白菜型冬油菜根腐病的室内药剂筛选和药效试验

范祥梅，徐秉良，梁巧兰

(甘肃农业大学 草业学院/草业生态系统教育部重点实验室/甘肃省草业工程实验室/中-美草地畜牧业可持续发展研究中心，甘肃 兰州 730070)

冬油菜为甘肃省主要油料作物之一，栽培面积占全省油料作物的14.9%，产量占13.3%[1]。随着冬油菜栽培面积的扩大，冬油菜根腐病也普遍发生，李荣峰等[2]报道，5月中下旬调查其田间发病率严重时达6.4%。冬油菜根腐病典型症状是在靠近地面处出现褐色病斑，病斑略微凹陷，植株生长不良，生长缓慢，根茎部膨大，易拔段。冬油菜根腐病的发生严重影响了冬油菜的品质和产量。目前，在农业生产和园林栽培中，化学防治方法是防治多种植物根腐病的重要手段[3-9]。因此，筛选新型、高效、低毒的杀菌剂，来防治冬油菜根腐病，显得非常有必要。为此，试验针对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌两种病原菌，采用7种药剂进行室内毒力测定和药效试验，筛选对2种病原菌抑制效果好的药剂，旨在为冬油菜生产实践中根腐病的防治提供一定的参考依据。

1 材料和方法

1.1 供试材料

供试油菜陇油9号品种，由甘肃农业大学农学院提供；采用PDA培养基和WA培养基[10]；半裸镰刀菌(Fusariumsemitectum)、尖孢镰刀菌(F.oxysprorum)病原菌均分离自兰州市秦王川开发区白菜型冬油菜根腐病根组织，由甘肃农业大学病原实验室保存备用；供试药剂25%嘧菌酯悬浮剂购自河北省农药化工有限公司、99%恶霉灵可湿性粉剂购自山东省烟台鑫润精细化工有限公司、86%十三吗啉油剂购自浙江世佳科技有限公司、77%硫酸铜钙可湿性粉剂购自江苏龙灯化学有限公司、85%波尔·甲霜灵可湿性粉剂购自江苏龙灯化学有限公司、30%苯甲·丙环唑乳油购自浙江世佳科技有限公司、25%苯醚甲环唑乳油购自华北制药集团爱诺有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 药剂对病原菌菌丝生长的影响 参照文献[11]方法，将7种供试药剂按推荐浓度，设5个浓度梯度，分别为：25%嘧菌酯悬浮剂200、100、50、25、12.5 μg/mL；99%恶霉灵250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL；86%十三吗啉油剂107.5、53.75、25.875、13.438、6.718 μg/mL；77%硫酸铜钙可湿性粉剂2 310、1 155、577.5、288.75、144.375 μg/mL；85%波尔·甲霜灵可湿性粉剂1 360、680、340、170、85 μg/mL；25%苯醚甲环唑乳油125、62.5、31.25、15.625、7.813 μg/mL；30%苯甲·丙环唑乳油60、30、15、7.5、3.75 μg/mL。取1 mL预先配制好的母液加到灭菌冷却至50 ℃的49 mL PDA 培养基中，摇匀，倒入3个灭菌培养皿中制成设计所需浓度的含毒平板，然后用6 mm 打孔器在预先培养好的病菌菌落边缘打取菌饼，并置于不同药剂浓度的PDA平板上，菌丝面朝下，每皿1个菌饼，以无菌水作对照。最后将培养基置于25 ℃培养箱中培养，3 d后用十字交叉法统计菌落直径(cm)，算出菌落生长直径(对照菌落直径-0.6)，并计算药剂抑菌率。

抑菌率(%)=[(菌落直径-0.6)-(处理菌落直径-0.6)]/(对照菌落直径-0.6)×100%

将药剂浓度转化为对数值(x)，为横坐标，再将抑菌率转化为机率值(y)，为纵坐标，求出线性毒力回归方程y=a+bx，然后根据回归方程求出各药剂的EC50和浓度对数与几率值之间相关系数r。

1.2.2 种子处理 在无菌操作下，取适量的供试陇油9号种子，经75%的酒精表面消毒1 min，无菌水冲洗3次后，自然晾干，后用供试药剂相应质量浓度的药液对晾干的冬油菜种子进行拌种，药种比1∶30，拌种好的种子晾干备用。

1.2.3 室内药效试验 参考文献[12]的方法，在预先培养好的供试病菌菌落边缘用6 mm打孔器打取菌饼后置于配制好的WA(水琼脂)培养基中央，25 ℃恒温培养箱中培养5 d，将拌种好的冬油菜种子均匀排列在WA培养基菌落边缘，每皿 20粒种子，置于25 ℃恒温培养箱中培养 10 d，统计幼苗的发病率。每种药剂浓度设3次重复，以不拌种的冬油菜种子为对照。

2 结果与分析

2.1 7种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌菌丝生长的影响

7种供试杀菌剂对半裸镰刀菌均有不同程度的抑制，且随着浓度的增大，抑制效果也随之增强。其中，苯甲·丙环唑抑制作用最好，在3.75～60 μg/mL时，抑制率达70.61%～85.45%；十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵、波尔·甲霜灵抑菌效果次之，分别为29.54%～83.77%、25.37%～84.15%、23.08%～80.26%、11.95%～83.41%；硫酸铜钙和嘧菌酯的效果最差，抑制率分别为5.53%～56.22%、39.55%～48.00%。

