HPLC—RID法测定长柄侧耳发酵产物中甘露醇的含量

邓西贝等

摘 要：目的：建立长柄侧耳发酵物中甘露醇含量的测定方法。方法：采用HPLC-RID法，SUGAR SC1011柱（300mm×8mm），超纯水洗脱，流速0.5mL/min，柱温70℃，示差折光检测器检测。结果：甘露醇进样量在6.26～18.78μg之间与峰面积呈良好的线性关系，回归方程Y=16708X-2601（r=0.9999）；平均加样回收率为97.83%，RSD为0.62%。结论：本方法样品前处理简单，具有较高的专属性、准确性、重现性和可行性，可作为长柄侧耳发酵产物中甘露醇含量质量控制的定量方法。

关键词：长柄侧耳菌丝；甘露醇；HPLC

现代研究表明侧耳属真菌营养丰富，富含多糖、蛋白质、氨基酸、以及各种微量元素[1]。但对侧耳属真菌中甘露醇含量的研究并不多见。采用高效液相色谱法，利用示差折光检测器，测定长柄侧耳发酵产物中甘露醇的含量，为深入研究长柄侧耳发酵产物奠定基础，也为长柄侧耳质量评价提供依据。

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

甘露醇标准品（批号；100533-200301 中国药品生物制品检定所）；水（超纯水）；其他试剂均为分析纯；长柄侧耳发干燥酵液和菌丝（实验室自制）。

1.2 实验仪器

高效液相色谱仪（岛津LC-20AT）；示差折光检测器（RID-10A）。

2 实验方法

2.1 样品的制备

（1）对照品溶液的制备。准确量取甘露醇标准品3mg，置于2ml容量瓶中，加入超纯水使其溶解完全，定容至刻度，即得（1.565mg/mL）。（2）供试品溶液的制备。准确量取干燥长柄侧耳发酵液、菌丝各1g，分别加入50mL超纯水，准确称重，超声提取30min，冷却至室温后再次称重，加超纯水补足减失重量，混匀，以2000r/min离心10min，上清液通过0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱为SUGAR SC1011柱（300mm×8mm，6μm），流动相为超纯水，流速为0.5ml/min，柱温70℃，进样量10μL。色谱详见图1，图2。

3 方法学考察

3.1 线性关系考察

分别精密吸取甘露醇标准品溶液 4、6、8、10、12μL，注入液相色谱仪，测定吸收峰面积，绘制标准曲线。结果见表1。

以甘露醇质量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，计算回归方程为：Y=16708X-2601，r=0.9999，甘露醇在6.26～18.78μg范围内具有良好的线性关系。结果见图3。

3.2 精密度试验

精密吸取甘露醇标准品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，依法测定，结果见下表2。

以峰面积计算其精密度，X=256325.7，RSD为0.22%，表明仪器精密度良好。

3.3 稳定性试验

取长柄侧耳菌丝供试品溶液，分别于0、4、8、16、20、24 h注入液相色谱仪，进样量为10μL，记录峰面积积分值，结果见表3。

以峰面积计算其稳定性，X=为207550.3，RSD为1.20%，表明样品在24h内稳定。

3.4 重复性试验

准确称取同一批长柄侧耳菌丝6份，按“1.2.1.2”供试品制备方法制备，按上述色谱条件分别进样10μL，测定样品中甘露醇含量，结果见表4。

3.5 加样回收率实验

准确称取已知甘露醇含量的长柄侧耳菌丝供试品6份，分别精密加入甘露醇标准品，按供试品方法制备样品，按照含量测定项下操作，分别计算回收率。结果见表5。

本方法甘露醇平均加样回收率为97.83%，RSD值为0.62%，说明此方法稳定可靠，准确性高。

4 样品含量测定

取供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，计算样品中甘露醇的含量，结果显示，长柄侧耳菌丝中甘露醇含量为4.97%，发酵液中不含有甘露醇。此方法稳定可靠，准确性高，操作简单，可考虑作为长柄侧耳质量评价标准中的一项，为长柄侧耳在甘露醇方向的研究奠定基础。

