哮喘患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞的测定及临床意义

湛洁谊　卢慧敏　林穗玲

[摘要] 目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变，并探讨其临床意义。 方法 150例哮喘患儿按临床表现分为急性发作组（50例）、临床缓解期组（50例）和咳嗽变异性哮喘组（50例），另选择50名健康儿童为正常对照组。应用流式细胞仪检测上述各组外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比。 结果 急性发作期组患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平较缓解组、咳嗽变异性哮喘组及健康对照组明显下降（P<0.05），而缓解期组及咳嗽变异性哮喘组与健康对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论CD4+CD25+调节性T细胞可能参与了哮喘的发生与发展，哮喘的严重程度可能与CD4+CD25+调节性T细胞的水平相关。

[关键词] 哮喘；儿童；调节性T细胞；流式细胞术

[中图分类号] R562.25 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）25-0010-03

支气管哮喘是由多种炎性细胞和炎性介质参与的气道慢性炎症性疾病。CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）是一类调节或抑制其他免疫细胞功能的细胞，在自身免疫性疾病、感染性疾病、过敏性疾病以及肿瘤免疫中都发挥着作用。近年来，研究资料显示，CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘的发病中可能起着重要作用。本文通过检测不同时期及不同类型哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg的表达水平，探讨该细胞表达水平与哮喘发病的关系。

1 对象与方法

1.1研究对象

选择2010～2013年广州医科大学附属第一医院儿科门诊哮喘患者150例，均符合2008年中华医学会儿科学分会呼吸学组制定的哮喘及其分期的诊断标准[1]。急性发作期哮喘患儿50例，其中男26例，女24例，年龄2～9岁，平均（4.982±0.263）岁；临床缓解期哮喘患儿50例，其中男27例，女23例，年龄2.5～11岁，平均（5.308±0.275）岁；咳嗽变异性哮喘患儿50例，其中男24例，女26例，年龄3～10岁，平均（5.160±0.249）岁。对照组50例，为广州市天河区妇幼保健院健康体检儿童，其中男25例，女25例，年龄2～10岁，平均（5.064±0.223）岁，均无自身免疫性疾病、过敏性疾病以及肿瘤疾病史，近2个月内无感染性疾病，并除外近3个月内使用肾上腺皮质激素、免疫抑制剂或其他免疫调节剂史。各组的性别构成、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

1.2主要试剂与仪器

鼠抗人的CD4-FITC，CD25-PE，及同型对照单抗，FAC lysing solution溶血素，流式细胞仪FACScanto，以上试剂及仪器均购自美国Becton Dickinson公司。分析软件为FACSDiva software。

1.3外周血CD4+CD25+Treg的检测

抽取研究对象外周静脉血2mL，用EDTA抗凝。取两支流式上样管，分别加入EDTA抗凝全血50 μL，第一管加同型对照，第二管加CD4-FITC，CD25-PE，各为 10μL，室温避光孵育15～20 min，然后加入FASC 溶血素1 mL，混合后避光静置10 min，1000 r/min离心3 min，加入2 mL磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤1次，加入适量PBS重悬细胞，流式细胞仪检测。以CD4阳性细胞设门，分析CD4+CD25+调节性T细胞所占CD4+T细胞的百分比。

1.4统计学方法

采用SPSS11.5软件进行统计学处理，定量资料（年龄、CD4+CD25+ Treg占CD4+ T细胞的比例）用Kolmogorov-Smirnov检验法进行正态性检验，对于正态分布的数据，结果以（x±s）表示，正态分布数据经方差齐性检验后采用单因素方差分析，方差分析整体均数间有统计学意义时，选用S-N-K检验做组间的两两比较。定性资料（性别构成）比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 研究对象年龄、性别构成比较

见表1。

2.2 不同组别外周血中CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例比较

急性发作期哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例明显低于健康对照儿童、临床缓解期哮喘患儿及咳嗽变异性哮喘患儿（P<0.05）。临床缓解期哮喘患儿及咳嗽变异性哮喘患儿与健康对照儿童比较差异无统计学意义（均为P>0.05）。临床缓解期哮喘患儿与咳嗽变异性哮喘患儿比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

3 讨论

CD4+CD25+Treg是CD4+T细胞的一个小的细胞亚型，具有免疫功能性和抑制性两大功能特征[2]。近年来，研究资料显示，CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘的发病中可能起着重要作用。它可介导机体对过敏原耐受的形成，维持免疫耐受，抑制Th2反应及气道的嗜酸性粒细胞炎症，从而下调哮喘气道炎症，最终起到防止哮喘发展的作用[3]。CD4+CD25+Treg水平已成为衡量Treg群落大小的一个重要参数，然而，对于哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg水平的报道尚不一致。多项研究表明[4，5]，哮喘患者支气管肺泡灌洗液、外周血单核细胞中CD4+CD25+Treg的比率明显低于健康对照组。黄花荣、陆小霞等[6，7]通过对哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg 的研究表明，哮喘患儿急性发作期的CD4+CD25+Treg明显降低，且随着病情的加重呈明显减少的趋势。但也有少部分研究认为哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg水平与健康对照组比较无差别[8，9]，甚至是升高的[10，12]。咳嗽变异性哮喘是哮喘的一种特殊类型，以咳嗽为唯一或主要表现，不伴有明显喘息。毕玉田等[13]研究发现，咳嗽变异性哮喘患者外周血的CD4+CD25+调节性T细胞的比例显著低于健康对照者。endprint

