HPLC法同时测定复方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水杨酸的含量

何婉敏 莫国栋 聂秀霞

HPLC法同时测定复方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水杨酸的含量

何婉敏 莫国栋 聂秀霞

目的 建立高效液相色谱法(HPLC法)同时测定复方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水杨酸含量的方法。方法 采用Eclipse XDB-C18(5 μm, 4.6 mm×150 mm)色谱柱；甲醇- 0.5%乙酸铵(60:40)为流动相；检测波长为300 nm；柱温：30℃。结果 水杨酸在0.042~0.168 mg/ml浓度范围内, 峰面积与浓度呈良好的线性关系, 氯霉素在0.031~0.125 mg/ml浓度范围内, 峰面积与浓度呈良好的线性关系, 回归方程分别为：水杨酸：Y=13475 X-21.411(r=0.9997)；氯霉素：Y=8819.1 X-5.0643(r=0.9997)。结论 此法专属性高、耐用性强、操作简便, 适合作为测定复方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水杨酸含量的分析方法。

高效液相色谱法；氯霉素；水杨酸

复方氯霉素硼酸酊为本院自制外用制剂, 主要成份为氯霉素及水杨酸等, 具有止痒、杀菌、消炎的作用, 在治疗脂溢性皮炎及毛囊炎中发挥了较好的作用, 深受患者好评。作者查阅2010版《中国药典》［1］及文献［2, 3］, 并实时操作,发现采用HPLC法可以同时测定复方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水杨酸的含量, 现报告如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 安捷伦1260液相色谱仪；色谱柱：Eclipse XDB-C18(5 μm, 4.6 mm×150 mm), 电子分析天平［BSA124S型 赛多利斯科学仪器(北京)有限公司］。

1.2 试剂 甲醇(色谱纯 天津市康科德科技有限公司)；乙酸铵(色谱纯 天津市科密欧化学试剂有限公司)；水杨酸(100106-201104 中国食品药品检定研究院)；氯霉素(130303-200614 中国药品生物制品检定所)；复方氯霉素硼酸酊及复方氯霉素硼酸酊阴性制剂为本制剂室自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Eclipse XDBC18(5 μm, 4.6 mm×150 mm)；流动相以甲醇- 0.5%乙酸铵(60:40)；流速为1.0 ml/min；柱温为30℃；检测波长为300 nm。分别取水杨酸及氯霉素对照品适量, 用流动相溶解并稀释至刻度, 作为系统适用性试验溶液, 精密量取20 μl, 进样,进行测定。结果见图1。

2.2 线性相关性试验 分别取水杨酸、氯霉素对照品适量,精密称定, 置10 ml量瓶中, 加流动相溶解并定容至刻度, 摇匀, 作为对照品储备液。精密量取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 ml分别置于10 ml量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 作为系列标准溶液, 按照高效液相色谱法《中国药典》2010年版二部附录VD), 分别进样10 μl, 记录色谱图。以标准溶液的浓度c(mg/ml)为横坐标, 峰面积A为纵坐标绘制标准曲线, 水杨酸的回归方程为：Y=13475 X-21.411(r=0.9997), 氯霉素的回归方程为：Y=8819.1 X-5.0643(r=0.9997)。结果表明：水杨酸在0.042~0.168 mg/ml浓度范围内, 峰面积与浓度呈良好的线性关系, 氯霉素在0.031~0.125 mg/ml浓度范围内, 峰面积与浓度呈良好的线性关系, 标准曲线图见图3、图4。

图1 系统适用性试验色谱图

图2 空白溶剂色谱图

2.3 回收率试验 将各辅料按处方配比混合, 作为基质空白溶液, 取已知含量的对照品, 按80%、100%、120%三个水平各配3份, 用基质空白溶液稀释并定容至刻度, 摇匀,进样10 μl, 记录色谱图, 计算回收率。结果见表1、表2。回收率=(测得量-样品量)/加入量×100%。

图3 水杨酸标准曲线图

图4 氯霉素标准曲线图

表1 水杨酸回收率试验结果

表2 氯霉素回收率试验结果

2.4 精密度试验 取对照品溶液, 照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版二部附录VD), 进样10 μl, 连续测定6次,记录色谱图。结果测得水杨酸、氯霉素RSD分别为0.43%、0.38%。

2.5 重复性试验 取供试品溶液(批号：20131025), 照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版二部附录V D), 进样10 μl, 连续测定6次, 记录色谱图。结果测得水杨酸RSD为0.59%、氯霉素RSD为1.25%。

2.6 改变流速的研究 照2.7含量测定方法, 改流速为0.95 ml/min、1 ml/min、1.05 ml/min；柱温为室温；检测波长为300 nm。取供试品溶液10 μl, 分别注入液相色谱仪, 记录色谱图, 按外标法以峰面积计算。主峰的拖尾因子均＜2.0, 氯霉素与水杨酸分离度＞1.5, 氯霉素与水杨酸的含量相对标准差均＜2.0%。

2.7 含量测定 取供试品溶液与对照品溶液各10 μl, 分别注入液相色谱仪, 记录色谱图, 按外标法以峰面积计算, 即得。结果见表3。

表3 复方氯霉素硼酸酊中水杨酸及氯霉素的含量测定结果(%)

3 讨论

复方氯霉素硼酸酊为本院自制制剂, 主要成分为水杨酸和氯霉素, 具有抗菌消炎的作用, 主要用于脂溢性皮炎、皮疹等皮肤病。2010版《中国药典》中采用用高效液相色谱法测定水杨酸和氯霉素的含量［1］, 查阅文献资料, 有采用高效液相色谱法同时测定氯霉素与水杨酸的报道［3］, 作者参考文献, 并在此方法上作了进一步改进, 取得了较好的效果。此法操作简单, 方法简便、快速, 结果准确、可靠、重现性好,可作为该制剂的含量测定方法。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京：中国医药科技出版社, 2010:78-79.

［2］ 龚银香, 魏军.高效液相色谱法测定复方氯霉素酊中氯霉素含量.长江大学学报(自然版), 2006, 3(3):298-230.

［3］ 郭胜才, 谷娜, 李华.高效液相色谱法测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸和氯霉素的含量.医药导报, 2010(6):30.

2014-06-23］

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