胃炎清胶囊对慢性胃炎大鼠模型治疗作用的实验研究

邱赛红 ，李 笑 ，李 侠 ，曾晓艳 ，余 娜

（1．湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学2013级硕士研究生班，湖南 长沙 410208；3.湖南省嘉禾中医院，湖南 郴州 424500）

胃炎清胶囊对慢性胃炎大鼠模型治疗作用的实验研究

邱赛红1，李 笑2，李 侠3，曾晓艳1，余 娜1

（1．湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学2013级硕士研究生班，湖南 长沙 410208；3.湖南省嘉禾中医院，湖南 郴州 424500）

目的分析以清热燥湿和胃法组方的胃炎清胶囊对慢性胃炎的治疗作用及机制。方法取成年大鼠，交替用新鲜牛胆汁、丙三醇及乙酰水杨酸大剂量灌胃制备慢性胃炎模型。模型成立后分组给药，并设空白与阳性药对照。治疗6周后取胃，分析胃液成分并进行胃组织形态学病理分析。结果造模使大鼠胃液的pH升高，胃酸分泌减少，胃黏液屏障的黏液游离。病理学可见胃黏膜上皮变性，固有膜水肿充血和炎细胞浸润，腺体变短、数目减少及结缔组织增生等萎缩性改变。与模型组比较，胃炎清使胃液游离酸和总酸度明显提高，胃液蛋白酶活性增强，胃液中游离黏液分泌减少；胃黏膜组织的病变程度减轻，病理计分下降。作用随剂量的增加而增强，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论胃炎清胶囊对治疗大鼠慢性胃炎有效。可缓解消化不良的临床症状，并减轻胃黏膜的病理改变。

胃炎清胶囊；慢性胃炎；动物模型

1 材料

1．1 药物

胃炎清胶囊由湖南省嘉禾县中医院制剂室提供，为供灌制胶囊用的内容物，含生药量0.84 g/kg，批号：20090925。试验时用蒸馏水配制成所需浓度。胃复舒胶囊由昆明滇虹药业有限公司生产，0.3 g/粒，批号：20090510。试验时去胶囊取内容物用蒸馏水配制成所需浓度。

1．2 动物

SD大鼠70只，清洁级。体质量220～250 g，雌雄各半。由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，生产许可证号SCXK(湘)2009-0004。在湖南中医药大学实验动物中心饲养、观察，使用许可证号SYXK(湘)2009-0001。

1.3 仪器

FA1004电子天平（上海天平厂生产）；754型分光光度计（上海第三分析仪器厂生产）；Motic显微镜摄影系统（北京麦克奥迪公司生产）。

1.4 试剂

玉敏没有让步，坚持请许沁配合。玉敏不再脆弱了，脆弱是没有用的，就是把万里长城哭倒了，也不会飞来三十万。玉敏继续给许沁打电话，许沁一直未接。四五天后，许沁停机了。

新鲜牛胆汁取自长沙市定点屠宰场。乙酰水杨酸片由湖南新汇制药有限公司生产，批号：20090402。45度白酒为北京红星二锅头酒厂生产。阿利新蓝为Fluka公司产品。胃蛋白酶测试盒由南京建成生物工程研究所提供，批号：20090829。其他试剂均为市售AR级。

2 方法

2．1 慢性胃炎模型的建立

参照文献[2-4]，先制备造模用的两种试剂。试剂A：将新鲜牛胆汁与丙三醇（甘油）按1∶1体积配成。试剂B：取乙酰水杨酸用45度白酒配制成3%溶液。大鼠称质量、编号后，随机取14只作为正常对照，其余均进行灌胃造模：每周2次以试剂A按4 mL/只灌胃；每周1次以试剂B按10 mL/kg灌胃。造模5周后，每周抽检雌雄大鼠各1只，剖检观察胃黏膜与正常动物比较。观察造模动物是否已有充血、水肿及缺损、出血点等形成，以确定模型是否建立。

2．2 动物分组及给药

上述造模方法连续6周后，观察造模动物胃黏膜呈灰白色且无光泽，伸展性较差，表面黏液少，可见散在出血点。而正常动物胃黏膜表面则平整光滑，呈粉红色，附有一层较厚的黏液，弹性好。由此表明，所制备的大鼠慢性胃炎模型已建立，即进行分组给药。造模后的大鼠按体质量分层，随机分为5组。即模型对照组，胃炎清高、中、低剂量组和胃复舒阳性对照组，每组10只。模型组和正常组给蒸馏水，胃炎清胶囊低、中、高剂量分别为1.94、3.88、7.77 g/（kg·d）（分别相当于临床等效剂量 0.75、1.5、3 倍）；胃复舒胶囊为 0.5 g/（kg·d）(相当于临床等效剂量)。每日灌胃给药，灌胃容量均为10 mL/（kg·d）。连续6周，每周称大鼠体质量1次，根据体质量变化调整灌胃量。给药期间，仍按原造模方法继续灌胃造模。当天需造模灌胃时，与试验用药分别在上、下午进行。