7种供试杀菌剂对尖孢镰刀菌的抑制作用，以苯甲·丙环唑和苯醚甲环唑最强，抑制率为63.86%～97.65%和50.50～88.72%；其次为十三吗啉、恶霉灵、波尔·甲霜灵，抑制率分别为44.27%～74.36%、28.36%～67.16%、12.17%～65.67%；嘧菌酯和硫酸铜钙最差，硫酸铜钙在浓度为144.375、288.75 μg/mL时对尖孢镰刀菌没有抑制作用(表1)。

表1 7种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的抑制效果

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，下同

2.2 7种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的毒力比较

7种杀菌剂对半裸镰刀菌的EC50大小顺序为硫酸铜钙>波尔·甲霜灵>嘧菌酯>恶霉灵>苯醚甲环唑>十三吗啉>苯甲·丙环唑。其中，苯甲·丙环唑的EC50最小，为0.15 μg/mL，毒力最强；十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵EC50次之，分别为15.67、22.61、62.41 μg/mL；波尔·甲霜灵、嘧菌酯和硫酸铜钙的抑菌活性最弱，EC50达到了2 293.24 μg/mL。各药剂浓度与抑菌率之间的相关系数r>0.90，表明二者呈正相关关系(表2)。

7种杀菌剂对尖孢镰刀菌的抑制作用，除了硫酸铜钙浓度为288.75、144.375 μg/mL与抑菌率之间不成正相关，不能得到毒力回归方程外，其他各个药剂浓度与其对应抑菌率之间均成正相关关系，r>0.90。苯甲·丙环唑、苯醚甲环唑、十三吗啉的毒力最强，EC50分别为2.11、8.56、11.78 μg/mL；恶霉灵次之，为62.41 μg/mL；嘧菌酯和波尔·甲霜灵的毒力最弱，EC50最大，分别为100.70、490.80 μg/mL(表2)。

研究分析，苯甲·丙环唑、十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的EC50均较小，毒力最强。嘧菌酯、苯醚甲环唑、恶霉灵、波尔·甲霜灵、十三吗啉，每一药剂对2种镰刀菌的EC50差异不大，嘧菌酯在7倍以内，苯醚甲环唑在3倍以内，恶霉灵，波尔·甲霜灵，十三吗啉在1.5倍以内，说明此5种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的毒力差异不大。

表2 7种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的毒力比较

2.3 7种杀菌剂对冬油菜根腐病菌的室内药效试验

苯甲·丙环唑、苯醚甲环唑、十三吗啉、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的防效显著高于其他3种药剂，发病率分别比对照降低了81.82%和75.48%、79.54%和66.04%、77.27%和56.61%、72.72%和67.93%。硫酸铜钙的防效最差、分别为27.30%和37.58%。各种药剂对半裸镰刀菌的防效优于尖孢镰刀菌(表3)。

表3 7种杀菌剂对冬油菜根腐病菌的室内防效

3 讨论与结论

李荣峰等[2]研究得出，甘肃省白菜型冬油菜根腐病是由半裸镰刀菌、链格孢(Alternariaalternate)、尖孢镰刀菌、黑根霉(Rhizopusnigricans)和青霉菌(Penicilliumsp.)等引起。试验针对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌两种病原菌，采用7种药剂进行室内毒力测定和皿内药效试验。毒力测定结果表明，苯甲·丙环唑、十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的EC50均较小，毒力较强，可以用于实践。嘧菌酯、苯醚甲环唑、恶霉灵、波尔·甲霜灵、十三吗啉，此5种药剂对两种镰刀菌的EC50差异不大，说明2种镰刀菌对这5种药剂的敏感性相似，在实践防治此两种镰刀菌病害时，可互相借鉴施药方案[13]。室内药效试验结果表明，苯甲·丙环唑、苯醚甲环唑、十三吗啉、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的防效显著优于其他3种药剂，与室内毒力测定的结果基本一致。

硫酸铜钙为144.375和288.75 μg/mL时，对尖孢镰刀菌有促进生长的作用，此结果与赵春莉等[14]报道的结论有差异，其原因需进一步研究。嘧菌酯为25、50、100 μg/mL时，浓度处理间对半裸镰刀菌的抑制率没有显著差异，这与潘月敏等[15]报道的当嘧菌酯浓度在1～200 μg/mL时，各浓度处理间抑制效果无明显差异的结论相一致。嘧菌酯为甲氧基丙烯酸酯类药剂，是线粒体呼吸抑制剂，试验中，其对2种镰刀菌的敏感性较差，是因为在离体条件下，其无法抑制病原菌的旁路代谢途径的缘故[13]，室内药效试验表现较室内毒力测定时好，其防效适中，与苯甲·丙环唑、十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵4种药剂的防效相差不是很大。恶霉灵[16]为内吸性好、低毒、无公害杀菌剂和植物生长调节剂，在离体条件下没有体现出其对植物的生长调节作用，在大田中会体现出更加好的防治效果。单一杀菌剂使用容易使病菌产生抗药性，有报道称，苯醚甲环唑与多菌灵复配[14]，恶霉灵与多菌灵复配[17]，对镰刀菌抑制效果有明显的增效作用。因此，在今后的田间防治中，应该使用不同作用机理的杀菌剂进行复配防治，达到高效、环保、经济的理想效果。半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌都是土壤习居菌[18-19]，能长期存活于土壤中，它们可侵染许多经济作物和牧草，如蚕豆[12]、苜蓿[20]、沙打旺等[21]，试验只是进行了各种药剂对离体条件下2种镰刀菌菌丝生长的抑制效果和室内药效试验，田间防治效果还有待于进一步探讨。

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