596例新生儿溶血病血型血清学检测结果分析

1.广东省东莞市中心血站，广东 东莞 523930；2.广东省东莞市东华医院输血科,广东 东莞 523110

596例新生儿溶血病血型血清学检测结果分析

林栋1胡应明1何子毅1陈宝婵2

1.广东省东莞市中心血站，广东 东莞 523930；2.广东省东莞市东华医院输血科,广东 东莞 523110

目的分析新生儿溶血病血型血清学检测结果，探讨采集标本时间与新生儿溶血病阳性率的关系。方法选取596例新生儿溶血病标本，进行新生儿溶血病溶血三项检测、同时对母亲标本进行不规则抗体筛查。结果596例新生儿溶血病标本中阳性429例，阳性率71.98%；ABO血型系统的新生儿溶血病409例，占阳性标本的95.33%；Rh血型系统的新生儿溶血病18例，占4.20%；其它不规则抗体2例占0.47%；4天后采集标本检测新生儿溶血病阳性率较低(P<0.05)。结论本市新生儿溶血病发生主要为ABO血型系统，高达95.33%，新生儿溶血病在患儿出生后4天内采集的标本检测阳性率较高。

新生儿溶血病；血型血清学

新生儿溶血病(Hemolytic disease of the newborn，HDN)是临床新生儿科常见的疾病，引发该病的原因很多，包括同种被动免疫、红细胞膜缺陷、红细胞酶缺乏及感染等。其中的同种被动免疫(ABO、Rh血型不合)最为重要，它是由于母体内存在与其胎儿红细胞不配合的IgG性质的抗体，引起的 HDN，诊断它最有力的证据是证实患儿红细胞被来自孕妇的IgG抗体所致敏。本站输血研究室对596例疑似 HDN 的送检标本进行溶血三项(直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体测定、红细胞抗体放散试验)血型血清学检测，现将结果进行回顾性分析，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 选取2011年1月至2013年6月我市各医院送至本站输血研究室，有新生儿高胆红素血症、疑似新生儿溶血病患儿的标本2～3ml,同时送父母亲标本各3ml，均用EDTA抗凝管抗凝，共596例。

1.1.2 仪器 戴安娜孵育器、戴安娜卡式离心机(西班牙戴安娜公司)、KA一2200离心机(日本久保田公司)；HZS-H水浴振荡器(哈尔滨东联电子技术开发有限公司)。

1.1.3 试剂 微柱凝胶抗球蛋白卡(西班牙戴安娜公司)；抗A、抗B血型定型试剂、筛选细胞、谱红细胞 (上海血液生物医药有限责任公司)；单克隆抗-D(IgM/ IgG)(Millipore(UK) Ltd)；血型反定型红细胞(自配)。

1.2 方法

1.2.1 参照方法 ABO/ Rh血型检测选用盐水试管法、新生儿直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、释放试验选用微柱凝胶法，所有操作均执行试剂说明书及《全国临床检验操作规程》[1]。

1.2.2 母亲和(或)新生儿红细胞不规则抗体筛选及鉴定，分别在3个微柱孔下标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，在反应池中分别加50ul的 1%～2%相应筛检红细胞，再分别各加50ul待检血清，置微柱凝胶专用孵育器孵育37℃，10min；取出后置专用微柱凝胶离心机离心。观察结果：红细胞全部沉于微柱底部者为阴性，全部或部分红细胞滞留于微柱凝胶孔中者为阳性。如红细胞不规则抗体筛选阳性需进一步进行抗体鉴定，操作方法同上。

1.2.3 HDN的判断标准 ①母婴血型不合；②婴儿符合高胆红素血症诊断标准；③ HDN 溶血三项结果：释放试验阳性、释放试验阳性和直接抗人球蛋白试验阳性、直接抗人球蛋白试验阳性和游离抗体试验阳性、释放试验阳性和游离抗体试验阳性、溶血三项均阳性者都可以证实为 HDN[2]。

1.3 统计学方法 本研究的统计学资料采用SPSS17．0统计学软件处理，计数资料用百分率表示，用χ2检验，(P<0.05)为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 596例HDN送检标本血型血清学检测结果 阳性标本429例，阳性率71.98%；其中ABO HDN 409例，占总阳性标本的95.33%；Rh HDN 18例占阳性标本的4.20%；其它不规则抗体2例(IgG型)占0.47%，详见表1。

表1 HDN阳性标本血型系统及特异性分布

2.2 HDN阳性率与患儿出生后采集标本时间的关系 患儿出生1天内采集标本检测阳性率与出生1天以上采集标本检测阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)，出生2天内采集标本与出生2天以上采集标本检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)，出生3天内采集标本与3天以上采集标本检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)，而患儿出生后4天内采集标本检测阳性率的高于4天以上采集标本检测阳性率(P<0.05)，而随着采集标本时间越长阳性率越低，到第6天或6天以上，阳性率只有48.5%，详见表2。

