茶树根抗痛风作用的实验研究*

★ 余雄英 周军 曹树稳 刘升长

(1.江西中医药大学 江西 南昌 330004 ； 2.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 江西 南昌 330047)

随着人民生活水平的提高和饮食结构的改变，各国痛风发病率均与日俱增，痛风患者还出现了年轻化的趋势。因此研究痛风，开发防治痛风、高尿酸血症的药物已成为当前医药界研究的一个热点。黄嘌呤氧化酶 ( Xanthine Oxidase )，简称 XOD ,是尿酸生成的关键酶，同时XOD也是治疗高尿酸血症的药物作用靶点[1]。茶树根为山茶科山茶属植物茶的根，味苦，性平，具有强心利尿、抗菌消炎、收敛止泻的功效。临床上用于风湿性、高血压性及肺原性心脏病、冠心病、心律不齐等疾病[2]。目前茶树根化学成分研究表明新鲜根含水苏糖、棉子糖、蔗糖、葡萄糖、果糖等糖类，并含少量多酚化合物(黄烷醇等)、萜类皂苷类成分[3]。江西民间常用茶树根来治疗痛风[4]。本实验就其抗痛风作用的药理作用进行了研究。

1 材料

1.1 动物 昆明种小鼠，雄性，体重(30±2 )g，许可证号：Scxk(赣)2011-0001，江西中医学院实验动物研究室提供。使用前在实验室1周以适应环境。

1.2 仪器和试剂 7200型可见分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限公司)。游标卡尺(桂林广陆数字测控股份公司);尿酸(Sigma)，氧嗪酸钾盐(potassium oxonate，Aldrich Chemical Company)，尿酸测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，生产批号20110527)，XOD测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，生产批号20110628)，别嘌呤醇片(上海信谊万象药业股份有限公司), 吲哚美辛片(江苏亚邦药业集团股份有限制造分公司生产)。

茶树根采自茶园，经江西中医学院吴志瑰讲师鉴定为山茶科山茶属植物茶Camellia sinensis(L.)O.Kuntze[Thea sinensis L.]的干燥根。

2 方法

2.1 试剂配制

2.1.1 尿酸、氧嗪酸钾盐混悬液的制备 精密称取尿酸、氧嗪酸钾盐，分别用0.9%CMC-Na 配制混悬液，其浓度分别为 15 g·L-1和45 g·L-1。

2.1.2 别嘌呤醇液制备 取别嘌呤醇片10片,加蒸馏水溶解配成1.5 g·L-1。

2.1.3 茶树根水煎剂的制备 按水煎煮工艺自制，配制成含生药2 g·mL-1。

2.1.4 尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备 参照文献[5]略作改进，取194mL蒸馏水加6 mL NaOH (1 M) ，煮沸后加1.0 g尿酸，用1NHCl ，调pH至7.2 ，搅拌冷却 ，贮存于4 ℃冰箱中24 h抽滤，干燥得尿酸钠结晶。取1250mg尿酸钠结 晶 ，加入45mL生理盐水，同时加入5mL吐温80 ，加热搅拌 ，配成50mL尿酸钠混悬溶液备用 (25mg/mL)。

2.2 痛风性关节炎小鼠模型的建立 参照文献[6]等的经典方法略作改进。用6号注射针在受试小鼠右足垫部注射尿酸钠溶液0.05mL，诱导痛风性关节炎发生。

2.3 痛风性关节炎小鼠模型分组与给药和测量 取50只小鼠随机分为5组 ，造模前3天开始灌胃给药 ，每日1次 。生理盐水组以同体积生理盐水灌胃。于末次给药后30min,除生理盐水组小鼠在右足垫部注射生理盐水0.05mL外，其余各组小鼠在右足垫部注射尿酸钠混悬溶液0.05mL，诱导诱导痛风性关节炎发生。分别用游标卡尺测量各组小鼠在致炎前和致炎后1、3、5 h小鼠右足垫部的宽度，以致炎前后的差值作为痛风性关节炎的肿胀度。

观察造模大鼠治疗前后各组关节肿胀的变化，进行组间差异性比较。

2.4 高尿酸血症模型的建立 参照文献[7,8]并略作改进，选用氧嗪酸钾(0.3 g·kg-1)和尿酸(0.25 g·kg-1)ip小鼠每天1次，连续3 d进行造模，增加血清尿酸水平，造成小鼠高尿酸血症模型。

2.5 高尿酸血症模型分组与给药 生理盐水组和高尿酸模型组每天均按20 mL/kg剂量ig生理盐水,连续6d,别嘌呤醇组(10 mg/kg)每天ig给药1次，持续6 d，茶树根高剂量组(34.3 g/kg)、茶树根低剂量组(17.15 g/kg)每天ig给药1次，灌喂6d,从给药第4天开始，除生理盐水组外，其他各组每天ig给药前1h 均要ip氧嗪酸钾和尿酸，氧嗪酸钾和尿酸的剂量分别为0.3g/kg和0.25g/kg，每天1次，连续3天进行造模。在第5天ig给药后将小鼠放置代谢笼内，每5只一笼，只给自由饮水，不给饲料，收集尿液5h, 新鲜尿样以3 000 r/min离心15 min ，取上清液进行尿液尿酸测定。在最后一次ig给药1h后从小鼠股动脉进行采血，血样分别置于1.5mL 离心管中，在4℃下凝固2h,在3 000 r/min离心5 min。每份血样血清取200μL用于血清尿酸的测定与XOD活力的测定。

