ODC G316A多态性与乳癌患者生存的关系*

许林平，买 玲，马 杰，郭永军#

1)郑州大学附属肿瘤医院科研外事科 郑州 450003 2)郑州大学附属肿瘤医院肿瘤研究院 郑州 450003 3)郑州大学附属肿瘤医院分子病理科 郑州 450003

乳癌是女性最常见的恶性肿瘤。乳癌死亡人数居癌症相关死亡人数的第2位，仅次于肺癌[1]。多胺广泛表达于多种组织包括乳癌组织[2]。研究[3-4]显示多胺可以影响癌症形成的多种过程，如转录、RNA稳定、离子门控通道等;抑制多胺的合成与减少细胞增殖、诱导细胞凋亡和抑制肿瘤形成等密切相关。鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase，ODC)是多胺合成过程中最重要的限速酶[5]。在包括乳癌在内的人类多种上皮源性恶性肿瘤中，多胺水平和ODC活性升高;在动物模型中已证实多胺水平和ODC活性的升高可以促进肿瘤的发展，而抑制其活性则可以抑制肿瘤的发展[6-9]。2000年，在人类ODC基因的调控区内首次发现了一个功能性的单核苷酸多态性位点(SNP)，即G316A，其位于两个重要的基因调控区(Myc/Max/Mad蛋白结合区)内，已证实这一SNP的改变可通过影响Myc/Max/Mad蛋白的结合，进而影响ODC的表达[10]。该研究中作者收集了150例乳癌患者的术后蜡块，采用巢式PCR和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测进行ODC G316A的分型，并随访收集患者的临床数据和生存时间，旨在观察以ODC G316A进行分型后患者生存期是否有差异，为乳癌防治提供新的靶点。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2002年1月至2003年12月郑州大学附属肿瘤医院经手术治疗的150例乳癌患者手术切除组织的蜡块。以死亡作为终点事件，随访截止到2013年8月1日，共有删失66例。150例患者均为女性，年龄30～72岁，中位年龄48.6岁。肿瘤分期:Ⅰ期45例，Ⅱ期54例，Ⅲ期51例;51例有乳癌家族史。

1.2 DNA提取 利用 QIAamp DNA FFPE Tissue Kits(Qiagen公司)，按说明书步骤从150例乳癌患者蜡块中提取DNA。

1.3 引物设计 从GenBank上查找ODC G316A基因的序列并应用Primer Premier 5.0软件进行引物设计，引物序列及扩增产物大小见表1。

表1 两对引物序列及扩增产物大小

1.4 巢式PCR-RFLP检测 先应用巢式PCR扩增出 ODC G316A基因，再利用 RFLP进行 ODC G316A 分型。反应体系:12.5 μL 2 × PCR Buffer，5 μL 2 mmol/L dNTPs，上、下游引物各 1 μL，0.1 μL KOD，2.4 μL 蒸馏水，1 μL DNA。反应条件:95 ℃ 2 min;95℃进行40个循环，共0.5 min;62℃ 1 min;最后72℃延伸5 min;所有的反应均在PerkinElmer 2400 thermocycler(California，USA)上完成。收集PCR产物，加入PstⅠ酶，进行毛细管电泳，应用德国凯杰毛细管电泳仪进行分析。ODC G316A AG的患者可以得到3个峰:178、50和120 bp，ODC G316A GG的患者只能得到1个峰:178 bp，而ODC G316A AA的患者可以得到2个峰:50和120 bp。

1.5 统计学处理 应用SPSS 17.0处理数据。采用log-rank检验比较不同ODC G316A分型患者的生存曲线，检验水准α=0.05。

2 结果

150例乳癌患者至随访结束有84例患者去世，其中ODC G316A GG患者36例，ODC G316A AA/AG患者48例。150例患者中，ODC G316A AA/AG型72例，ODC G316A GG型78例。中位生存时间是105.4(79.0 ～126.0)个月。ODC G316A GG 患者比ODC G316A AA/AG患者具有更长的生存时间[109.7(86.0 ～ 128.0)个月 vs 100.6(78.0 ～122.0)个月;χ2=9.567，P=0.002]。进一步分析发现，Ⅰ期患者至随访结束无死亡病例;Ⅱ期患者中，ODC G316A GG与ODC G316A AA/AG患者的中位生存时间差异无统计学意义[117.2(88.0～130.0)个月 vs 111.8(48.0 ～130.0)个月;χ2=0.012，P=0.914];Ⅲ期患者中，ODC G316A GG 患者比 ODC G316A AA/AG患者具有更长的生存时间[124.0(68.0 ～124.0)个月 vs 100.0(46.0 ～100.0)个月;χ2=5.187，P=0.023]。

