点地梅中总黄酮及总三萜含量的测定

摘要：分别以芦丁及齐墩果酸为对照品，用超声辅助提取、分光光度法测定了点地梅（Androsace umbellata）总黄酮及总三萜含量。结果表明，点地梅全草总黄酮及总三萜的相对含量分别为6.863%和8.832%， RSD分别为1.47%和1.02%；卢丁对照品在0.013 8~0.220 0 mg/mL范围呈良好线性关系，回归方程为y=10.27x+0.013 8，R2为0.999 9；齐墩果酸对照品在0~100 mg/mL范围内呈良好线性关系，回归方程为y=0.011 3x-0.017 7，R2为0.999 1。该法操作简单、准确，相关结果可为点地梅的开发及利用提供参考依据。

关键词：点地梅（Androsace umbellata）；总黄酮；总三萜；分光光度法

中图分类号：TS201文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０14）08－1902-03

Determination of Total Flavonoids and Triterpenoid in Androsace umbellata

HE Ke-qun

（Chemistry and Environmental Science Department of Guizhou Minzu University， Guizhou 550025， Guiyang， China）

Abstract: The total flavonoids and total triterpenoid from Androsace umbellata were determined by spectrophotometry based on the standard curves of rutin and oleanolic acid. The results showed the percentage of total flavonoids and total triterpenoid in Androsace umbellata were 6.863% （RSD=1.47%） and 8.832% （RSD=1.02%）， respectively. There was a good linearity （R2= 0.999 9） in the range of 0.013 8~0.220 0 mg/mL for rutin with the regression equation of y=10.27x+0.013 8. When the similar linearity of oleanolic acid （R2=0.999 1） was in the range of 0~100 mg/mL （R2=0.999 1）， the regression equation was y=0.011 3x-0.017 7. This method is simple and reliable for detecting total flavonoids and total triterpenoid in Androsace umbellate. It will provides a reference for the exploitation and utilization of the Androsace umbellata.

Key words: Androsace umbellata; total flavonoids;total triterpenoid; spectrometry

点地梅（Androsace umbellata）是报春花科点地梅属草本植物，又名天星草、顶珠草、佛顶珠、地胡椒、铜钱草、白花草、喉咙草、百花珍珠草等，分布于我国东北、华北及秦岭以南各省区［1，2］。点地梅以全草入药，具有清热解毒，消肿止痛功效；主要用于扁桃腺炎、咽喉炎、口腔炎、牙痛、急性结膜炎、跌打损伤等的治疗［1，2］。根据文献报道，点地梅含有黄酮、三萜皂苷、酚苷及挥发油等物质［2-7］。本试验分析了点地梅全草总黄酮及总三萜含量，相关结果将为其开发和利用提供参考。

1材料与方法

1.1材料与试剂

点地梅全草，采自云南省云龙县，标本保存于贵州民族大学化学与环境科学学院药学教研室。

氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、无水乙醇、冰醋酸、香草醛、高氯酸均为分析纯试剂，芦丁（≥98%）及齐墩果酸（≥98%）对照品均购自贵州迪大科技有限责任公司。

1.2仪器

756PC型紫外-可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），METTLERAE240型电子分析天平（上海天平仪器厂），BGZ-30型电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），SG3200HE型超声清洗仪（上海冠特超声仪器有限公司），数显恒温水浴锅（常州博远实验分析仪器有限公司）

1.3方法

1.3.1点地梅供试液的提取［8］将自然晾干的点地梅于（60±1）℃烘干5 h，精确称取干燥、粉碎（过40目筛）的点地梅粉末2.000 g，按1∶20的固液比（m/V）用无水乙醇，超声提取2次，每次提取60 min，超声频率40 kHz，功率150 W，提取结束后，合并提取液，过滤冷却，用无水乙醇定容至100 mL，摇匀备用。