5 结束语

甘露醇是一种常见的利尿剂，经常被用于治疗颅内压升高、眼压升高，还能够预防急性肾衰，并加速体内毒物或药物从肾脏排出，在医学领域具有广阔的应用空间[2]。随着科学技术的进步，对甘露醇作用机理的研究不断深入，传统测定甘露醇的方法有容量法和比色法，这两种方法操作复杂，且容易受到干扰[3]。选择高效液相色谱法测定甘露醇含量，由方法学考察结果可知，此方法操作简便，稳定性高，重现性好，结果准确。可考虑将甘露醇含量作为长柄侧耳质量评价的一项。

参考文献

[1]高明燕，罗霞，等.侧耳属真菌的营养成分及药理作用研究进展[J].安徽农业科学，2010，38（29）：16206-16207.

[2]蔡友华，范文霞，等.超声-微波协同萃取巴西虫草菌丝体中甘露醇的研究[J].江西农业大学学报，2008，30（4）：348-353.

[3]田贞乐，徐春花.HPLC-RID法测定虫草菌丝体中甘露醇[J].食用菌学报，2010，增刊：113-115.

摘 要：目的：建立长柄侧耳发酵物中甘露醇含量的测定方法。方法：采用HPLC-RID法，SUGAR SC1011柱（300mm×8mm），超纯水洗脱，流速0.5mL/min，柱温70℃，示差折光检测器检测。结果：甘露醇进样量在6.26～18.78μg之间与峰面积呈良好的线性关系，回归方程Y=16708X-2601（r=0.9999）；平均加样回收率为97.83%，RSD为0.62%。结论：本方法样品前处理简单，具有较高的专属性、准确性、重现性和可行性，可作为长柄侧耳发酵产物中甘露醇含量质量控制的定量方法。

关键词：长柄侧耳菌丝；甘露醇；HPLC

现代研究表明侧耳属真菌营养丰富，富含多糖、蛋白质、氨基酸、以及各种微量元素[1]。但对侧耳属真菌中甘露醇含量的研究并不多见。采用高效液相色谱法，利用示差折光检测器，测定长柄侧耳发酵产物中甘露醇的含量，为深入研究长柄侧耳发酵产物奠定基础，也为长柄侧耳质量评价提供依据。

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

甘露醇标准品（批号；100533-200301 中国药品生物制品检定所）；水（超纯水）；其他试剂均为分析纯；长柄侧耳发干燥酵液和菌丝（实验室自制）。

1.2 实验仪器

高效液相色谱仪（岛津LC-20AT）；示差折光检测器（RID-10A）。

2 实验方法

2.1 样品的制备

（1）对照品溶液的制备。准确量取甘露醇标准品3mg，置于2ml容量瓶中，加入超纯水使其溶解完全，定容至刻度，即得（1.565mg/mL）。（2）供试品溶液的制备。准确量取干燥长柄侧耳发酵液、菌丝各1g，分别加入50mL超纯水，准确称重，超声提取30min，冷却至室温后再次称重，加超纯水补足减失重量，混匀，以2000r/min离心10min，上清液通过0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱为SUGAR SC1011柱（300mm×8mm，6μm），流动相为超纯水，流速为0.5ml/min，柱温70℃，进样量10μL。色谱详见图1，图2。

3 方法学考察

3.1 线性关系考察

分别精密吸取甘露醇标准品溶液 4、6、8、10、12μL，注入液相色谱仪，测定吸收峰面积，绘制标准曲线。结果见表1。

以甘露醇质量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，计算回归方程为：Y=16708X-2601，r=0.9999，甘露醇在6.26～18.78μg范围内具有良好的线性关系。结果见图3。

