细胞免疫在三阴性乳腺癌治疗中的临床研究

王 征，翟晓建，叶新平，李 琰，郭 满，李伟汉，张 浩

（1.河南省南阳市中心医院乳腺外科 473000；2.广西医科大学第一附属医院普外科，南宁 530000；3.南阳医学高等专科学校普外科，河南南阳 473061）

三阴性乳腺癌（triple－negative breast cancer，TNBC）发病较低，占乳腺癌患者总数的12%～17%［1］。但其有恶性程度高、预后差等特点［2－4］，治疗以细胞毒性药物化疗为辅助治疗，但效果不佳。由于受体缺乏，内分泌治疗及针对人类表皮生长因子受体2（HER－2）过表达的靶向治疗也无效［5］。所以大家都在尝试新的治疗方法。细胞因子激活杀菌细胞（CIK）细胞疗法成为抗肿瘤过继性细胞免疫治疗的首选方案。本研究尝试应用CIK联合化疗治疗TNBC，评估以CIK为基础免疫治疗TNBC的有效性和安全性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究选取2007年1月至2013年1月就诊于南阳市中心医院乳腺外科、广西医科大学第一附属医院普外科、南阳医学高等专科学校普外科住院的TNBC患者420例，分成两组，分别为CIK免疫细胞治疗加TA方案化疗的CIK联合化疗组和单纯TA方案化疗的对照组，详细了解入组患者病史，进行全面的体格检查并行卡氏功能状态评分（KPs），KPs评分标准：KPs≥60分；预计生存期大于6个月。排除心、肝、肾功能不全；并发其他恶性肿瘤；有精神或心理疾病不能配合治疗及疗效评估者。入组患者治疗前签署知情同意书。两组患者年龄、肿瘤分期、淋巴结转移情况之间无明显差异。

1.2 方法 CIK细胞制备及回输，先用Ficoll－泛影酸钠（Ficoll－Hypaque）密度梯离心将患者外周血的单核细胞分离，重悬于10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养液中，以2×106mL－1铺满培养瓶后，按1000U／mL浓度加入γ－干扰素，在37℃、5%CO2培养箱中孵育；第2天加CD3单抗和IL－2继续培养；培养10～14d后收集CIK细胞。经检验合格后，制成100 mL CIK细胞悬液，静脉回输患者。CIK细胞回输前2d进行细菌学检测，回输前1h进行细菌内毒素检测；对输入的CIK细胞用流式细胞仪（美国BD公司的FACS CaIiur）对CD3、CD4、CD8、NKT等标记细胞进行测定和分析。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行数据分析，两两比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，生存时间比较应用Log－rank检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 安全性评价结果 按照WHO标准评估每次治疗周期中对两组患者化疗的不良反应强度，回输后临床观测到无明显的不良反应。两组均有白细胞、血小板减少，肝功能损害，胃肠道反应、发热等常见不良反应，在治疗过程中未完成CIK治疗2例，化疗后不能耐受反应退出4例，但均无死亡事件发生，在输注CIK细胞过程中有2例出现发热反应，但未超过38.5℃，观察后退热。两组的不良反应接近，见表1。

2.2 细胞免疫功能 分析两组治疗前后T细胞免疫功能检测结果，CIK治疗后CD3＋、CD8＋、NKT细胞比例升高，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 化疗联合CIK组和单纯化疗组患者外周血T细胞亚群的变化（）

表2 化疗联合CIK组和单纯化疗组患者外周血T细胞亚群的变化（）

＊：P＜0.05，与同组治疗前比较；Δ：P＜0.05，与对照组治疗后比较。

NKT CIK组别 CD3＋ CD4＋ CD8＋联合治疗组治疗前 62.25±12.28 35.38±9.13 28.21±7.45 5.51±4.18治疗后 81.14±13.38＊ 34.21±10.18 36.44±12.53Δ＊ 17.14±3.44Δ＊对照组治疗前 71.43±13.42 35.71±11.62 30.82±6.51 4.63±5.27治疗后 68.19±11.17 31.81±10.25 28.13±10.63 2.17±3.23

