黄志勇, 黄伟煌
(1.福建省南平出入境检验检疫局,福建南平353000;2.中山比克生物科技有限公司,广东中山528427)
哺乳仔猪腹泻是当前众多猪场的棘手问题,是制约仔猪生长性能的一个重要制约瓶颈,因此对应用中药制剂来降低仔猪腹泻的研究意义重大。中兽医辨证施治从整体观念出发,以平衡阴阳、协调脏腑功能、健脾消食为治则,采用的方剂多以提高免疫、增强体质为主,对降低仔猪的腹泻率有一定的作用。中药对促进仔猪生长发育的配方主要原则是补脾益气、消食和胃[1],以此降低腹泻率。本研究采用复方中药制剂作为母猪的饲料添加剂,防治哺乳仔猪腹泻,并通过对仔猪相关血液生化指标的分析进行效果确定,以期为中药制剂替代抗生素,生产无药物残留、健康生态的动物食品开辟一条新的用药途径。
1.1 试验动物 长大二元母猪所产的9窝哺乳仔猪,选择的母猪按照年龄体重胎次相似的原则进行挑选,采取血清所挑选的仔猪也按照体况相似的原则进行。
1.2 试验药品与试剂 复方中药添加剂:主要原料为黄芪、党参、茯苓、苍术、龙胆草、鱼腥草、半枝莲、神曲、山楂、柴胡、甘草等[2]。购于福州回春医药公司,按一定的比例配合,烘干,300目粉碎备用。试验试剂:丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA) 及超氧化物歧化酶(MDA) 试剂盒,购置南京建成生物试剂盒有限公司;猪瘟抗体检测试剂盒,IDEXX公司产品。
主要仪器:安科Anke台式离心机,上海安亭科学仪器厂;电子天平,上海精密仪器仪表公司;恒温水浴锅,上海羌强仪器设备有限公司;UV-3200紫外可见分光光度计,上海精密仪器仪表公司;移液枪,Eppendorf;酶标仪及洗板机,美国宝特。
1.3 试验方法
1.3.1 试验分组 选择胎次年龄相同的长大母猪所产的9窝仔猪供试验,试验分为中药制剂试验组、抗生素对照组和空白对照组,各组采取血清20份,共计60份。
1.3.2 血液指标测定 于断奶前(未进行猪瘟免疫,22日龄)采集仔猪血清,每头母猪对应仔猪采集血液,每组采集20份血样,共计60份。血液采集完毕后,室温放置2 h,3000r/min离心10min,得高质量血清,4℃保存,按ALT、AST、MDA、SOD试剂盒说明书进行相关指标测定;猪瘟抗体的按IDEXX公司猪瘟抗体检测试剂盒说明书进行。
表1 腹泻评分标准
表2 中药制剂对母猪产仔数及仔猪增重的影响
表3 中药制剂对哺乳仔猪的腹泻率和腹泻指数的影响
表4 中药制剂对仔猪血清中ALT 和AST 活性的影响
表5 中药制剂对仔猪血清中MDA、 SOD 含量的影响
表6 中药制剂对仔猪猪瘟抗体的影响
1.3.3 日常操作 试验组1组为中草药饲料添加剂与营养性饲料添加剂复合制成的4%母猪预混料,中草药饲料添加剂按母猪饲料的0.5%添加。试验组2组为西药抗菌素杆菌肽锌与营养性饲料添加剂复合制成的4%母猪预混料。试验组3组为营养性饲料添加剂复合制成的4%母猪预混料,不含任何抗菌素和其他药物[3]。
免疫程序按猪场正常免疫程序接种疫苗(7日龄注射肺炎支原体兔化弱毒冻干疫苗;14日龄蓝耳病弱毒疫苗、25日龄接种猪瘟细胞苗),7日龄开始补料,试验期间,自由采食,自由饮水。记录好每组每天饲料的饲喂量,按公式(1)和(2)进行仔猪腹泻情况统计。
(1)腹泻率=∑(腹泻头数×腹泻天数) ÷(仔猪头数×天数) ×100%
(2)腹泻指数=粪便评分之和÷试验仔猪头数
1.3.4 数据处理与分析 对数据结果采用SPSS13.0单因子方差(One-Way ANOVA)分析统计软件包和Excell软件统计分析。
2.1 复方中药制剂对仔猪增重的影响 对仔猪增重情况进行统计,并根据公式:平均日增重=(仔猪断奶窝重-仔猪出生窝重)÷试验天数,来计算仔猪平均日增重,结果详见表2。从表中可知,仔猪平均日增重中药制剂组、抗生素组与空白对照组差异显著(P≤0.05);中药制剂组与抗生素组差异不显著(P>0.05)。