3.2 精密度试验

精密吸取甘露醇标准品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，依法测定，结果见下表2。

以峰面积计算其精密度，X=256325.7，RSD为0.22%，表明仪器精密度良好。

3.3 稳定性试验

取长柄侧耳菌丝供试品溶液，分别于0、4、8、16、20、24 h注入液相色谱仪，进样量为10μL，记录峰面积积分值，结果见表3。

以峰面积计算其稳定性，X=为207550.3，RSD为1.20%，表明样品在24h内稳定。

3.4 重复性试验

准确称取同一批长柄侧耳菌丝6份，按“1.2.1.2”供试品制备方法制备，按上述色谱条件分别进样10μL，测定样品中甘露醇含量，结果见表4。

3.5 加样回收率实验

准确称取已知甘露醇含量的长柄侧耳菌丝供试品6份，分别精密加入甘露醇标准品，按供试品方法制备样品，按照含量测定项下操作，分别计算回收率。结果见表5。

本方法甘露醇平均加样回收率为97.83%，RSD值为0.62%，说明此方法稳定可靠，准确性高。

4 样品含量测定

取供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，计算样品中甘露醇的含量，结果显示，长柄侧耳菌丝中甘露醇含量为4.97%，发酵液中不含有甘露醇。此方法稳定可靠，准确性高，操作简单，可考虑作为长柄侧耳质量评价标准中的一项，为长柄侧耳在甘露醇方向的研究奠定基础。

5 结束语

甘露醇是一种常见的利尿剂，经常被用于治疗颅内压升高、眼压升高，还能够预防急性肾衰，并加速体内毒物或药物从肾脏排出，在医学领域具有广阔的应用空间[2]。随着科学技术的进步，对甘露醇作用机理的研究不断深入，传统测定甘露醇的方法有容量法和比色法，这两种方法操作复杂，且容易受到干扰[3]。选择高效液相色谱法测定甘露醇含量，由方法学考察结果可知，此方法操作简便，稳定性高，重现性好，结果准确。可考虑将甘露醇含量作为长柄侧耳质量评价的一项。

参考文献

[1]高明燕，罗霞，等.侧耳属真菌的营养成分及药理作用研究进展[J].安徽农业科学，2010，38（29）：16206-16207.

[2]蔡友华，范文霞，等.超声-微波协同萃取巴西虫草菌丝体中甘露醇的研究[J].江西农业大学学报，2008，30（4）：348-353.

[3]田贞乐，徐春花.HPLC-RID法测定虫草菌丝体中甘露醇[J].食用菌学报，2010，增刊：113-115.

摘 要：目的：建立长柄侧耳发酵物中甘露醇含量的测定方法。方法：采用HPLC-RID法，SUGAR SC1011柱（300mm×8mm），超纯水洗脱，流速0.5mL/min，柱温70℃，示差折光检测器检测。结果：甘露醇进样量在6.26～18.78μg之间与峰面积呈良好的线性关系，回归方程Y=16708X-2601（r=0.9999）；平均加样回收率为97.83%，RSD为0.62%。结论：本方法样品前处理简单，具有较高的专属性、准确性、重现性和可行性，可作为长柄侧耳发酵产物中甘露醇含量质量控制的定量方法。

关键词：长柄侧耳菌丝；甘露醇；HPLC

现代研究表明侧耳属真菌营养丰富，富含多糖、蛋白质、氨基酸、以及各种微量元素[1]。但对侧耳属真菌中甘露醇含量的研究并不多见。采用高效液相色谱法，利用示差折光检测器，测定长柄侧耳发酵产物中甘露醇的含量，为深入研究长柄侧耳发酵产物奠定基础，也为长柄侧耳质量评价提供依据。

