生脉保元汤对扩张型心肌病大鼠模型心功能的影响

张焕鑫 张宏考 高宇勤 肖俊会 黄玉兰

(湖北医药学院附属人民医院心血管内科，湖北 十堰 442000)

扩张型心肌病(DCM)目前尚无特效的治疗方法和药物〔1〕。本实验拟通过观察炙甘草汤对DCM SD大鼠治疗前后心脏超声心动图改变及心肌组织病理学的改变，初步探讨生脉保元汤对DCM大鼠的治疗作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1动物 SPF级成年雄性SD大鼠40只，体重(220±31.4)g，由湖北省实验动物中心提供，动物在屏障系统环境下饲以专用饲料 (购自湖北省实验动物中心)和灭菌水分笼饲养。

1.2试剂和药品 大鼠血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、脑钠肽(BNP)ELISA试剂盒由上海生科生物科技有限公司提供；10%水合氯醛,苏木素、0.5%水溶型伊红液、0.5%盐酸酒精分化液、10%甲醛(均由湖北医药学院附属人民医院临床研究所提供)；生脉保元汤(人参、麦冬、五味子、黄芪、甘草)由湖北医药学院附属人民医院制剂室制备，每毫升含生药量1 g，高压灭菌后，保存于4℃冰箱。多柔比星粉剂由浙江海正药业股份有限公司生产。

1.3主要仪器 德国Leica病理切片机、美国GE-VIVID7型彩色多普勒(超声探头频率7MHz)、奥地利酶标仪检、国产400倍普通光镜及无菌操作台。

1.4方法

1.4.1动物分组与模型复制 40只大鼠随机分为治疗组(n=20)和对照组(n=20)，依照文献报道〔2〕，多柔比星用生理盐水配成1 mg/ml,分别给予腹腔注射,每周2 mg/kg，连续8 w，复制DCM模型。经超声心动图检测左室射血分数(LVEF)，心率(HR)明显降低，心室的收缩功能与心腔的扩张程度负相关，改变符合DCM的影像学改变，造模过程中共有7只大鼠死亡，其中治疗组4只，对照组3只，可能与多柔比星心脏毒性及DCM所致心力衰竭有关。

1.4.2给药方案 各组均于实验第9周开始灌胃。根据公式换算(成人用量×0.018×5=大鼠用量g/kg)，结合前期研究结果〔3〕，治疗组给予生脉保元汤(40 g/kg)，2次/d、0.2 ml/次灌胃，对照组按同法灌以同体积的蒸馏水，疗程4 w。

1.4.3指标观测 大鼠在用药前及第9周时用10%水合氯醛麻醉后,胸骨旁左心室长轴超声心动图测量左室收缩末期容积(LVES)、舒张末期容积(LVED)、左室收缩末期内径(SD)、左室舒张末期内径(DD)、左室内径缩短率(FS)、LVEF，并测量体重(BW)、HR。各组大鼠麻醉后从球后静脉取血3 ml，分别处理后用ELISA测定AngⅡ、BNP，处死后剪开左心室取心肌组织，10%甲醛固定后石蜡包埋，5 μm切片HE染色，光镜下观察心肌组织病理形态变化。

2 结 果

2.1一般情况 治疗过程中，对照组大鼠不同程度出现精神不振、厌食、活动减少、肢体水肿、体重下降、腹泻等表现，并陆续有8只大鼠死亡，死亡率47.06%；治疗组大鼠以上症状较轻，部分动物少动，先后有3只动物死亡，死亡率18.75%。死亡大鼠行尸体解剖发现，存在肝大、腹水、胸水等现象。

2.2两组动物BW、HR及超声心动图检测结果 与对照组相比，治疗组BW、LVEF显著增加(P<0.01)；HR、LVES显著降低(P<0.01)，LVED、SD、DD、FS 明显下降(P<0.05)。见表1。彩超发现对照组有两只动物出现少-中量心包积液，1只动物出现大量心包积液，而治疗组大鼠则未见心包积液。

2.3两组动物的血浆AngⅡ、BNP浓度检测结果 治疗组大鼠血浆AngⅡ、BNP浓度明显低于对照组(P<0.05，P<0.01)。见表2。

2.4两组动物心肌组织的病理改变 HE染色见对照组大鼠心肌细胞有不同程度的颗粒变性，部分空泡样变性，细胞质自溶，组织间质水肿，细胞间隙增宽，心肌胶原纤维增生明显。治疗组大鼠心肌病变较对照组明显减轻，心肌细胞数目明显增多，可见颗粒变性和空泡样变性，细胞间隙相对正常，心肌间胶原沉积少于对照组。见图1。