该实验研究表明，哮喘急性发作期患儿的外周血CD4+CD25+Treg水平较临床缓解期哮喘患儿、咳嗽变异性哮喘患儿和正常对照组儿童明显下降，这与大部分的研究结论一致，提示哮喘急性发作期患儿体内存在T调节细胞免疫功能平衡失调，导致免疫抑制功能减弱或呈低反应性，可能是引起支气管哮喘发病的机制之一。而该实验研究也表明临床缓解期哮喘患儿及咳嗽变异性哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg水平与正常对照组比较差异无统计学意义。说明哮喘患儿症状缓解可能与体内CD4+CD25+Treg的水平恢复有关。同时咳嗽变异性哮喘患儿的病情轻，可能CD4+CD25+Treg的水平下降不明显。该实验研究表明哮喘的严重程度可能与CD4+CD25+Treg的水平相关，同时也存在不能单纯依靠CD25+来区分调节性T细胞和效应性T细胞的可能。目前关于咳嗽变异性哮喘与CD4+CD25+Treg水平的研究较少，尚需大量的样本验证及进一步的研究。

[参考文献]

[1] 中华医学会儿科学分会呼吸学组. 2008年修订儿童支气管哮喘诊断与防治指南[J]. 中华儿科杂志，2008，46（10）：745-753.

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[10] 覃寿明，施焕中，覃雪军，等. 支气管哮喘患者外周血中的CD4+CD25+T淋巴细胞的测定[J]. 中华结核和呼吸杂志，2006，29（4）：252-256.

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[12] 沈丽华，吴晓燕. 非急性发作期哮喘患者CD4+CD25+调节性T细胞含量水平观察[J]. 中国中医药现代远程教育，2011，9（6）：146-147.

[13] 毕玉田，洪新，曹国强，等. 糖皮质激素吸入诱导咳嗽变异性哮喘患者CD4+CD25+T细胞Foxp3基因表达的研究[J]. 重庆医学，2007，36（6）：511-513.

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该实验研究表明，哮喘急性发作期患儿的外周血CD4+CD25+Treg水平较临床缓解期哮喘患儿、咳嗽变异性哮喘患儿和正常对照组儿童明显下降，这与大部分的研究结论一致，提示哮喘急性发作期患儿体内存在T调节细胞免疫功能平衡失调，导致免疫抑制功能减弱或呈低反应性，可能是引起支气管哮喘发病的机制之一。而该实验研究也表明临床缓解期哮喘患儿及咳嗽变异性哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg水平与正常对照组比较差异无统计学意义。说明哮喘患儿症状缓解可能与体内CD4+CD25+Treg的水平恢复有关。同时咳嗽变异性哮喘患儿的病情轻，可能CD4+CD25+Treg的水平下降不明显。该实验研究表明哮喘的严重程度可能与CD4+CD25+Treg的水平相关，同时也存在不能单纯依靠CD25+来区分调节性T细胞和效应性T细胞的可能。目前关于咳嗽变异性哮喘与CD4+CD25+Treg水平的研究较少，尚需大量的样本验证及进一步的研究。

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该实验研究表明，哮喘急性发作期患儿的外周血CD4+CD25+Treg水平较临床缓解期哮喘患儿、咳嗽变异性哮喘患儿和正常对照组儿童明显下降，这与大部分的研究结论一致，提示哮喘急性发作期患儿体内存在T调节细胞免疫功能平衡失调，导致免疫抑制功能减弱或呈低反应性，可能是引起支气管哮喘发病的机制之一。而该实验研究也表明临床缓解期哮喘患儿及咳嗽变异性哮喘患儿外周血CD4+CD25+Treg水平与正常对照组比较差异无统计学意义。说明哮喘患儿症状缓解可能与体内CD4+CD25+Treg的水平恢复有关。同时咳嗽变异性哮喘患儿的病情轻，可能CD4+CD25+Treg的水平下降不明显。该实验研究表明哮喘的严重程度可能与CD4+CD25+Treg的水平相关，同时也存在不能单纯依靠CD25+来区分调节性T细胞和效应性T细胞的可能。目前关于咳嗽变异性哮喘与CD4+CD25+Treg水平的研究较少，尚需大量的样本验证及进一步的研究。

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