表2 患儿出生后采集标本时间与阳性率的关系

3 讨论

在596例新生儿溶血病标本中检出阳性的有429例，阳性率达71.98%，比相关一些报道略高，可能与各医院送检时患儿的临床症状明显(新生儿高胆红素血症)，血型符合HDN的规律(O型母亲生育非O型婴儿或Rh阴性母亲生育Rh阳性婴儿)有关。HDN 主要发生于ABO血型系统， ABO HDN 有409例，占阳性标本的95.33% ，这与吴远军等报道的95.63%[3]和孙六娜报道的95.56%[4]非常接近。而在ABO HDN 中B型患儿219例(51.05%)比A型患儿190例(44.28%)高，这也与蔡于旭等[5]报道的相一致。由表2可以看出HDN在患儿出生4天内采集标本检测的阳性率较高，随着出生时间越长而阳性率不断地下降。笔者认为原因可能与母亲的IgG抗体的效价与半衰期有关，如果效价较低，那么采集标本的时间越长，检测的阳性率越低；其次采集标本时间在4天后，游离抗体已被消耗差不多、致敏红细胞也被破坏了，游离实验与放散实验很难检测出来，因此产生假阴性。临床上疑似新生儿溶血病的患儿应在出生后4天内采集标本送检，采集时间越早越好，为临床提供早诊断早治疗的依据。

ABO HDN 是由于母婴ABO血型不合，母体的IgG抗A(B)抗体经过胎盘进入胎儿体内血液循破坏胎儿红细胞所引起,因孕妇在怀不合血型胎儿前就可能有多种原因使自身产生高效价的IgG抗-A(B)抗体，故ABO HDN可发生在第一胎。此病多见于O型孕妇所生A(B)型婴儿，本次结果调查409例ABO HDN 中孕妇均是O型，这可能与0型个体血液中除含有IgM 抗A(B)抗体外，同时含有较多的IgG抗A(B)抗体有关， O型孕妇血浆IgG抗A(B)抗体效价随孕妇年龄、孕次的增长而升高，即母婴血型不合新生儿发生 HDN 的患病率也随之升高[6],有相关的报导IgG抗A(B)抗体效价≥1∶64 可引起 HDN 并且随着效价增加而升高[7-8]。Rh HDN是由于母婴Rh血型不合所致的Rh免疫抗体作用于胎儿红细胞所致的高胆红素血症，此病只能由人类红细胞作为抗原刺激产生Rh免疫抗体，故极少发生在第一胎，除非以前有输血史与流产史。有报道Rh血型系统抗体发生的比例大约占到14.6%，以抗-D最为常见，抗-E、抗-C、抗-c抗体引起的Rh HDN也相对多见，也有Rh双抗体和三抗体的联合抗体的报道。本次调查Rh血型系统以抗-D最为多见，但总体确诊率明显较低(4.2%)，也发现了由抗-E、抗-Ec、抗-C等抗体引起的HDN。对于Rh血型系统，由于我国汉族Rh(D)阴性频率为0.2%～0.5%，远低于白种人的15%[9]，因此Rh血型系统红细胞抗体引起的HDN相对ABO较少。近几年来我国实行输血前鉴定Rh(D)血型，Rh(D)阴性受血者大多数都能接受Rh (D)阴性红细胞输注，由抗-D引起的 HDN 有逐步减少的趋势[3]。

该病主要临床症状是新生儿出现不同程度的贫血、黄疸、肝脾肿大，严重者可有水肿、核黄疸后遗症，甚至因为呼吸衰竭或肺出血而死亡。治疗上一般给予肾上腺皮质激素、蓝光照射、抗感染退黄等对症治疗，对于胆红素水平达到换血指征者应进行换血治疗。换血疗法的目的是预防核黄疸而降低血清胆红素的浓度，用带氧能力强的红细胞代替处于加速破坏的已包被的红细胞，移出婴儿体内已包被的红细胞，因为当这些细胞破坏时会增加胆红素的量，减少婴儿体内不相容的抗体含量[10]。换血疗法的效果非常显著，常能迅速改变患儿症状，是对高胆红素血症新生儿最有效的治疗手段。

[1]叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程[M]． 3版．南京：东南大学出版社，2006：256-257．

[2]刘达庄．免疫血液学[M]．上海：上海科学技术出版社，2002：136.

[3]吴远军，吴勇，卢庆辉，等. 母婴血型不合HDN患儿致敏红细胞的抗体特异性[J].细胞与分子免疫学杂志，2008.24(7) 727-728.

[4]孙六娜.108例新生儿溶血病患儿血清学检测结果分析[J]. 检验医学与临床，2012. 9 (21)2718-2719.

[5]蔡于旭. 290新生儿溶血病血清学检测结果分析[J]. 海南医学，2013.24(2)230-231.

[6]于晓，张涛，罗文娟，等．O型血型孕妇血浆中lgG抗体效价与孕妇年龄、孕期、孕次关系探讨[J].都医学院学报,2013.8(3) 341-343.

[7]李君华. O型血孕妇血清中IgG抗(A)B抗体效价对ABO新生儿溶血病的诊断意义[J]．医学与临床, 2013.10(7) 836-838.

[8]温洁新, 马西霞,孙稔侠,等． O型血孕妇血清中IgG抗(A)B抗体效价与ABO新生儿溶 血病的相关分析[J]．广东医学，2010,31(11)1430-1431 .

[9]MARION E R，RAGNHID O，MARSH W L．The clincal signficanc of alloantibodies of blood group system [J].Semin Hematol,2000,37:197-206.

[10]罗梅，何静，陈方祥．54例重度ABO新生儿溶血病换血治疗结果分析[J]．重庆医学，2010，2(39)：232-233.

林栋，主管技师，本科学历，E-mail:335295257@qq.com

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1007-8517(2014)14-0038-02

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