表1 两组动物BW、HR及心脏彩超检测结果

表2 两组动物的血浆AngⅡ、BNP浓度检测结果

对照组

治疗组

3 讨 论

中医认为，DCM属中医“喘证”、“水肿”、“心悸”等范畴，多从阳虚水泛立论，认为基本病机是由于阳气虚衰，温煦失职，导致阴寒内盛，水湿、瘀血内停，形成本虚标实之证。DCM具有喘、悸 、肿 、瘀、虚之临床特点，其病位在心，涉及肺、肾、脾、肝及三焦诸脏腑，尤其与心、肾、肺关系密切。心肾虚衰，脏腑失调是本病的病理基础，三焦气化不利，水湿内停，瘀血阻滞，水火逆乱，热毒浸淫是其中心病理环节。本虚标实，寒热错杂是其病机特点。

生脉保元汤为李杲《内外伤辨惑论》之方，由生麦饮(人参、麦冬、五味子)加黄芪、甘草五味组成，主治暑热汗多，耗气伤阴及久咳肺虚，气阴两伤之证，具有益气生津、养阴安神之功效。方中人参大补元气，是为君药；黄芪补气固表、利水退肿，麦冬养阴生津、强心利尿，二者共为臣药；五味子敛阴、滋肾、生津，可收敛耗散之心气，甘草益气、强心、复脉，共为佐使之品。诸药合用，共奏调益气养阴、生津安神、调节免疫之功。

肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的激活是造成心力衰竭恶性循环的主要原因之一〔4〕。心力衰竭时超生理浓度的AngⅡ通过交感神经系统引起儿茶酚胺释放，使心肌细胞肥大，促进心室扩大和重建，加重心力衰竭〔5〕。BNP释放量与心室容积扩大和压力负荷过重有关，具有利尿利钠效应，可舒张血管，抑制醛固酮分泌和肾素活性〔6〕。BNP与 CHF的严重程度相关，BNP水平在一定程度上可以及时反映 CHF病程中心脏的结构异常，治疗降低了BNP水平可以认为是阻止了DCM 的进展，逆转了心肌重构〔7〕。

本实验结果显示，多柔比星可导致DCM大鼠血清BNP、AngⅡ水平明显升高，说明血清BNP、AngⅡ水平与DCM大鼠心力衰竭密切相关，而经生脉保元汤干预后，BNP、AngⅡ水平明显下降，且心率明显下降，左室收缩末期容积明显降低，心肌胶原沉积减少，提示生脉保元汤可通过抑制AngⅡ、BNP的生成，抑制RAAS系统的过度激活，延缓心肌重构，从而达到改善心功能、减轻DCM大鼠的心肌病理改变，降低动物死亡率。因此，本研究结果为进一步评价生脉保元汤临床治疗DCM提供了可靠的实验依据和理论基础。但生脉保元汤能否常规用于临床DCM患者、改善病人的心功能、提高生存质量，以及治疗的最佳药物剂量尚待更进一步地深入研究。

4 参考文献

1陆再英，钟南山.内科学〔M〕.第7版.北京：人民卫生版社，2010：336-9.

2白 洁，陈 蓉，盛 佳，等.SD大鼠扩张型心肌病模型的建立〔J〕.江苏大学学报(医学版)，2006；16(3)：210-2.

3张宏考，熊常初.生脉保元汤体内抗柯萨奇B3病毒的实验研究〔J〕.郧阳医学院学报，2004；23(4)：208-10,213.

4李虹伟，彭 晖.他汀类药物非调脂作用的研究进展〔J〕.临床药物治疗杂志，2008；6(2)：47-51.

5Pfeffer MA，Swedberg K.Effects of candesartan on mortality and morbidity in patients with chronic heart failure：the CHARM-Overall programme〔J〕.Lancet，2003；362(9386)：759-66.

6Lainchbury JC，Campbell E，Frampton CM，etal.Brain natriuretic peptide and N-terminal brain natriuretic peptide in the diagnosis of heart failure in patients with acute shortness of breath〔J〕.J Am Coll Cardiol，2003；42(4)：728-35.

7Riehards AM，Lainchbury JG，Nieholls MC，etal.BNP in hormone-guided treatment of heart failure〔J〕.Trends Endocrinol Metab，2002；13(4)：151-251.