溶剂萃取银杏叶总黄酮的探讨

李含薇，李咏梅，陈 曦，黄相道，李 东，郭 晶

(北华大学口腔医学院，吉林 吉林 132013)

·论 著·

溶剂萃取银杏叶总黄酮的探讨

李含薇，李咏梅，陈 曦，黄相道，李 东，郭 晶

(北华大学口腔医学院，吉林 吉林 132013)

目的 探讨溶剂浓度对萃取银杏叶总黄酮含量的影响因素。方法 对溶剂乙醇不同浓度在相同抽提时间下，萃取总黄酮含量进行对比。 结果 随着乙醇浓度的降低，银杏叶提取物量、提取率、总黄酮含量也逐渐增高。结论 溶剂萃取银杏叶获得总黄酮含量，在同样时间条件下，浸提溶剂浓度选择20%的乙醇最为适宜。

溶剂；萃取；总黄酮

银杏叶在我国特有，其药用价值自古至今一直被重视，银杏叶提取物(EGb)含有多种活性成分，包括银杏黄酮、银杏内酯、银杏酸等，EGb广泛应用于治疗心脑血管等疾病。其中银杏叶总黄酮(total flavone of ginkgo,TFG)因与抑制前列腺素E2和一氧化氮合成及脂质过氧化有关，具有一定的抗炎作用[1]，对临床治疗炎症性疾病具有很好的应用前景。提取TFG的方法虽然比较多，但对TFG含量测定与萃取液的浓度的关系报道很少。本研究针对溶剂乙醇不同浓度和抽提时间对TFG萃取含量的影响做了研究，为进一步获取较高TFG含量奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料和设备

银杏叶(2012年5月采集于吉林市林业局院内新鲜银杏叶)。

试剂：80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇、20%乙醇。

仪器：索氏抽提器；HH恒温水浴锅(江苏金坛中大仪器厂)；721分光光度计(上海第三分析仪器厂)；ZFQ-5A真空干燥箱(天津玻璃仪器厂)。

1.2 银杏叶提取工艺

新鲜银杏叶→洗净、晾干→粉碎→用不同浓度乙醇浸提→过滤→蒸馏浓缩→EGb浸膏→真空干燥→回收EGb干粉→分光光度计→检测TFG含量。

准确称取已粉碎的干银杏叶80 g，等量分称20 g分别置于4个索氏抽提器滤纸筒内，滤纸筒标号为1号、2号、3号和4号，分别用80%、60%、40%、20%乙醇等量充分溶解，均在80 ℃水浴箱抽提，时间48 h，得墨绿色浸膏，用中性滤纸(Φ12.5 cm)过滤，滤速为中速，型号为102，得棕褐色溶液，分别置于60 ℃恒温水浴箱中干燥数天，再置于真空干燥箱，得棕褐色干粉，称重，1号384.75 mg,2号835.27 mg,31248.23 mg,4号2321.1 mg。

计算银杏叶提取率[2]:称取已粉碎的干银杏叶m(g)，提取后获得的EGb净重m1(g),银杏叶提取率= m1(g)/m(g)×100%

1.3 对照溶液的制备

取芦丁对照品20 mg,置于10 mL量筒中，加甲醇适量，置水浴箱上微热充分溶解，自然冷却，加甲醇到刻度，摇匀，精密量取10 mL，置于100 mL量筒中，加水到刻度，即得芦丁(0.2 mg/mL)。

分别取亚硝酸钠2.5 g、硝酸铝5 g、NaOH 2 g分别置于50 mL量筒中，加蒸馏水至刻度，分别配制成5%、10%、4%的溶液。

1.4 标准曲线的制作

精密量取对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分别置于25 mL的量筒中，各加水至6.0 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6min，加4%NaOH溶液10 mL，再加水到刻度，摇匀，放置15 min，以相应的试剂为空白对照，使用721分光光度计，在500 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制出标准曲线(如图1)[3]。