2．3 检测指标

2．3．1 标本采集 末次给药结束后，大鼠禁食24 h，不禁水。3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉动物后腹中线切口，结扎幽门。从十二指肠给药1次。缝合创口。5 h后以颈椎脱臼法处死动物，摘取全胃。沿胃大弯剖开胃腔，收集胃液。并用4 mL蒸馏水分2次冲洗胃腔。将收集的胃液离心(3 000 r/min，15 min)后取上清液，供胃液分析用。观察记录各组大鼠胃黏膜大体情况后，剪取前胃至幽门处1.5 cm×1.5 cm全层胃壁1块，用4%甲醛固定供病理学检查。

2．3．2 胃液分析 取胃液分别进行胃酸、胃蛋白酶活性及游离黏液量测定。（1）胃酸测定：取胃液1 mL。加入甲基橙和酚酞指示剂各2滴，混匀后呈樱红色。用0.01 mol／L NaOH标准溶液滴定至樱红色消失、开始出现橙黄色所用的NaOH量为胃液的游离酸终点量。继续滴定至出现红色所用的NaOH量总和为胃液的总酸度终点量。按下式计算游离酸和总酸度：游离酸(mmol／L)=游离酸度终点量×NaOH 浓度×1 000；总酸度(mmol／L)=总酸度终点量×NaOH 浓度×1 000。（2）胃蛋白酶活性测定：按照胃蛋白酶试剂盒说明书方法进行。（3）胃液中游离黏液量测定：取胃液1 mL，加入 1%阿利新蓝溶液 0．1 mL 和 PBS(pH 5．8)3.3 mL，再加蒸馏水至5．0 mL，混匀。 室温静置24 h；3 000 r/min离心10 min。取上清液于波长615 nm处比色，计算阿利新蓝量。所得值与加入胃液标本中的阿利新蓝量的差值，即为游离黏液量。

2．3．3 胃壁组织病理组织学检查 取经固定的胃壁组织，经常规脱水、包埋、切片，HE染色，光镜下观察胃黏膜的病理变化情况。就上皮细胞变性、坏死，黏膜及黏膜下炎症细胞浸润及腺体减少与结缔组织增生的程度进行分析判断。对所观察的组织学改变进行病变程度分析。依次按 “-”、“+”、“++”、“+++”进行半定量。其中“-”为无明显改变，“+”为病理改变轻微，“++”为病理改变明显，“+++”为病理改变严重。分别计为0、1、2、3分，对病变计分进行统计学分析。

2．4 统计学分析

3 结果

3．1 对慢性胃炎模型胃液酸度的影响

与正常对照组比较，模型组动物的胃液游离酸减少，总酸排出量明显下降（P<0.01）。采用胃炎清治疗的各组，胃液中游离酸和总酸度与模型组比较均有提高，其作用随剂量的增加而更明显，其中中、高剂量组与模型组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。表明胃炎清对慢性胃炎模型的胃酸减少有治疗作用。胃复舒胶囊的作用与模型组比较明显（P<0.01）。 见表 1。

表1胃炎清对慢性胃炎大鼠胃液酸度的影响（±s，n=10，mmol/L）

表1胃炎清对慢性胃炎大鼠胃液酸度的影响（±s，n=10，mmol/L）

注：与正常组比较☆P<0.05，☆☆P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01。下表同。

组 别正常组模型组胃炎清组低胃炎清组中胃炎清组高胃复舒组剂量[g/（kg·d）]— —1.94 3.88 7.77 0.50胃液游离酸52.32±4.85 34.68±4.23☆☆33.98±4.22 40.92±3.15**42.10±5.72**40.86±3.79**胃液总酸90.99±10.33 60.36±7.85☆☆61.36±7.95 73.01±3.74**74.11±9.44**72.93±4.95**

3．2 对慢性胃炎模型胃蛋白酶活性与游离胃黏液的影响

模型组大鼠胃液胃蛋白酶活性明显低于正常组（P<0.01），胃液中游离黏液较正常组动物明显升高（P<0.01）。不同剂量的胃炎清胶囊对模型大鼠的胃液蛋白酶活性有提高的作用，游离黏液量分泌减少，中、高剂量与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。见表 2。

