Microlab STAR液体处理工作站携带污染分析与对策

陈新 许建军

Microlab STAR液体处理工作站携带污染分析与对策

陈新 许建军

目的 通过对使用永久性加样钢针的STAR液体处理工作站在酶联免疫吸附测定(ELISA)实验中出现的拖带现象进行分析, 寻求有效的解决拖带现象的方法。方法 用Microlab STAR液体处理工作站在HBsAg、梅毒等项目的血液检测过程出现拖带现象进行观察, 对ELISA实验出现拖带阳性的标本, 采取确诊试验、手工重新加样、换用一次性加样针以及对献血者进行跟踪随访, 比较不同加样方法的检测结果。结果 经重新留取标本后的重新检测和确诊试验, 结果均为阴性, 证实为拖带现象所致。结论 使用永久性加样钢针的STAR液体处理工作站在ELISA实验中应加强对每次加样前携带污染的去除, 做好对仪器的维护保养可以减少拖带现象的发生, 而最好、最根本的解决办法是使用一次性加样针。

全自动液体处理工作站；酶联免疫吸附测定；阳性拖带

Microlab STAR液体处理工作站为瑞士生产的、以血液分析为主导、集多项体外诊断实验于一身的多功能液体处理自动化平台, 是目前国内采供血机构应用较理想的血液标本处理的设备之一。其简捷的操作界面, 良好的加样精度和速度, 为减轻工作人员劳动强度, 提高工作效率发挥了重要作用［1］。其永久性钢针独特的环流式内外壁清洗功能, 可以清除加样过程中的交叉污染。但对于个别强阳性标本, 由于加样中冲洗次数和量有限, 会造成邻近标本拖带污染, 造成不必要的血液资源浪费和对献血者的非正常阻止［2］。作者曾遇到8例因拖带污染而引起的假阳性发生。作者结合自己工作实际进行分析并改进钢针使用的方法, 最后在更换成一次性加样针后, 拖带现象消失, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 软件MICROLAB STAR液体处理工作站和应用软件(瑞士), FAME全自动酶免分析仪(瑞士)。

1.2 试剂 HBsAg(厦门新创, 批号：2012042117、2012053 115)；梅毒抗体试剂(厦门新创, 批号：2012087516、2012 060217)。

1.3 标本 均来自无偿献血者捐献血液留取的血液检测标本。

1.4 方法 按检测项目和试剂说明书要求, 在微机上编辑加样程序组合(抗HCV、抗HIV、HBsAg、梅毒抗体), 使用永久性钢针按照程序8针平行同时依次吸取试剂和血清标本进行加样。加样方向从酶标板的1～12列, 每次加样后进行内外壁清洗。

1.5 加样假阳性拖带标本的确定 如酶标板放置位置所示, A、B、C……H表示加样针和酶标板行数。1、2、3……12表示酶标板列数和加样顺序。酶标板孔位可示为A1、A2、A3……A12、B1、B2、B3……B12及H1、H2、H3……H12。见表1。

表1 酶标板孔位

液容量和清洗次数, 并在每加样程序完成后增设洗涤液清洗程序后, 在第二、第三批的检测结果中发现, H3、B5、C11、E9孔为强阳性, 而其余孔位的OD值比初次检测明显降低。并通过血辫检测得到证实采取措施后加样针的拖带污染明显减弱, 大幅度降低了由于拖带污染所引起的假阳性。

永久性钢针虽有独特的环流式内外壁清洗功能, 但随着使用时间的延长内壁非特异蛋白吸附的增加［3］, 特别是一些高浓度样本拖带污染仍会发生, 从作者的应用中也看到即使采取有效措施也无法彻底消除永久性钢针的引起拖带污染问题。

如果没有条件换用一次性加样针, 则可以如下操作：①每次加样中尽可能增加清洗量和次数；②增设洗涤液清洗程序在每批加样后清洗加样针3次；③在每一加样程序完成后用95%的酒精擦拭加样针；④使用酶免疫后处理器专用洗涤液完成3～5次冲洗后关机, 次日工作开始前彻底冲洗后再行加样；⑤对加样方向连续阳性现象必需剪血袋辫子进行双孔复试以血辫结果为准。经验证, 通过以上步骤的处理能有效的降低了拖带污染的发生, 较好地控制了拖带污染造成的假阳性。而为了从根本上杜绝因携带污染而造成的检测差错,建议在加样检测过程中, 全部选用了一次性加样针尖。

2 结果

2.1 HBsAg拖带阳性 一批分别出现于板G2、G3、G4孔位,其OD值为2.989、1.756、0.318。试验Cutoff值均为0.120。根据HBsAg检测规程与试剂盒说明书的要求对这三份标本使用原试剂进行双孔复试, OD值结果分别为2.546、2.202、1.628。上述3份标本送疾病预防控制部门进行免疫印迹法(WB)确认检测均为阳性。同时留取血袋辫子中血样进行检测, G3孔位EIA和WB阳性, 而G4、G5结果阴性, 并在随访检测结果中得到证实。二批出现于板H3、H4、H5孔位上,其OD值结果分别为2.978、1.378、0.213, 试验Cutoff值均为0.120。使用以上方法采用相同原试剂双孔复试OD值结果分别为2.974、0.646、0.024。这3份标本送市疾控中心做确认试验, 结果H3为阳性, 而H4、H5为阴性。血袋辫子留取样本的检测结果与上相同, 并且在随访检测中得以证实。

2.2 梅毒抗体拖带阳性 三个批次分别出现在B5、B6、B7与C11、C12和E9、E10孔位, 其OD值分别为2.193、1.276、0.230与2.697、0.226和1.963、0.328。试验Cutoff 值均为0.126。根据梅毒抗体检测规程与试剂盒说明书要求, 对这七份标本原试剂双孔复试结果分别为2.103、0.092、0.005与2.658、0.006和1.875、0.010。上述7份标本送疾病预防控制部门进行TPPA确认, B5、C11、E9为阳性, 其余均为阴性。同时留取血袋辫子中血样进行检测, 检测结果同前, 并在随访检测中得到证实。

2.3 换用一次性加样针, 使用上述相同试剂与标本, 重复上述实验操作, 未出现一例拖带现象, 检测出的疑似标本经疾病预防控制部门验证检测均为真阳性。

3 讨论

从第一批双孔复试检测结果中可以发现, G2、G3、G4孔为强阳性, 而G3、G4孔的OD值比初次检测明显增高。而留取血辫血样重新检测结果中, 只有G3阳性, 其余均为阴性, 证明为加样污染。作者尝试增大加样过程中的清洗洗

［1］ 王寒梅, 刘丽波, 王晓光.血液检测酶联免疫法全自动化的应用.中国地方病防治杂志, 2004(6):50.

［2］ 陈妍, 朱绍汶, 黄翔宁, 等.STAR全自动加样器引起血液检测阳性拖带现象分析.中国输血杂志, 2009(1):63.

［3］ 谭明科, 黄才勇, 徐飞, 等.MicrolabSTAR全自动加样系统维护保养及常见故障处理.现代检验医学杂志, 2004, 19(3):29-30.

2014-07-01］

215600 江苏省张家港市红十字血站(陈新)；江苏省昆山市红十字会血站质量管理科(许建军)

许建军