二子菊花饮中红景天苷的含量测定研究

戴一，曹殿洁，夏莲凤 (安徽新华学院药学院，安徽 合肥 230088)

二子菊花饮由女贞子、枸杞子、菊花 (质量比:3∶3∶2)，组方而成，煎水饮服。本方中女贞子、枸杞子补肝肾、明目，菊花养肝明目，用于肝肾阴虚，眼目干涩，视物昏花，或视力减退［1］，该方对久坐注视、久用电脑、电子辐射等带来的损害有积极治疗保健作用。研究报道显示女贞子中含有丰富的红景天苷［2］。现代药理研究表明红景天苷具有多种药理作用，如抗疲劳作用［3］、抗衰老［4］、心肌损伤保护作用［5-6］。由于红景天苷极性较大，在水中溶解度答，二子菊花饮又以茶形式使用，因此研究二子菊花饮中是否含有红景天苷对于揭示二子菊花饮的保健作用具有重要参考价值，同时对于二子菊花饮质量的保证、保健价值的提升、商业化的开发具有重要意义。本实验采用水煎煮后浓缩干燥，对所得提取物采用HPLC测定红景天苷的含量，为进一步研究与开发利用提供理论依据。

1 材料与仪器

女贞子购自于亳州药材市场，枸杞子、菊花为贡菊 (药圣堂制药有限公司)。红景天苷对照品 (天津一方科技有限公司);甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

安捷伦1260高效液相色谱仪，安捷伦1260MWD检测器，安捷伦1260二元泵 (美国安捷伦科技公司);梅特勒-托利多AB135-S电子分析天平 (梅特勒-托利多国际股份有限公司);FA2004型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);Eppendorf Research移液器 (德国Eppendorf股份公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Inertsil ODS-3C18(250mm×4.6mm，5μm);流动相:甲醇∶水 (17∶83);流速1ml/min;检测波长:220nm;柱温:室温;进样量:20μl［7］。在此条件下对照品及供试品溶液图谱见图1。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取红景天苷对照品4.60mg，置10ml容量瓶中，加甲醇制成每1ml含红景天苷0.460mg的溶液，摇匀，即得对照品贮备液，低温避光贮藏，备用。

2.3 供试品溶液的制备

取女贞子、枸杞子各18g，菊花12g，加10倍量水，于圆底烧瓶中煎煮1.5h，抽滤，煎煮3次，滤液合并、浓缩至干后真空40℃干燥48h，得干膏，精密称取二子菊花饮干膏1.0g，加水25ml，超声溶解，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

图1 红景天苷对照品 (a)及二子菊花饮供试品 (b)HPLC色谱图

2.4 方法学考查

HPLC法［7］测定红景天苷的含量。

2.4.1 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下对照品贮备液3、5、7、10、12μl，按上述色谱条件进样分析。以进样量(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y=644.67X－551.74，r=0.9992。结果表明，红景天苷检测浓度在1.38～5.52μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.4.2 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液20μl，按上述色谱条件重复进样5次。结果:红景天苷峰面积的RSD=0.75%，表明仪器精密度较好。

2.4.3 稳定性试验 取同一样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、4、6h精密吸取20μl进样。结果:红景天苷峰面积的RSD=0.83%，表明供试品溶液在6 h内稳定性较好。

2.4.4 重复性试验 精密称取同一批样品5份，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果:二子菊花饮的红景天苷提取率RSD=1.37%，表明方法重复性较好。

2.4.5 加样回收率试验 取已知含量的样品9份，每份1g，分别精密加入一定量红景天苷对照品，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1 红景天苷回收率试验

2.5 样品含量测定

精密称取二子菊花饮提取物1.00g，3批，分别按“2.3”项下方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积并用外标法计算二子菊花饮的红景天苷提取率分别为0.0832%、0.0855%、0.0829%，平均为0.0839%，相当于1g二子菊花饮可提取出红景天苷0.832mg，可见二子菊花饮中红景天苷含量较高。

3 结论

二子菊花饮为一药茶，具有较高的保健价值，研究该茶中所含成分，对于其保健作用物质基础的揭示具有重要参考意义。本实验建立了HPLC法测定二子菊花饮中主要成分红景天苷的含量。该方法精密度良好、稳定、具有较好的重复性及较高的回收率，用该法测得二子菊花饮中红景天苷的含量平均为0.0839%，为二子菊花饮的进一步开发提供了参考。

［1］国家药典委员会.中国药典 (一部)［S］.2010版.北京:化学工业出版社，2010:43.

［2］李曼玲，徐丹，仝会娟，等.女贞子不同市售品炮制品及不同果实部位中红景天苷的含量测定［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(2):14-16.

［3］张俊，吴振刚，王庆伟，等.红景天苷系列类似物的设计合成及抗疲劳活性初筛 ［J］.第四军医大学学报，2009，30(19):1916-1918.

［4］邱强，毛根祥，申佳佳，等.红景天苷对力达霉素诱导人二倍体成纤维细胞衰老的干预作用 ［J］.中国新药杂志，2012，21(1):82-87.

［5］朱宁，张喆，刘莉，等.红景天苷对缺氧诱导培养乳鼠心肌细胞的保护作用［J］.中成药，2012，34(8):1587-1589.

［6］禹晓宁，陈安九.红景天苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌损伤的保护作用［J］.时珍国医国药，2013，24(8):1926-1927.

［7］戚志华，王庆伟，王四旺，等.HPLC法测定不同生长期女贞子中红景天苷的含量［J］.中国药房，2010，21(11):996-997.