1 实验材料与仪器

1.1 实验材料

甘露醇标准品（批号；100533-200301 中国药品生物制品检定所）；水（超纯水）；其他试剂均为分析纯；长柄侧耳发干燥酵液和菌丝（实验室自制）。

1.2 实验仪器

高效液相色谱仪（岛津LC-20AT）；示差折光检测器（RID-10A）。

2 实验方法

2.1 样品的制备

（1）对照品溶液的制备。准确量取甘露醇标准品3mg，置于2ml容量瓶中，加入超纯水使其溶解完全，定容至刻度，即得（1.565mg/mL）。（2）供试品溶液的制备。准确量取干燥长柄侧耳发酵液、菌丝各1g，分别加入50mL超纯水，准确称重，超声提取30min，冷却至室温后再次称重，加超纯水补足减失重量，混匀，以2000r/min离心10min，上清液通过0.45μm滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱为SUGAR SC1011柱（300mm×8mm，6μm），流动相为超纯水，流速为0.5ml/min，柱温70℃，进样量10μL。色谱详见图1，图2。

3 方法学考察

3.1 线性关系考察

分别精密吸取甘露醇标准品溶液 4、6、8、10、12μL，注入液相色谱仪，测定吸收峰面积，绘制标准曲线。结果见表1。

以甘露醇质量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，计算回归方程为：Y=16708X-2601，r=0.9999，甘露醇在6.26～18.78μg范围内具有良好的线性关系。结果见图3。

3.2 精密度试验

精密吸取甘露醇标准品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，依法测定，结果见下表2。

以峰面积计算其精密度，X=256325.7，RSD为0.22%，表明仪器精密度良好。

3.3 稳定性试验

取长柄侧耳菌丝供试品溶液，分别于0、4、8、16、20、24 h注入液相色谱仪，进样量为10μL，记录峰面积积分值，结果见表3。

以峰面积计算其稳定性，X=为207550.3，RSD为1.20%，表明样品在24h内稳定。

3.4 重复性试验

准确称取同一批长柄侧耳菌丝6份，按“1.2.1.2”供试品制备方法制备，按上述色谱条件分别进样10μL，测定样品中甘露醇含量，结果见表4。

3.5 加样回收率实验

准确称取已知甘露醇含量的长柄侧耳菌丝供试品6份，分别精密加入甘露醇标准品，按供试品方法制备样品，按照含量测定项下操作，分别计算回收率。结果见表5。

本方法甘露醇平均加样回收率为97.83%，RSD值为0.62%，说明此方法稳定可靠，准确性高。

4 样品含量测定

取供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，计算样品中甘露醇的含量，结果显示，长柄侧耳菌丝中甘露醇含量为4.97%，发酵液中不含有甘露醇。此方法稳定可靠，准确性高，操作简单，可考虑作为长柄侧耳质量评价标准中的一项，为长柄侧耳在甘露醇方向的研究奠定基础。

5 结束语

甘露醇是一种常见的利尿剂，经常被用于治疗颅内压升高、眼压升高，还能够预防急性肾衰，并加速体内毒物或药物从肾脏排出，在医学领域具有广阔的应用空间[2]。随着科学技术的进步，对甘露醇作用机理的研究不断深入，传统测定甘露醇的方法有容量法和比色法，这两种方法操作复杂，且容易受到干扰[3]。选择高效液相色谱法测定甘露醇含量，由方法学考察结果可知，此方法操作简便，稳定性高，重现性好，结果准确。可考虑将甘露醇含量作为长柄侧耳质量评价的一项。

参考文献

[1]高明燕，罗霞，等.侧耳属真菌的营养成分及药理作用研究进展[J].安徽农业科学，2010，38（29）：16206-16207.

[2]蔡友华，范文霞，等.超声-微波协同萃取巴西虫草菌丝体中甘露醇的研究[J].江西农业大学学报，2008，30（4）：348-353.

[3]田贞乐，徐春花.HPLC-RID法测定虫草菌丝体中甘露醇[J].食用菌学报，2010，增刊：113-115.