蒙药复方沙棘颗粒剂对熏烟致小鼠慢性气管-支气管炎的影响

萨日盖 红 梅 那生桑

(内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110)

复方沙棘颗粒剂是治疗气管炎、慢性支气管炎的蒙医传统验方，经剂型改革制成的新剂型。本实验采用香烟烟雾使小鼠被动吸入法建立小鼠慢性气管-支气管炎模型，实验观察复方沙棘颗粒剂对模型的影响，以了解复方沙棘颗粒剂治疗气管炎、慢性支气管炎症的作用，为评价其疗效提供实验依据。

1 仪器与材料

动物:昆明系小白鼠，清洁级，由内蒙古大学实验动物中心提供，自由摄水摄食。饲养环境20～25℃，保持安静清洁，通风通气。笼具每日清洗1次，保持干爽。

仪器:MMME cocell 111R型干燥箱(德国产);RM2135型Leice石蜡切片机(德国产);HI1210型摊片机(德国产);HI1220型烘片机(德国产);EG1150H型分体式组织包埋机(德国产);DM2000型Leice荧光显微镜;TD24-WS低速台式离心机等。

试剂:显微镜用中性树胶、伊红、二甲苯、苏木精、52-54℃蜡块、56-58℃蜡块等市售。

试药:复方沙棘颗粒剂，由内蒙古医科大学蒙药研究所制备，临用时粉碎研细，加5%CMC-Na水溶液制成不同浓度的混悬液;盐酸氨溴索分散片，市售。临用时粉碎研细，加5%CMC-Na水溶液制成，试验用时作为阳性对照药剂。

2 方法

2.1 造模:取昆明系小白鼠60只，体重20±2g，雌雄各半，随机分为6组，分别为对照组、被试剂高、中、低剂量组、模型组和阳性对照组，每组10只。造模实验除对照组外，小鼠置笼中，罩钟罩，从笼底部烟熏，保证烟雾经过钟罩自钟罩顶部排出，1 次/d，每次 0.5h，连续 30d。

2.2 实验方法

2.2.1 病理标本的制备:造模结束次日起对照组和模型组灌胃给同体积量空白敷型剂，被试剂高、中、低剂量组分别灌胃不同浓度的复方沙棘颗粒剂混悬液，阳性对照组灌胃盐酸氨溴索分散片混悬液，灌胃量均为0.2ml/10g体重，1次/d，连续14d。末次给药1h后麻醉下剥离小鼠气管，切取气管，中性甲醛固定液固定，用清水冲洗，再用70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇依次脱水，二甲苯脱色，依次浸入52～54℃蜡液、56～58℃蜡液，包埋。切片苏木精-伊红染色，光镜观察组织形态学变化［1］，并以出现粘膜上皮纤毛倒状、变性，杯状细胞增生，固有层毛细血管充血，淋巴细胞浸润，管壁平滑肌束断裂、萎缩，粘膜下层明显增厚等6个指标变化观察评分，每项得1分，比较评价模型病变程度。

2.2.2 肺泡灌洗液(BALF)细胞计数:根据文献［2-5］同 2.

2.1法取小鼠实验，末次给药1h后以颈椎脱臼致死，切开颈部暴露气管，置管，以生理盐水0.4mL灌洗，重复3次，共约回收 1mL。将 BALF 离心(1000r/min，10min，4℃)，取上清冻存于-80℃。生理盐水重悬沉淀至1mL，用血球计数板计数白细胞总数，用瑞氏-吉姆萨染色法进行白细胞分类计数［2］。

3 结果

3.1 模型评价:对照组鼠无异常，活动自如，体毛光滑，体重增长正常。模型组鼠相继出现精神萎靡，弓背卷缩，体毛枯疏，体重增长缓慢，从第3周基本停止增长。两组小鼠均未见死亡(见表1)。镜下观察:对照组鼠气管结构基本正常，腔内洁净，黏膜完整，上皮细胞饱满，纤毛无异常(见图1);模型组鼠气管黏膜上皮细胞严重受损，气管黏膜上皮纤毛倒伏，部分上皮细胞坏死脱落，杯状细胞增生，固有层毛细血管充血，淋巴细胞浸润，管壁平滑肌束断裂，萎缩，黏膜下层明显增厚，评分结果(见表2、图2)。实验表明，小鼠熏烟致气管炎模型成功。

表1 体重记录(平均值，g)

表2 造模评分结果

3.2 病理形态学评价:阳性对照组:气管黏膜基本完整，纤毛明显变短、稀疏数量减少。固有层伴见毛细血管充血，水肿及淋巴细胞浸润(见图3)。被试剂高剂量组:气管黏膜上皮完整，无明显变性坏死，伴见纤维组织增生及少量淋巴细胞浸润(见图4)。被试剂中剂量组:部分气管黏膜上皮坏死脱落。黏膜下层纤维组织增生，伴有以淋巴细胞为主的慢性炎细胞浸润，局部气管黏膜增厚(见图5)。被试剂低剂量组:气管管腔扩张，形状不规则。部分上皮坏死脱落暴露基底膜。黏膜下可见毛细血管充血，水肿，纤维组织增生及淋巴细胞浸润(见图6)。结果显示给药组病理评分与模型组相比明显降低(P＜0.01)，病理变化已于空白组有显著差异(P ＜0.01)，(见表3)。

表3 病理病变评分结果

3.3 肺泡灌洗液分析结果:长期熏烟使小鼠肺泡灌洗液中细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞均明显增高。被试药对慢性支气管炎小鼠模型用药干预后，上述值明显下降(P ＜0.05)，(见表 4)。

表4 药物干预对小鼠肺泡灌洗液中细胞的影像(x±s，n=10)

4 讨论

慢性气管-支气管炎为我国北方地区常见的疾病，具有病因复杂、临床症状多样、病程迁延漫长等特点。蒙药复方沙棘颗粒剂在蒙医临床上使用多年，具有明确的止咳、化痰和平喘作用，主要用于治疗急慢性气管、支气管炎。对改善急，慢性支气管炎的单项症状咳、痰、喘有较好的作用。经临床验证对于急性气管-支气管炎疗效显著。本研究以烟熏法建立小鼠慢性气管-支气管炎模型，用蒙药复方沙棘颗粒剂进行干预，观察了小鼠气管病理学研究和肺泡灌洗液(BALF)等的特征。与模型组相比复方沙棘颗粒剂各剂量组的炎性特征明显减轻，进一步证实了蒙药复方沙棘颗粒剂的疗效。本结果可以在更深的层次揭示本药的治疗原理，有效地指导临床用药和蒙药新产品研创。

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