制备：精密吸取0.1、0.25、0.5、0.75、1.00、1.25、1.50mL 储备液于 10 mL 的量瓶中，用流动相稀释成 2、5、10、15、20、25、30 μg/mL标准溶液，分别进样20μL，记录峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标进行线性回归。

1.2.1.2.5 精密度试验：吸取“1.2.1.2.3项下”储备液1mL置10mL量瓶中，用流动相稀释，所得溶液按照确定色谱条件同一天内平行进样6次，计算RSD值，得到日内精密度。连续进样6 d，计算RSD值，得到日间精密度。

1.2.1.2.6 稳定性试验：取同一供试品溶液适量，按照“1.2.1.2.1”项下色谱条件分别于制备后 0、3、6、9、12、24 h进样20μL测定，记录峰面积。

1.2.1.2.7 重现性试验：精密量取同一批样品适量，共6份，分别按照“1.2.1.2”项下供试品制备方法制备供试品溶液，按照“1.2.1.2.1”项下色谱条件各取20μL进样测定，记录峰面积。

1.2.1.2.8 回收率试验：处理方法同“1.2.1.1.1⑵”项下供试品制备方法制备供试品溶液，溶剂由甲醇改成流动相。

1.2.1.2.9 含量测定：取20粒胶囊内容物研细后，取118.7mg（相当于OMP 2mg），置50mL棕色量瓶中，用流动相稀释，超声20min，静置至室温，用流动相稀释定容。取一定量的溶液，离心，3 000 r/min、5min。取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤。取续滤液5mL置10mL棕色量瓶中，用流动相稀释定容，即得样品溶液。按照“1.2.1.2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积（A），按照外标一点法，计算浓度，测定OMP的含量，将其结果与紫外分光光度法的结果进行t检验，比较两种方法是否存在显著性差异。

1.2.1.2.10 含量均匀度试验：取本胶囊1粒，称重，精密称量取所有囊壳内细粉，置于50mL量瓶中，用流动相冲洗胶囊壳，冲洗液加入量瓶中，加适量流动相稀释，超声20min，放冷定容。取一定量的溶液，离心，3 000 r/min、5min。取上清液，用 0.45 μm微孔滤膜过滤。取续滤液5mL置10mL棕色量瓶中，用流动相稀释定容，即得样品溶液。按此要求共检测10粒。按照上述色谱条件进样，测定峰面积（A），按照外标一点法，计算浓度，测定OMP的含量，应符合药典规定。

2 结果

2.1 奥美拉唑对照品紫外分光光度法的结果

2.1.1 检测波长的选择 由图1和图2可以看出，OMP对照品在302 nm处有最大吸收，且辅料在此波长处对主药的测定无干扰，所以确定302 nm为药物的检测波长。

图1 奥美拉唑对照品的甲醇溶解和流动相溶解的紫外扫描图Fig 1 UV spectrum of omeprazole reference inmethanoland in m obilephase

2.1.2 奥美拉唑对照品的标准曲线 以吸光度值（A）对浓度（C）作线性回归，得标准曲线，方程为：y=0.0503x-0.0066，r=0.9998。结果表明，在2～17μg/mL的浓度范围内，线性关系良好。

图2 空白辅料在碳酸氢钠水溶液和PBS 6.8中的紫外扫描图Fig2 UVspectrum ofblankexcipientsinsodium bicarbonatesolution and in PBS 6.8

2.1.3 精密度试验结果 日内精密度的RSD为0.44%，日间精密度的RSD为0.75%，均小于2%，方法重现性良好，符合要求。

2.1.4 样品溶液稳定性考察结果 未避光放置的样品溶液在9 h时测量其吸光度值降低，而采取避光处理的样品溶液在24 h内的稳定性符合要求，RSD<2%，提示奥美拉唑见光易降解，需要避光保存。见表1。

表1 奥美拉唑样品稳定性试验（n=12）Tab1 Stability of omeprazole sampleby theUV analysis（n=12）

2.1.5 回收率试验结果 方法回收率为98%～102%，RSD<2.0%，符合规定。证明在高、中、低3个浓度范围内，本处方辅料不影响OMP的测定，该方法具有良好准确度。见表2。

2.2 奥美拉唑HPLC测定结果

2.2.1 专属性试验结果 分别取“1.2.1.2.3”项下对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，按照“1.2.1.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果表明，OPM的保留时间约12min，阴性对照对测定结果无干扰。色谱见图3～4。

表2 回收率试验结果（n=9）Tab2 Resultsof recovery test（n=9）

图3 奥美拉唑原料药HPLC色谱图Fig 3 HPLC chrom atogram sof om eprazole

图4 空白辅料HPLC色谱图Fig 4 HPLC chrom atogram sof blank

2.2.2 奥美拉唑的标准曲线 以峰面积(A)对浓度（C）做线性回归的标准曲线，方程为A＝71 627C-9 783，r=0.999 9（n＝3），结果表明，OMP 在 2～30 μg/mL的浓度范围内线性良好。

2.2.3 精密度结果 日内精密度的RSD为0.60%，日间精密度的RSD为0.56%，均小于2%，方法重现性良好，符合要求。

2.2.4 稳定性试验结果 OPM样品稳定性试验RSD 为 0.54%（n＝12），OMP 避光保存在 24 h 内稳定。

2.2.5 重现性试验结果 OPM的RSD为0.66%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.2.6 回收率试验结果 OMP的回收率为98.00%～102.00%，RSD均小于2%，符合规定，见表3。

表3 回收率试验结果（n=9）Tab3 Resutsof recory test（n＝9）

2.2.7 含量测定结果 测得3个批次复方奥美拉唑胶囊中OMP的平均含量为99.36%，RSD为0.57%。根据2010年版《中国药典》（二部）规定，OMP含量应在90.00%～110.00%之间，相对标准偏差小于2%，符合要求。

2.2.8 含量均匀度试验结果 复方奥美拉唑胶囊中：A+1.80S 为 2.17＜15.0，符合规定，见表 4。

表4 复方奥美拉唑胶囊的含量均匀度（n=10）Tab4 The content uniform ity of com pound omeprazole capsules（n＝10）

3 讨论

3.1 超声时间的确定 取6粒样品研细后，取118.7mg置50mL量瓶中，加入流动相，分别超声5 min、10min、20min，静置，用流动相稀释定容。取一定量的溶液，离心5min，转速为3 000 r/min。取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤。分别吸取续滤液5mL至10mL量瓶中，用流动相稀释定容，即得样品溶液，分别进样，计算结果表明：超声20min的复方奥美拉唑胶囊中OMP的含量高于其他两种方法，因此选择超声20min的提取方法。

3.2 色谱条件的选择 不同流动相比例的考察：分别配制甲醇-水-磷酸-三乙胺=61∶39∶0.12∶0.3，甲醇-水-磷酸-三乙胺=62∶38∶0.12∶0.3，甲醇-水-磷酸-三乙胺=59∶41∶0.12∶0.3 不同比例的 3 种流动相，分别精密量取对照品20μL进样，流速均为0.8mL/min，观察OMP的出峰情况。含量测定结果显示，流动相的比例和流速有微小的变动对其几乎没有影响，说明本方法耐用性良好。

3.3 紫外分光光度法和HPLC法比较 两种质量控制方法的结果通过t检验进行分析，P值均＞0.05，说明两种方法无显著性差异，由于杂质及有关物质检测的需要，所以首选HPLC法，紫外分光光度法可以作为溶出度结果的考察方法。

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