1.3.2总黄酮的测定及重复性试验总黄酮的测定及重复性试验参照文献［9］。

1.3.3总三萜标准溶液的制备及测定波长的选择称取65 ℃干燥至恒重的齐墩果酸20.00 mg，溶解后以无水乙醇定容至100 mL摇匀，配制200 mg/mL溶液；吸取齐墩果酸标准溶液和点地梅提取液各1.00 mL，分别置于2支10 mL比色管中，于85 ℃挥干溶剂，冷却，加入5%（m/V）香草醛-冰醋酸0.500 mL，再分别加入高氯酸1.00 mL，摇匀，70 ℃水浴20 min，取出，在冰水浴中冷却，用冰醋酸稀释至刻度，摇匀，静置5 min。以试剂空白建立基线，在400~700nm扫描波长，确定最大吸收波长［10-13］。

1.3.4齐墩果酸标准曲线的绘制吸取浓度200 mg/mL的齐墩果酸标准溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL分别置于6支10 mL比色管中，以下操作同1.3.3“于85 ℃挥干溶剂”，以试剂空白为参比，于540 nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，齐墩果酸质量浓度为横坐标，绘制标准曲线［10-13］。

1.3.5样品测定量取点地梅乙醇提取液1.00 mL于10 mL比色管中，以下操作同“1.3.3”，样品液于540 nm波长下测得点地梅提取液的吸光度，代入回归方程得点地梅的总三萜类化合物浓度，并计算干燥药材中总三萜含量［10-13］。

1.3.6重复性试验称取点地梅样品5份，按含量测定方法测定，计算平均含量。

1.3.7加标回收试验量取点地梅提取液1.00 mL 3份，再分别精确加入齐墩果酸标准溶液（200 mg/mL）1.00 mL，测定后计算加标回收率。

2结果与分析

2.1总黄酮的测定结果

以吸光度为纵坐标，芦丁质量浓度为横坐标，绘制标准曲线（图1），得方程y=10.27x+ 0.013 8，R2=0.999 9，结果表明，芦丁在0.013 8~0.220 0 mg/mL范围内吸光度与质量浓度呈良好线性关系。

在加显色剂后，芦丁标准溶液和点地梅样品溶液显色后在510 nm处均有较平缓的吸收峰，适于定量测定，故将测定波长选定为510 nm。5次测定的点地梅样品中总黄酮含量为6.863%，RSD为1.47%，精密度高。

点地梅中总黄酮加标回收试验结果见表1。由表1可知，总黄酮测定的平均加标回收率为95.1%，RSD为1.39%，表明该方法适用于点地梅样品中总黄酮的测定。

2.2总三萜的测定结果

齐墩果酸及点地梅提取液显色后在540 nm均有最大吸收，故以540 nm作为总三萜的测定波长。以吸光度为纵坐标，齐墩果酸质量浓度为横坐标，绘制标准曲线（图2），得方程y=0.011 3x-0.017 7，R2=0.999 1，齐墩果酸浓度在0~100 mg/mL范围内吸光度与质量浓度线性关系良好。

5次测定的点地梅样品中总三萜的平均含量为8.832%，RSD为1.02%，精密度较高。由表2可知，总三萜的平均加标回收率为92.6%，RSD为7.2%，表明该方法适用于点地梅样品中总三萜含量的测定。

３小结

点地梅是我国西南地区少数民族的常用草药，但迄今为止，其资源还未充分开发和利用。三萜酸类及黄酮类物质具有广泛的生理活性，如抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、降低胆固醇、降血糖［１４，１５］、强心、降血脂、抗氧化、提高免疫力等［１６］，分析药用植物的总三萜酸及总黄酮含量将有助于深入开发相关药用资源。本试验分析了点地梅的总黄酮及总三萜含量，结果表明点地梅干燥全草总黄酮及总三萜含量分别为６．８６３％和８．８３２％，为其开发及利用提供科学参考。

参考文献：

［１］ 云南省卫生厅．云南中草药［Ｍ］．昆明：云南人民出版社，１９７１．

［２］ 左经会．六盘水药用植物［Ｍ］．北京：科学出版社，２０１３．

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［１１］ 袁媛，杨毅，开桂青，等．灵芝三萜提取工艺研究［Ｊ］．安徽化工，２００７，３３（４）：２７－２９．

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［１３］ 易中宏，郑一敏，胥秀英，等．分光光度法测定茯苓中总三萜类成分的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００５，１６（４）：８４７－８４８．