2.3 生存质量评价 两组患者应用欧洲癌症研究与治疗组织生存质量核心量表（TORTC）评估治疗后的生存质量。两组患者躯体功能、角色功能、认知功能、情绪功能、社会功能、整体生活质量比较，研究组比对照组评分高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 两组患者EORTC QLQ－C30各项评分比较（）

表3 两组患者EORTC QLQ－C30各项评分比较（）

项目 研究组 对照组P躯体功能 80.0±6.7 65.0±7.2 ＜0.05角色功能 67.0±8.2 50.6±7.0 ＜0.05认知功能 81.5±4.5 67.1±10.1 ＜0.01情绪功能 63.4±8.7 54.1±6.2 ＜0.05社会功能 65.4±9.4 50.3±8.7 ＜0.05整体生活质量 60.2±8.1 46.7±7.2 ＜0.01

图1 两组间生存曲线的比较

2.4 化疗加CIK组与单纯化疗组患者治疗后的生存时间评价 通过电话随访、门诊复诊及书信随访等形式，随访6～48个月，其中，失访13例，在治疗过程中未完成CIK治疗2例，化疗后不能耐受反应退出4例。应用Log－rank检验比较两组生存时间，得出χ2＝5.982，P＝0.021，提示化疗联合CIK治疗提高患者的生存时间，见图1。

3 讨 论

乳腺癌的发生、发展中存在免疫逃避、免疫抑制的机制。CIK是过继性免疫治疗中的一种常见的、有效的手段。安全性高，在心包内灌注也有较高的安全性［6］。在本研究中发现CIK联合化疗与单纯化疗的不良反应相近，仅在单纯输注CIK免疫细胞过程中出现中度发热，但无恶性不良反应发生。CIK细胞在外周血中的含量极少（约为1%～5%），只有扩增后才能应用于临床肿瘤的治疗。临床中使用的CIK细胞是通过将采集的患者外周血单个核细胞在体外与抗CD3微粒体抗体（McAb）、IL－2及干扰素－γ（IFN－γ）等细胞因子共同培养，然后获得一种异质细胞群。该细胞群兼具T淋巴细胞强大的抗瘤活性及NK细胞的非主要组织相容性复合体限制性杀伤肿瘤细胞的特点［7］。CIK细胞对不同肿瘤细胞株有很强的杀伤作用［8］。CIK细胞与淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells，LAK）［9］、肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltration lymphocyte，TIL）和 CD3单抗激活的杀伤细胞（anti－CD3 antibody induced activated killer，CD3AK）等过继性免疫治疗手段相比，具有细胞扩增快、杀瘤活性强、杀瘤谱广泛、对多重耐药肿瘤细胞疗效佳、不良反应小等优势，已成为过继性细胞免疫抗肿瘤治疗的首选方案。CIK细胞治疗能够降低肿瘤患者外周血TRAG比例，提高CD3＋、CD4＋细胞比例及CD4＋／CD8＋细胞比值，从而减轻或消除肿瘤患者的免疫抑制状态［10］。本研究中检测T治疗后细胞亚群相对计数发现，CIK联合化疗治疗后患者CD3＋、CD8＋、NKT细胞百分比较治疗前明显提高，与单纯化疗组相比，CD3＋、CD8＋、NKT细胞百分比也升高，单纯化疗组患者T细胞亚群比例降低，说明患者接受CIK治疗后免疫细胞增加，免疫功能增强，减轻了化疗引起的免疫抑制作用，说明CIK治疗有助患者T细胞功能的恢复，达到抗肿瘤目的。在生存质量评价中，EORTC QLQ－C30各项评分均有提高，提示肿瘤患者整体生活质量改善。生存时间上，本研究中患者的生存时间与对照组比较差异有统计学意义，生存时间高于对照组，说明在预后方面有较好的效果。总之，CIK细胞免疫治疗作为辅助治疗有较好的有效性及安全性，为TNBC的治疗提供了一种新的选择。

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