2.2 中药制剂对仔猪腹泻情况的影响 对仔猪的腹泻情况进行统计,结果见表3。从表3可知,中药制剂添加组与抗生素组的腹泻率和腹泻指数低于对照组且差异显著(P≤0.05);中药制剂组与抗生素组间差异不显著,说明中药制剂对降低哺乳仔猪的腹泻情况有一定的作用,与使用抗生素作用相当。
2.3 中药制剂对仔猪血液生化指标的影响
2.3.1 中药制剂对仔猪血清中ALT和AST活性的影响按试剂盒说明书对仔猪血清进行ALT和AST活性的测定,结果见表4。从表中可知,中药制剂组与抗生素组的ALT和AST活性均低于对照组,且差异显著(P<0.05);其中抗生素组AST活性与对照组差异极显著(P<0.01),但中药制剂组与抗生素组间差异不显著(P>0.05)。
2.3.2 中药制剂对抗氧化指标MDA、SOD的影响 从表5可知,中药制剂组与抗生素组的MDA活性均高于对照组,且差异显著(P<0.05);中药制剂组SOD活性均高于对照组,且差异极显著(P<0.05),抗生素组SOD活性与对照组差异显著(P<0.05);但中药制剂组与抗生素组间差异不显著(P>0.05)。
2.3.3 中药制剂对仔猪猪瘟抗体的影响 采用IDEXX猪瘟抗体试剂盒对仔猪血清猪瘟抗体进行检测,按照试剂盒说明,把阻断率值≥40%判定为阳性,<40判定为阴性,结果详见表6。从表中可知,中药制剂组的阳性率最高,其阻断率与空白对照组差异显著(P<0.05);从变异系数(CV) 来看,中药制剂组的CV值最小,即变幅较小,空白对照组CV值最大,即变幅较大,说明中药制剂组的哺乳仔猪获得的母源抗体水平较充足且整齐度较好,对猪群生产的稳定有一定的作用。
3.1 中草药饲料添加剂防治仔猪腹泻的作用原理 本试验中采用的中草药饲料添加剂主要作为免疫增强剂,目的在于筛选出能增强免疫作用的中草药,兼有助消化和调味作用。方中采用的黄芪是最常用的中草药免疫增强剂、党参补脾益气,苍术燥湿健脾,与黄芪、党参共显健补脾胃、保护胃肠道功能的作用;龙胆草、鱼腥草、半枝莲是常用的抗菌增强免疫中草药,药理研究证明,半枝莲对金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌等多种细菌和病毒都有抑制作用[4];鱼腥草除了对京科68-1株病毒有抑制作用以外,还能延缓埃可11株病毒引起的细胞病变,对多种致病菌都有抑制和杀灭作用,甚至在1:40000的浓度时仍有抑菌作用,鱼腥草素能提高血清备解素的水平,而血清备解素是一种非特异性免疫因素,是存在于人和动物血清内的一种β 球蛋白,它在补体和镁离子的参与下,能裂解含有多糖体的革兰氏阴性杆菌,也能使某些病毒灭活[5]。所以采用鱼腥草和半枝莲在生态猪养殖中能起免疫杀菌和抗病毒作用。柴胡除了有抗炎、退热和镇静作用外,还具有很强的抗菌、抗病毒作用,实验证明,柴胡对溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、结核杆菌和钩端螺旋体有较强的抑制作用,并且对流感病毒、肝炎病毒等都有很强的抑制作用。除此之外,柴胡还有明显的舒肝利胆降血脂作用。茯苓和山楂是常用的健脾消食药,也是常用的免疫降血脂中草药,药理实验证明,茯苓还有保肝、促进造血功能和抗菌作用;山楂能健胃消食、活血散瘀、降血压和降血脂,并且还有调味作用。而且从猪的生理生化检验指标可见,其结果与中草药饲料添加剂的作用机理相符合[6]。中药制剂添加组与抗生素组的腹泻率和腹泻指数低于对照组且差异显著(P≤0.05);中药制剂组与抗生素组间差异不显著,说明中药制剂对降低哺乳仔猪的腹泻情况有一定的作用,与使用抗生素作用相当。