［１４］ 姚新生，吴立军．天然药物化学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００３.３０６．

［１５］ 谭世强，谢敬宇，郭帅，等．三萜类物质的生理活性研究进展［Ｊ］．２０１２，２８（３６）：２３－２７．

［１６］ 韩公羽，沈企华，韩绍雯．植物药黄酮成分与生理生化活性［Ｍ］．北京：中国书籍出版社，２０１０．

在加显色剂后，芦丁标准溶液和点地梅样品溶液显色后在510 nm处均有较平缓的吸收峰，适于定量测定，故将测定波长选定为510 nm。5次测定的点地梅样品中总黄酮含量为6.863%，RSD为1.47%，精密度高。

点地梅中总黄酮加标回收试验结果见表1。由表1可知，总黄酮测定的平均加标回收率为95.1%，RSD为1.39%，表明该方法适用于点地梅样品中总黄酮的测定。

2.2总三萜的测定结果

齐墩果酸及点地梅提取液显色后在540 nm均有最大吸收，故以540 nm作为总三萜的测定波长。以吸光度为纵坐标，齐墩果酸质量浓度为横坐标，绘制标准曲线（图2），得方程y=0.011 3x-0.017 7，R2=0.999 1，齐墩果酸浓度在0~100 mg/mL范围内吸光度与质量浓度线性关系良好。

5次测定的点地梅样品中总三萜的平均含量为8.832%，RSD为1.02%，精密度较高。由表2可知，总三萜的平均加标回收率为92.6%，RSD为7.2%，表明该方法适用于点地梅样品中总三萜含量的测定。

３小结

点地梅是我国西南地区少数民族的常用草药，但迄今为止，其资源还未充分开发和利用。三萜酸类及黄酮类物质具有广泛的生理活性，如抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、降低胆固醇、降血糖［１４，１５］、强心、降血脂、抗氧化、提高免疫力等［１６］，分析药用植物的总三萜酸及总黄酮含量将有助于深入开发相关药用资源。本试验分析了点地梅的总黄酮及总三萜含量，结果表明点地梅干燥全草总黄酮及总三萜含量分别为６．８６３％和８．８３２％，为其开发及利用提供科学参考。

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在加显色剂后，芦丁标准溶液和点地梅样品溶液显色后在510 nm处均有较平缓的吸收峰，适于定量测定，故将测定波长选定为510 nm。5次测定的点地梅样品中总黄酮含量为6.863%，RSD为1.47%，精密度高。

点地梅中总黄酮加标回收试验结果见表1。由表1可知，总黄酮测定的平均加标回收率为95.1%，RSD为1.39%，表明该方法适用于点地梅样品中总黄酮的测定。

2.2总三萜的测定结果

齐墩果酸及点地梅提取液显色后在540 nm均有最大吸收，故以540 nm作为总三萜的测定波长。以吸光度为纵坐标，齐墩果酸质量浓度为横坐标，绘制标准曲线（图2），得方程y=0.011 3x-0.017 7，R2=0.999 1，齐墩果酸浓度在0~100 mg/mL范围内吸光度与质量浓度线性关系良好。

5次测定的点地梅样品中总三萜的平均含量为8.832%，RSD为1.02%，精密度较高。由表2可知，总三萜的平均加标回收率为92.6%，RSD为7.2%，表明该方法适用于点地梅样品中总三萜含量的测定。

３小结

点地梅是我国西南地区少数民族的常用草药，但迄今为止，其资源还未充分开发和利用。三萜酸类及黄酮类物质具有广泛的生理活性，如抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、降低胆固醇、降血糖［１４，１５］、强心、降血脂、抗氧化、提高免疫力等［１６］，分析药用植物的总三萜酸及总黄酮含量将有助于深入开发相关药用资源。本试验分析了点地梅的总黄酮及总三萜含量，结果表明点地梅干燥全草总黄酮及总三萜含量分别为６．８６３％和８．８３２％，为其开发及利用提供科学参考。

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［１３］ 易中宏，郑一敏，胥秀英，等．分光光度法测定茯苓中总三萜类成分的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００５，１６（４）：８４７－８４８．

［１４］ 姚新生，吴立军．天然药物化学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００３.３０６．

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［１６］ 韩公羽，沈企华，韩绍雯．植物药黄酮成分与生理生化活性［Ｍ］．北京：中国书籍出版社，２０１０．