图 1 黄酮标准曲线图

1.5 TFG含量测定

根据绘制曲线图，TFG一般在24～26 mg之间，确定为25 mL，根据芦丁20 mg计算，其最低和最高值分别是0.032 mg/mL、0.192 mg/mL。分别称取4次提取的银杏叶干粉末各10 mg，分别置于10 mL量筒中，在量筒上标清样品1、样品2、样品3、样品4的字样，用甲醇溶解，增容到10 mL，分别置于2个25 mL的量瓶中(标注字样同前)，各取1.2 mL，加蒸馏水增容到4.8 mL；对照组为一空白量筒，加蒸馏水6 mL。取亚硝酸钠、硝酸铝、NaOH的浓度和量及放置时间同上。测定吸光度，从标准曲线上读出数值，并计算出TFG的含量。

2 结 果

取等量20 g干银杏叶，分别进行抽提，测定银杏叶提取结果;目标样品1 mg/mL甲醇溶解，取6 mL加样,测量总黄酮含量,结果见表1。

表 1 银杏叶提取率及总黄酮含量

3 讨 论

银杏叶的提取工艺种类繁多，主要有溶剂提取法、超临界流体萃取法、超声波辅助提取法和微波法。其中超临界流体萃取法由于设备较大，操作困难等问题难以用于大规模工业化生产[4]。本实验采用有机溶剂乙醇提取法，抽提时间为48 h，从表1可以看出在同样提取时间条件下，用高浓度(80%)乙醇溶解，得到的银杏叶提取物量少(384.75 mg)，提取率低(1.92%),TFG含量较低(41.63 mg)。随着乙醇浓度的降低，银杏叶提取物量、提取率、TFG也逐渐增高。表中显示乙醇浓度较低(20%)溶解，得到的银杏叶提取物多(2321.10 mg)，提取率高(11.60%),TFG含量较高(83.33 mg)，分析认为用低浓度的乙醇抽提，可以使被氧化的叶绿素形成的黑绿色黏稠物质充分溶解，便于滤出。用低浓度的乙醇比高浓度的乙醇进行抽提获得总黄酮含量较高，用20%的乙醇作为提取剂比较适宜。此方法工艺流程简单，设备价格便宜，便于推广，缺点是溶剂难回收，不足之处有待于进一步研究改进。

[1] 张 黎，陈志武，王 瑜，等.银杏叶总黄酮抗炎作用及机制的探讨[J].安徽医科大学学报，2001,36(5)：350-352.

[2] 盛建国，黄东余.银杏叶提取工艺及其抑菌性的探讨[J].粮油食品,2005,13(5):16-18.

[3] 刘峙嵘，俞自由，方裕勋，等.微波萃取银杏叶黄酮类化合物[J].东华理工学院学报，2005,28(2)：151-154.

[4] 李 焰,杨小燕,林跃鑫,等.银杏叶有效成分提取与抑菌效果研究[J].中国畜牧杂志，2006,42(15)：54-56.

Research about flavonoids of ginkgo biloba leaves through solventia extraction

LI Han-wei,LI Yong-mei,CHEN Xi,HUANG Xiang-dao,LI Dong,GUO Jing

(School of Stmatology,Beihua University,Jilin City，Jilin Province,132013，China)

Objective This paper is about the influencing factors of the flavonoid content of ginkgo biloba leaves from solventia extraction. Methods By comparing flavonoid extraction contents from ethanol solventia with different concentration at the same extracting time. Results With the decrease of the ethanol concentration,amount of ginkgo biloba extract,total content of flavonoids extraction yielded gradually increased. Conclusion For flavonoid content of Ginkgo biloba through solvent extraction under the condition of the same time,choice of 20% ethanol concentration is most appropriate.

solvent;extraction;flavonoids

1673-2995(2014)01-0012-03

吉林省教育厅“十二五”科研资助课题(2012163).

李含薇(1964-)，女(汉族)，副教授，硕士生导师.

R285.5

A

2013-10-11)