表2 胃炎清对慢性胃炎大鼠胃蛋白酶活性与游离胃黏液的影响 （±s，n=10）

表2 胃炎清对慢性胃炎大鼠胃蛋白酶活性与游离胃黏液的影响 （±s，n=10）

组 别正常组模型组胃炎清组低胃炎清组中胃炎清组高胃复舒组剂量[g/（kg·d）]— —1.94 3.88 7.77 0.50胃蛋白酶活性（U/mL）98.35±12.32 49.05±18.87☆☆49.40±9.47 65.97±8.95*74.30±23.98**69.40±12.45**游离黏液量（mg阿利新蓝）0.72±0.07 0.82±0.04☆☆0.78±0.03 0.76±0.05*0.75±0.03*0.76±0.06*

3．3 胃壁组织结构形态观察结果

肉眼观察，正常组胃黏膜组织表面呈粉红色，光滑而有光泽，有较多透明的黏液。造模动物的胃黏膜颜色较浅呈灰白色或暗红，缺少光泽，表面黏液少，部分可见散在出血点。部分胃黏膜表面有苔状物，去除后暴露出黏膜下血管。其中模型组上述病变程度最为明显，各治疗组较模型组均有不同程度的减轻。

HE染色后光镜下观察，正常组胃壁组织各层结构清晰。黏膜上皮完整，固有膜内腺体排列密集，黏膜下层无血管扩张充血。模型组大鼠黏膜层变薄，上皮细胞变性坏死、脱落明显，黏膜层及黏膜下均有较多的炎细胞浸润。间质内胃腺减少、或呈囊状扩张，可见结缔组织增生。采用胃炎清及胃复舒治疗的各组，胃组织的病理改变均较模型组不同程度减轻。上皮的变性、坏死、脱落减轻，炎细胞浸润减少。腺体减少程度较轻。病变计分统计学结果，中剂量以上较模型组降低，差异有统计学意义 （P<0.05，P<0.01）。见表3及图1所示，彩图见64页。

4 讨论

慢性胃炎作为消化系统最常见的疾病，发病率有随年龄的增长而增高的趋势。有报道[5]认为，年过50岁的人约有半数患过此病。慢性胃炎的临床表现缺乏特异性症状，主要表现为消化不良症状：上腹部饱胀，疼痛，嗳气，恶心，食欲减退等。组织学上，胃黏膜持续性存在慢性炎症性病变，常易发展为萎缩性改变。

表3 各组胃壁组织切片病理学检查结果（±s，n=10，分）

表3 各组胃壁组织切片病理学检查结果（±s，n=10，分）

病理计分组 别正常组模型组胃炎清组低胃炎清组中胃炎清组高胃复舒组剂量[g/（kg·d）]— —1.94 3.88 7.77 0.50上皮细胞变性0 2.30±0.82☆☆2.10±0.88 1.80±0.79 1.30±0.95**1.50±1.08*炎细胞浸润0.10±0.32 2.30±0.67☆☆1.70±0.95 1.20±0.79**1.00±0.67**1.30±0.82**腺体减少及纤维化0.10±0.32 1.70±0.48☆☆1.20±0.79 0.80±0.63**0.60±0.52**1.00±0.82*

慢性胃炎的具体发病原因虽然尚不十分清楚，但各种不良因素的持续刺激对胃的损害仍是最主要的原因。现代生活中，嗜食辛辣、滋腻之物，和进食无规律等不良的生活习性，是造成慢性胃炎发病率增加的重要因素。故本研究制备慢性胃炎模型的方法，综合了文献报告的多种方法，模拟生活中多因素对胃刺激，采用大剂量牛胆汁及水杨酸与酒交替灌胃。灌胃的几种物质都含有对胃刺激成分。胆汁中的胆盐削弱胃黏膜的保护，使胃腔中的酸反弥散入胃黏膜；水杨酸和酒直接损伤胃黏膜。造模时的大体积灌胃量模拟暴饮暴食环节。采用本法造模可引起动物胃黏膜壁细胞的受损，造成胃液pH升高，胃酸分泌减少，组成黏液屏障的胃黏液游离和胃蛋白酶的分泌减少。上述改变与黏膜上皮受损及随着病变加剧而出现的胃腺萎缩有关。

研究显示，胃炎清能减轻造成消化不良症状反应的胃酸异常，可针对性改善慢性胃炎的临床症状；可减轻慢性胃炎病变过程中的上皮细胞变性、胃壁组织炎细胞浸润、腺体减少及纤维化等胃壁组织的病变程度。由此认为，胃炎清胶囊治疗慢性胃炎具有较好的药理学基础。

