WT1基因与急性髓细胞白血病预后的研究

陆丽娜 马梁明

WT1基因与急性髓细胞白血病预后的研究

陆丽娜 马梁明

目的 分析WT1基因与急性髓细胞白血病(AML)预后之间可能存在的关系。方法 实时荧光定量PCR法测定50例AML患者(实验组)和15例健康人(对照组)骨髓WT1基因不同阶段的表达水平。结果 15例正常人骨髓微量或不表达WT1基因。经标准方案化疗后, 17例WT1基因表达水平不高的AML患者中15例达CR, 33例WT1基因表达水平增高者18例CR(χ2=4.273, P=0.039), 该18例CR患者骨髓WT1基因表达与初次发病时比较明显降低(P＜0.05)。经随访12个月, 18例WT1增高的患者中12例复发, 15例WT1正常的患者中2例复发(χ2=9.528, P=0.006)。结论 无WT1基因表达增高的AML患者具有较高的CR和更低的复发率。

WT1基因 ； 急性髓细胞白血病；荧光定量PCR

在肾母细胞瘤中, WT1基因是定位于人类11号染色体短臂的1区3带的一种肿瘤抑制基因, 而通过近年研究发现,该基因在急性白血病中发挥癌基因样作用, 与白血病的发生、发展及预后可能有关, 在各类白血病中有不同程度表达的基因, 因此WT1基因被认为是一种“泛白血病”基因标志,定期动态的检测WT1基因表达水平可用来监测微小残留病(MRD)和判断疾病预后［1,2］。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年12月～2012年12月在本院就诊的AML患者50例作为实验组, 外院未接受过任何治疗。其中男29例, 女21例, 年龄6～62岁, 中位年龄38岁。根据FAB分型：其中M04例, M13例, M219例, M36例, M412例, M56例。M3患者除给予柔红霉素化疗外, 同时给予三氧化二砷和维A酸治疗, 除M3外其余患者均给予标准DA方案(DNR 45～60/m2, Ara-C 100～200/m2)化疗。疾病缓解均符合《血液病诊断及疗效标准》［3］。对照组15例, 均为健康体检者, 其中男9例, 女6例, 年龄12～60岁, 中位年龄41岁。

1.2 标本采集 WT1基因测定：所有的患者抽取骨髓标本3 ml, 采用EDTA抗凝备用。

1.3 WT1测定方法及取值 提取RNA、逆转录合成cDNA、实时定量PCR及标准曲线的制作、标本相应的WT1基因表达水平的计算均根据文献［4］的常规方法。WT1基因表达水平 = (WT1拷贝数/ABL拷贝数)×10000(WT1基因表达水平>140为阳性, WT1基因表达水平≤140为阴性)。

1.4 统计学方法 采用SPSS16.0软件包进行统计学分析。计量资料呈非正态分布, 采用Mann-Whitney U检验。分组数据率的比较使用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 WT1基因在AML患者中表达阳性率为66%(33/50), 而在正常健康者中未表达或表达微量；实验组与对照组WT1基因比较差异具有统计学意义(P＜0.01)。两组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05), 说明为随机抽取样本, 结果真实可靠。见表1。

表1 WT1基因在AML患者中的表达情况

2.2 在50例AML患者中, 经标准方案化疗后, WT1基因表达增高者完全缓解(CR)率与WT1基因表达正常者比较差异有统计学意义(χ2=4.273, P=0.039)。见表2。

表2 WT1基因表达增高者与表达正常者完全缓解率比较(n)

2.3 随访观察12个月, WT1增高组较WT1正常组复发率更高(χ2=9.528；P=0.006)。见表3。

表3 12个月后两组复发率比较(n)

3 讨论

正常人骨髓WT1基因微量表达或不表达。WT1基因表达正常的AML患者较WT1基因增高者有更高的完全缓解率、更低的复发率。

通过对MRD的动态监测早期发现复发的高危患者, 并在分子水平复发时早期干预治疗, 可阻止血液学复发。但并非所有的血液系统恶性疾病都有其特异性的融合基因或者免疫表型, 尤其是在AML中, 60%以上缺乏独特的分子生物学标记［5］, 由此造成对这一大类白血病患者MRD监测的困难。有文献报道, WT1基因在约60%～70%的急性髓细胞白血病中高表达, 故监测该基因的变化, 可能会提示疾病的复发。Bergmann等［6］报道：通过使用Rt-PCR法定量检测了急性白血病患者的WT1 基因的表达水平, 结果表明在所有的标本中, WT1 基因表达水平是正常人外周血、骨髓的103～104倍, 同时观察到WT1 基因表达水平与急性白血病预后之间的关系, 将K562细胞株(慢性粒细胞白血病急变期细胞株)的WT1 基因表达水平定为1, 检测结果发现WT1 水平<0.6的患者的缓解率与无病生存率明显升高［7］, 这些研究结果均提示WT1基因的表达水平是急性白血病新的预后因素, 在疾病不同时期的表达水平, 对疾病的发展及预后的预测有着重要意义。

本实验通过回顾性的分析50例AML患者治疗前后WT1基因水平的变化发现, WT1基因表达阳性率结果(66%)与以往的一些实验基本吻合, 说明该基因在急性髓细胞白血病中表达的广泛性。初发WT1基因表达微量或不表达的AML较WT1基因高表达的AML具有更高的完全缓解率；而在WT1基因高表达的AML患者中, 随着该基因表达水平的增高, 完全缓解率下降；经过标准化疗后, 完全缓解的AML患者, WT1基因表达水平明显下降；复发的患者, WT1基因表达水平再次升高, 与初次发病时比较差异无统计学意义(P＞0.05)。因此动态的检测WT1基因表达水平, 对于评价AML发展及预测预后有重要的意义。随着新的诊疗技术的开展, 人们将会更便利地通过检测WT1来评估及治疗AL, 也许在不久的将来WT1这一预后不良指标会像早幼粒白血病/维甲酸受体(PML/RARα)基因一样成为预后良好因素。

［1］ Menssen HD, Siehl JM, Thiel E.Wilms tumor gene(WT1) expression as a panleukemic marker.Int J Hematol , 2002,76(2):103-109.

［2］ Kletzel M, Olzewski M, Huang W, et al.Utility of WT1 as a reliable tool for the detection of minimal residual disease in children with leukemia.Pediatr Dev Pathol , 2002,5(3):269-275.

［3］ 张之南.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社, 1998(4):264.

［4］ 华海应, 孙爱宁, 何军, 等.WT1基因在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义.苏州大学学报(医学版), 2009(29):300-303.

［5］ Pallisgaard N, Hokland P, Riishoj DC, et a1.Multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction for simultaneous screening of 29 translocations and chromosomal aberrations in acute leukemia.Blood, 1998(92):574-588.

［6］ Bergmann D, Miething C, Maurer U, et al.High levels of Wilms’tumor gene(WT1) mRNA in acute myeloid leukemias are associated with a worse long-term out-come.Blood, 1997(80):1217-1225.

［7］ Miwa H, Beran M, Saunders GF, et al.Expression of the Wilms tumor gene(WT1) in human leukemias.Leukemia, 1992, (6):405-409.

2014-05-21］

030001 山西医科大学研究生院

马梁明