3 讨论

ODC基因位于人类第2号染色体。ODC G316A是位于ODC区域的一个功能性SNP位点。有调查[11]表明，这一多态性位点在不同种族之间的频率有较大差异。流行病学调查[12]发现，在白种人中ODC AA个体对前列腺癌的易感性高于ODC GG个体，特别是在吸烟者中，ODC AA个体的易感性较ODC GG 个体高 5.35倍。之后有研究[13-14]证实ODC分型对于结肠癌患者的预后有重要的指导意义。

该研究结果显示，ODC G316A GG患者比ODC G316A AA/AG患者具有更长的生存时间;进一步分析发现，Ⅱ期患者中ODC G316A GG与ODC G316A AA/AG患者的中位生存时间差异无统计学意义，而Ⅲ期患者中，ODC G316A GG患者比ODC G316A AA/AG患者具有更长的生存时间。提示以ODC G316A进行分型有助于筛选出高危复发和转移患者，对延长患者生存期和乳癌术后进行风险评估以及制定相应的治疗和随访方案具有一定的临床应用价值。

[1]DeSantis C，Siegel R，Bandi P，et al.Breast cancer statistics，2011[J].CA Cancer J Clin，2011，61(6):409

[2]李威，买玲.鸟氨酸脱羧酶G316A多态性:潜在的乳腺癌遗传性标志物? [J].肿瘤防治研究，2012，39(11):1395

[3]Wallace HM.The physiological role of the polyamines[J].Eur J Clin Invest，2000，30(1):1

[4]Babbar N，Ignatenko NA，Casero RJ，et al.Cyclooxygenaseindependent induction of apoptosis by sulindac sulfone is mediated by polyamines in colon cancer[J].J Biol Chem，2003，278(48):47762

[5]Godderz D，Schafer E，Palanimurugan R，et al.The N-terminal unstructured domain of yeast ODC functions as a transplantable and replaceable ubiquitin-independent degron[J].J Mol Biol，2011，407(3):354

[6]Chen Y，Megosh LC，Gilmour SK，et al.K6/ODC transgenic mice as a sensitive model for carcinogen identification[J].Toxicol Lett，2000，116(1/2):27

[7]Young L，Salomon R，Au W，et al.Ornithine decarboxylase(ODC)expression pattern in human prostate tissues and ODC transgenic mice[J].J Histochem Cytochem，2006，54(2):223

[8]Lan L，Trempus C，Gilmour SK.Inhibition of ornithine decarboxylase(ODC)decreases tumor vascularization and reverses spontaneous tumors in ODC/Ras transgenic mice[J].Cancer Res，2000，60(20):5696

[9]Guo Y，Cleveland JL，O'Brien TG.Haploinsufficiency for odc modifies mouse skin tumor susceptibility[J].Cancer Res，2005，65(4):1146

[10]Guo Y，Harris RB，Rosson D，et al.Functional analysis of human ornithine decarboxylase alleles[J].Cancer Res，2000，60(22):6314

[11]O'Brien TG，Guo Y，Visvanathan K，et al.Differences in ornithine decarboxylase and androgen receptor allele frequencies among ethnic groups[J].Mol Carcinog，2004，41(2):120

[12]Visvanathan K，Helzlsouer KJ，Boorman DW，et al.Association among an ornithine decarboxylase polymorphism，androgen receptor gene(CAG)repeat length and prostate cancer risk[J].J Urol，2004，171(2 Pt 1):652

[13]Hubner RA，Muir KR，Liu JF，et al.Ornithine decarboxylase G316A genotype is prognostic for colorectal adenoma recurrence and predicts efficacy of aspirin chemoprevention[J].Clin Cancer Res，2008，14(8):2303

[14]Zell JA，Ziogas A，Ignatenko N，et al.Associations of a polymorphism in the ornithine decarboxylase gene with colorectal cancer survival[J].Clin Cancer Res，2009，15(19):6208