一般认为，慢性胃炎的中医辨证有虚、实不同的多种证型[6]。嘉禾具中医院通过对临床诊疗进行总结发现，当地以脾胃湿热证型居多。其原因有可能与嘉禾地处湘南，气候潮湿，人们嗜食酒、烟、火锅等辛辣滋腻之物有关。治宜清热燥湿，理气和胃为主。故以黄连、黄芩、厚朴等组成“胃炎清胶囊”。立法组方与临床实际密切联系，是该制剂多年来能取得较好疗效的重要基础。另也有研究报道认为，湿热毒邪留恋脾胃是导致慢性胃炎反复发作的重要病机，清热燥湿和胃法对本病的治疗具有重要的作用[7-8]。故在中医药对慢性胃炎的临床治疗中，清热燥湿和胃法是值得引起重视的有效治法。

图1 各组胃黏膜组织病理切片显微图（HE 10×25）

[1]中华医学会消化病学分会．中国慢性胃炎共识意见(J]．胃肠病学，2006，11(11)：674-684．

[2]项 尊，姒安敏，黄怀德.大鼠慢性胃炎模型的快速建立及致萎缩因素探讨[J].浙江大学学报（医学版），2001，30（1）：16-18.

[3]朱烈彬，卢训丛，石新兰，等.乳鹿膏治疗大鼠慢性胃炎的试验研究[J].湖北中医杂志，2008，30（2）：12-14.

[4]郑 亿，王玉华，付丽佳，等.胃乐冲剂对大鼠慢性萎缩性胃炎的实验研究[J].中国伤残医学，2008，16（5）：22-24.

[5]单兆伟．内科多发病中西医综合治疗[M]．北京：人民卫生出版社，2003：229.

[6]中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会．慢性胃炎中西医结合诊疗共识意见(2011·天津)[J]．现代消化及介入诊疗，2012，17(3)：172-177.

[7]梁玉瑛，张淑娥.清热化湿颗粒治疗急、慢性胃炎104例[J].陕西中医，2007，28（9）：1 143-1 144.

[8]蔡星晖.清热燥湿解毒法治疗胆汁反流性胃炎78例[J].长春中医药大学学报，2009，25（3）：370-371.

（本文编辑 杨 瑛）

Experimental Study on Treatment of Chronic Gastritis Rat Models by Weiyanqing Capsule

QIU Saihong1,LI Xiao2,LI Xia3,ZENG Xiaoyan1,YU Na1
(1.School of Pharmacy,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China;2.2013 Master Degree Candidate,Hunan University of Chinese Medicine,Hunan Changsha 410208,China;3.Jiahe Hospital of TCM,Chenzhou,Hunan 424500,China)

ObjectiveTo analyze the effect and pharmacological basis of Weiyanqing capsule composed of heat-clearing,dampness-eliminating and stomach-regulating medicine on chronic gastritis.MethodsThe adult rats were given a gavage of fresh oxgall,glycerol andacetylsalicylic acid with large doses alternately to prepare the chronic gastritis models.After the modles built successfully,each group was given medicine.The blank group and positive control group were set at the same time.Their stomachs were taken out after 6 weeks of treatment,the composition of gastric juice and the pathology of stomach tissue morphological were analyzed.ResultsThe increased pH of gastricjuice,decreased gastric acid secretion,free gastric mucus which composed mucous barrier were showed through molding.Some atrophic changes,such as gastric mucosal epithelial degeneration,laminapropria edemaand hyperemia,and inflammatory cellsinfiltration were observed in pathology,glands became shorter and less in some rats,also with connective tissue hyperplasia.Gastric mucosal epithelial degeneration,lamina propria edema and hyperemia,and inflammatory cells infiltration were observed in pathology,glands became shorter and less in some rats,also with connective tissue hyperplasia.Compared with the model group,the free acid of gastric juice and total acidity treated with Weiyanqing were improved obviously,the activity of gastric protease was strengthened,the secretion of free mucus in gastric juice decreased,the degree of gastric mucosal tissue lesions was relieved and a number of pathological scoring went down in gastritis-qing treatment group.These functions enhanced with the increase of the dose.ConclusionWeiyanqing capsule is effective on relieving symptoms ofindigestion in the pathologicalprocess of chronic gastritis and reducing the pathologicalchangesofgastricmucosadamage in the treatment of chronic gastritis.

Weiyanqing capsule;chronic gastritis;animal models

R285.5；R573.3

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2014.11.003.010.05

2014-07-01

湖南省“十二·五”药学重点学科建设项目。

邱赛红，女，教授，主要从事中药学教学及中药新药药理与毒理研究。

·基础研究·