2.6 生化指标检测 分别测定小鼠血尿酸、尿尿酸水平和血黄嘌呤氧化酶活性。采用磷钨酸法分别检测各组小鼠尿酸，酶比色法检测黄嘌呤氧化酶。具体操作按试剂盒说明书进行。

表1 茶树根水煎剂对痛风性关节炎小鼠模型的影响±s，n=10)

表2 茶树根水煎剂对高尿酸血症小鼠尿酸水平的影响±s，n=10)

表3 茶树根水煎剂对高尿酸血症小鼠血清XOD活力水平的影响±s，n=10)

3 结果

3 .1 茶树根对痛风性关节炎小鼠的影响 小鼠右足垫部注射微晶尿酸钠后，模型组与生理盐水对照组比较有显著差异(P<0.01),说明尿酸盐诱导的小鼠痛风性关节炎模型成功。茶树根水煎剂高低剂量组在不同时间点(3、5 h)对尿酸盐诱导的小鼠足肿胀均有显著抑制作用(P<0.01)，且剂量与抑制肿胀呈良好的量效关系(P<0.05)，说明茶树根对小鼠痛风性关节炎有显著拮抗作用。结果见表1。

3.2 茶树根水煎剂对高尿酸血症模型小鼠血尿酸的影响 与生理盐水组比较，模型组中血清尿酸显著升高(P<0.01)，说明造模成功，与模型组比较，茶树根高低剂量组均能显著降低血清尿酸水平[P<0.01(高剂量)，P<0.05(低剂量)]。茶树根高低剂量组之间有显著差异(P<0.05)。而别嘌呤醇组极显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(P<0.001)，能降至正常值以下。结果见表2。

3.3 茶树根水煎剂对高尿酸血症小鼠尿液尿酸水平的影响 与生理盐水组比较，模型组中尿尿酸显著升高(P<0.01)。与模型组比较，茶树根高低剂量组均能显著增加尿尿酸水平[P<0.01(高剂量)，P<0.05(低剂量)]。茶树根高低剂量组之间有显著差异(P<0.05)，别嘌呤醇组几乎不能增加高尿酸血症小鼠尿尿酸水平。结果见表2。

3.4 茶树根水煎剂对高尿酸血症小鼠血清XOD活力水平的影响 与生理盐水组比较，模型组中血清XOD活性显著升高(P<0.01)。与模型组比较，茶树根高低剂量组均能显著增加尿尿酸水平[P<0.01(高剂量)，P<0.05(低剂量)]。茶树根高低剂量组之间有显著差异(P<0.05)，别嘌呤醇组可极显著降低高尿酸血症小鼠血清XOD活性水平(P<0.001)，能降至正常值以下。结果见表3。

4 讨论

痛风是一种代谢性疾病，难以根治，其反复发作可产生痛风石(尿酸盐)沉积，导致关节畸形和肾结石，有较大的危害性。目前西药治疗痛风有效，但长期服用，毒副作用大，而使其临床应用受到较大限制。而茶树根源自食物茶的根，一种中草药，毒副作用小，安全指数高，江西民间常用它来治疗痛风。

本实验结果表明：茶树根水煎剂对痛风性关节炎小鼠有明显的抑制作用;对高尿酸血症模型小鼠的血尿酸和血黄嘌呤氧化酶的活性都有明显的降低作用，能促进高尿酸血症模型小鼠的尿尿酸的排泄。上述研究结果为茶树根临床治疗痛风提供了药效学实验依据 。

[1]黄海,高展翔,王红妹，等.加味茵陈五苓散对高尿酸血症大鼠黄嘌呤氧化酶活性的调节作用[J].福建中医学院学报,2010,20(41):33 -35.

[2]中药辞海组编.中药辞海[M].北京:中国医药科技出版社，1999: 1 287.

[3]南京中医药大学编著. 中药大辞典[M].上海: 上海科学技术出版社,2006：165-169.

[4]余雄英，周军，陈美兰，等.茶树根的抗炎镇痛作用研究[J].现代中药研究与实践，2012，26(4):39-41.

[5]孙晓波, 李会芳,代竹青，等.藏药桑当抗痛风作用的实验研究[J].四川中医,2005， 23(6)：19-20.

[6]杨和金，苏梅，赵春梅，等.痛风液抗痛风关节炎的实验研究[J].中草药,2010，41(9)：1 504-1 506.

[7]Kong L D ,Zhou J,Wen Y L, et al .Aesculin Possesses Potent Hypouricemic Action in Rodents but is Devoid of Xanthine Oxidase/dehydrogenase Inhibitory Ativity[J].Planta Medica,2002.68(2):175.

[8]Kim Y G,Huang X R,Suga S, et al .Involvement of macrophage migration inhibitory factor(MIF)in experimental utic acid nephropathy[J].Mol Med ,2000,6(10):837.