肺炎支原体快速培养法在呼吸道感染诊断中的应用

杨笑琼??秦亚军??詹剑峰

[摘要] 目的 探讨快速培养法在诊断肺炎支原体导致的呼吸道感染中的作用。 方法 对2011年12月～2013年12月来院就诊的疑似肺炎支原体感染患者200例进行研究，留取咽拭子和血清，分别进行快速培养法、荧光定量PCR法和血清抗体法检验，并就快速培养法与其余两种不同的检测方法的结果进行对比分析。 结果 快速培养法、荧光定量PCR法和血清抗体检验法检测阳性率分别为30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培养法阳性率与荧光定量PCR法检测阳性率相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；而快速培养法检测阳性率与血清抗体法检测阳性率相比较，快速培养法检测阳性率显著高于血清抗体检测法，且差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论 快速培养法检测肺炎支原体的敏感性和灵敏性可与荧光定量PCR法检测结果相媲美，但装备技术要求和检测成本明显低于荧光定量PCR法，同时敏感性和灵敏性显著高于血清抗体检测法。快速培养法检测肺炎支原体不仅能有效满足临床需要，同时兼具有成本低的特点，因此这种方法具有较高的性价比，尤其适用于基层医院。

[关键词] 肺炎支原体；快速培养法；荧光定量PCR法；血清抗体检验法

[中图分类号] R446 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）15-84-03

肺炎支原体是介于病毒和细菌之间的一种较为特殊的微生物[1]。人体呼吸道黏膜存在着多种支原体，已经被证实可以引起肺炎的支原体只有肺炎支原体[2]。由于可以引起肺炎的病原体种类较多，医生仅仅根据患者的临床表现无法确定是哪种病原微生物导致患者发生肺炎，因而无法对症下药[3]，因此，病原体的检测对于疾病的诊断和指导临床用药至关重要[4]。肺炎支原体常用的检测方法有快速培养法、荧光定量PCR法和血清抗体检验法[5]。本研究就2011年12月～ 2013年12月来院就诊的疑似肺炎支原体感染患者200例进行研究，分别使用三种不同的检测方法对每位患者进行检测，并将快速培养法的检测结果与荧光定量PCR法和血清抗体检验法的检测结果相比较，探讨快速培养法在诊断肺炎支原体导致的呼吸道感染中的应用价值。研究取得满意的结果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2011年12月～2013年12月来院就诊的疑似肺炎支原体感染患者200例，其中男118例，女82例，年龄3～25岁，平均（11.5±5.2）岁。对每位患者取两份咽拭子并抽取静脉血3mL，其中取咽拭子前患者必须先漱口。两份咽拭子分别用于快速培养和荧光定量PCR检测，静脉血分离血清后做肺炎支原体特异性IgM抗体检测。

1.2 方法

1.2.1 快速培养法 快速培养法检测使用肺炎支原体快速检测试剂盒（武汉菁华时间科技有限公司生产，批号2010-3-16-03），将一份咽拭子置于液体培养基中搅拌数次，放入37℃培养箱中培养6h后开始观察结果，如必要可将观察时间延长到1～ 4周。如果液体培养基颜色变为黄色，再接着进行40倍光学显微镜观察，如果显微镜下没有发现细菌或者真菌，则结果为阳性，发现细菌或者真菌则结果为阴性；如果液体培养基颜色仍保持为原红色或者非清亮的黄色则结果为阴性。

1.2.2 荧光定量PCR法 核酸定量检测试剂盒选择中山大学达安基因股份有限公司产品，使用罗氏公司生产的PCR扩增仪进行扩增，所有操作步骤均严格按照说明书执行，结果直接以阳性或者阴性报告。

1.2.3 血清抗体检测法 将患者血清以3000r/min转速离心10min后取出血清，然后进行肺炎支原体特异性IgM抗体检测，采用肺炎支原体特异性IgM抗体检测试剂盒（胶体金法）进行测试。严格按照试剂盒说明书进行，如果没有出现质控点则表明试验操作不当或者试剂失效，应当重新按照规定测试；如果出现质控点则表示试验正常，可以进行结果判定，若仅有质控点则表明结果为阴性，只有在出现2个斑点的情况下才能确定试验结果为阳性。

1.3 评价指标

将快速培养法的检测结果（即检出的阳性率）分别与荧光定量PCR法和血清抗体检验法的检测结果进行两两比较，用阳性检出率的差异是否具有统计学意义判定检验方法的效果。

1.4 统计学方法

所有数据经epidata输入计算机，应用SPSS15.0统计软件分析，两组间阳性率的比较采用x2检验，α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

200例疑似患者分别通过快速培养法、荧光定量PCR法和血清抗体检验法检测阳性率分别为30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培养法阳性率与荧光定量PCR法检测阳性率相比较，差异无统计学意义（x2=0.05，P>0.05）；快速培养法检测阳性率与血清抗体法检测阳性率相比较，快速培养法检测阳性率显著高于血清抗体检测法，且差异具有统计学意义（x2=10.21，P<0.05）。具体比较见表1、2。

3 讨论

肺炎支原体比较容易引起人肺炎，据相关资料表明肺炎支原体引起的肺炎占到非细菌性肺炎的一半以上[6]。肺炎支原体引起的人体肺组织病理变化主要表现为间质性肺炎，又称为原发性非典型

肺炎[7]。肺炎支原体可以从急性感染者的咽部、肺部、气管、支气管以及胸水中分离出来，也有部分人是肺炎支原体携带者。携带者一般无临床症状，但其可作为重要的传染源，是疾病预防控制过程中需要加以重视的环节[8]。支原体肺炎的临床症状一般较为轻微，发病缓慢，患者发热、咳嗽以及黏液或者脓性痰甚至血痰等症状较常见，一般来说不具有明显的肺部体征[9]。

支原体肺炎的感染途径主要是因为健康人接触了或者吸入了肺炎支原体患者排出的分泌物，人群对于肺炎支原体的抵抗力较弱，普遍易感，患者中儿童和青少年占绝大部分[10]。支原体肺炎的发生具有明显的季节性，大多发生于夏末秋初，春季和冬季也有少量散发。研究显示[11]，近年来肺炎支原体感染引起肺炎的发病率有逐年增加的趋势，尤其值得注意的是支原体肺炎在家庭或者医院中的爆发性流行。

本研究显示快速培养法阳性率与荧光定量PCR法检测阳性率相比较阳性率比较接近，差异无统计学意义；快速培养法检测阳性率与血清抗体法检测阳性率相比较，快速培养法检测阳性率显著高于血清抗体检测法，且差异具有统计学意义。相关研究表明PCR法检测肺炎支原体具有较高的灵敏度和准确度，但是PCR操作首先需要较好的设备，其次需要高素质的人才，因此成本较高，每次检测所需费用非常昂贵，目前尚不具备广泛推广的条件[12]。而快速培养法检测肺炎支原体的灵敏度和可靠性与PCR法非常接近，但每次检测的成本较低，在患者可承受范围以内，因而具备广泛推广的条件。

综上所述，快速培养法检测肺炎支原体的敏感性和灵敏性可与荧光定量PCR法检测结果相媲美，但装备技术要求和检测成本明显低于荧光定量PCR法，同时敏感性和灵敏性显著高于血清抗体检测法。快速培养法检测肺炎支原体不仅能有效满

足临床需要同时兼具有成本低的特点，因此这种方法具有较高的性价比，可以作为基层医院检测方法的重要选择。

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（收稿日期：2014-04-15）