HPLC法测定长白山牛皮杜鹃中绿原酸的含量*

何晓燕，乔淑芬，苗婷婷

(通化师范学院 生命科学学院，吉林 通化 134002)

牛皮杜鹃(RhododendronchrysanthumPall.)为杜鹃花科植物，又称牛皮茶、高山茶等[1]．具有较高的观赏价值，广泛分布于长白山海拔1300～2600m的高山上，对高海拔有较强的适应性[2]．牛皮杜鹃主要含有黄酮类及单宁酸类化合物[3]，其中芦丁具有抗炎、抗病毒、镇痛、降低毛细血管通透性引起的出血症等方面的作用．目前国内外有关牛皮杜娟的化学成分研究报道很少．本文拟通过对长白山牛皮杜鹃进行化学成分的提取，测定其所含绿原酸的含量[4-6]，以探寻一种简便、有效的HPLC测定方法，为今后进一步研究开发牛皮杜鹃的应用价值奠定基础．

1 实验材料、仪器与试药

1.1 实验材料

牛皮杜鹃叶，采自于长白山，经通化师范学院生命科学学院周繇教授鉴定．干燥粉碎，备用．

1.2 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦仪器有限公司)；FA1104电子分析天平；KQ-500型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)．绿原酸对照品购自于中国药品生物制品检定所(批号为110753-200413)，乙腈(色谱纯)，磷酸(分析纯)，娃哈哈纯净水，其它试剂均为分析纯．

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(15:85)；检测波长为327nm；流速1.0ml·min-1；柱温:25℃．

2.2 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品5.130mg，用甲醇溶解，制成浓度为0.513mg·ml-1的对照品溶液．

2.3 供试品溶液的制备

取牛皮杜鹃粉末1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入50ml的70%乙醇，称定质量，超声提取30min后取出，放冷，再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，0.23μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，备用．

2.4 线性范围考察

精密吸取绿原酸对照品溶液1、5、10、15、20μl，依次进样，记录峰面积．以进样量(μl)为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程为Y=700.86X+25.711(r=0.9995)，结果表明绿原酸在0.513～10.26μg范围内线性关系良好．

2.5 精密度试验

精密吸取绿原酸对照品溶液10μl，连续进样5次，记录峰面积，计算得RSD值为1.06%，表明仪器精密度较好．

2.6 重现性试验

取同一批牛皮杜鹃粉末约1g，按2.3项方法制备供试品溶液6份，分别进样20μl，记录峰面积．测得RSD值为1.32%，表明重现性较好．

2.7 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h进样20μl，记录峰面积，测得RSD值为2.36%．表明在24h内供试品的稳定性较好．

2.8 加样回收试验

取已知含量的牛皮杜鹃粉末约1g，共6份，于每份中加入绿原酸对照品溶液2ml，按2.3项方法制备供试品溶液，分别进样20μl，记录峰面积．计算绿原酸平均回收率为98.9%，表明回收良好．结果见表1．

表1 绿原酸加样回收试验(n=6)

2.9 样品含量测定

精密吸取按2.3项方法制备的供试品溶液20μl，按上述色谱条件进行测定，计算得出绿原酸的含量为0.754mg·g-1．见图1、图2．

3 讨论

绿原酸具有较强的生物活性，具有广泛的抗菌作用，为临床上祛风除湿、强筋壮骨的物质基础．本文首次建立了长白山牛皮杜鹃中绿原酸的HPLC含量测定方法，此法简便快捷、结果准确、重现性好．此外，笔者也曾对长白山牛皮杜鹃的不同溶剂提取物的抗炎镇痛活性进行了系统研究，结果表明此方面的活性较强．因此绿原酸作为其活性的物质基础，对其进行质量控制是完全必要，这也为今后进一步系统研究牛皮杜鹃的化学成分奠定基础．

图1 绿原酸对照品的HPLC

图2 牛皮杜鹃供试品的HPLC