3.2 中药制剂对仔猪血液生化指标的影响 丙二醛(MDA) 是机体内氧自由基代谢中产生的脂质过氧化物,MDA的含量与机体抗氧化性能密切相关,是衡量机体脂质氧化程度的一个重要指标[7];超氧化歧化酶(SOD) 是机体内重要的抗氧化酶,作为活性氧清除剂参与清除体内自由基,在防止机体衰老和生物分子损伤等方面具有重要的作用[8];在正常情况下,血清中ALT和AST活性值较小,当动物机体发病或受损伤的组织范围较大,肝脏损伤、病变,大量ALT和AST渗入血液,使得血液中ALT和AST活性升高[9]。本研究对仔猪血清相关指标测定,得出中药制剂组与抗生素组的ALT和AST活性均低于对照组,与抗生素组间差异不显著;中药制剂组的MDA、SOD活性均高于对照组;与抗生素组间差异不显著,说明中药制剂在改善仔猪的血液指标ALT、AST和抗氧化指标MDA、SOD均有一定的效果,而按照中草药的药理作用,黄芪本身就是一种双向调节剂,。
3.3 中药制剂对仔猪猪瘟抗体的影响 哺乳仔猪猪瘟抗体水平不合格的主要由以下原因造成的。第一,母源抗体的不足:王波[63]等对仔猪猪瘟抗体消长规律进行研究,研究发现仔猪的猪瘟抗体平均效价在1-7日龄基本上是高于母猪的抗体效价的,说明仔猪在1日龄吮乳后对于母源抗体的吸收效率非常高;在7日龄之后,仔猪体内的抗体却开始逐渐下降,说明此时仔猪已经不能再从母乳中吸收母源抗体进入血液;在14-20日龄,虽然仔猪仍然吮食母乳,但体内猪瘟抗体效价下降最为明显。第二,传染病是引起猪免疫抑制的主要原因,传染病的发生可使猪对其他病原的易感性增强,甚至有些病毒直接侵袭猪的淋巴器官和免疫细胞,造成猪瘟抗体不合格。第三,种公猪精液的带毒与母猪的带毒,通过水平途径或垂直途径传播给仔猪,导致仔猪带毒,从而使仔猪猪瘟抗体水平不合格。本研究通过对未进行免疫的哺乳仔猪(22日龄) 猪瘟抗体进行检测,发现中药制剂组的猪瘟抗体水平合格率最高,变异系数最小,推测可能是由于中药制剂组母猪的泌乳力、母源抗体水平较高;或是因为对哺乳仔猪采食了中药制剂组,激活免疫细胞,增强了仔猪的免疫功能;或是共同作用导致的。而中草药黄芪、鱼腥草、半枝莲、党参、柴胡、甘草本身就是很好的免疫增强剂,这几年来在动物免疫过程或疫苗应用过程中充当了很重要的免疫佐剂的作用[10]。
本研究结果表明复方中药制剂对降低哺乳仔猪的腹泻率有一定的效果;同时对血清相关指标测定,得出中药制剂可以不同程度改善哺乳的血清AST、ALT指标及其抗氧化指标SOD、MDA指标,并且能够提高猪瘟抗体合格率和整齐度,为中药制剂逐步替代抗生素提供一条新的途径。
[1]刘仲杰,许剑琴.中兽医学[M].北京:中国农业出版社,2011:35-280.
[2]金岭梅,江立方.抗热应激中草药饲料添加剂对猪血液生理常数的影响[J].家畜生态,1999,(1):10-12.
[3]陈奇.中草药药理研究方法学.[M].北京.人民卫生出版社.1993.315-322.
[4]孙健,吴国娟.抗菌中药的作用机理研究进展[J].中国兽医杂志,2007,43(2):42-43.
[5]李晶.中草药免疫调节作用机制的研究进展[J].长治医学院学报,1996(3):290-291.
[6]付秀花,王恬,顾宏伟.中草药的免疫增强作用[J].畜牧与兽医,2002,34(8):41-42.
[7]李兴国,刘兴金,魏恒,等.中药免疫增效剂的研究应用[J].2010(3):15-16.
[8]刘丽宁.传统中药临床用药优势之一多靶点探讨[J].时珍国医国药,2010,21(3):745-746.
[9]何士敏,方平,郭利佳.鱼腥草抗氧化成份的研究[J].西南农业学报,2009,22(3):625-631.
[10]何正义,李福宝,吴翠娟,等.中药复方制剂对生长肥育猪生长性能及血清免疫球蛋白的影响[J].养猪,2008(5):13-14.