银杏达莫注射液对急性肺损伤的实验及分析

肖望+廖秀清+刘燕君+谢晓玲

[摘要] 目的 探讨银杏达莫注射液对急性肺损伤的保护作用。方法 健康家兔24只，采用完全随机分为3组：对照组、模型组和实验组，每组8只。观察三组的MDA、SOD、肺干湿比、IL-10及TNF-a变化。结果 三组MDA比较，差异皆有统计学意义（P<0.05）；模型组SOD与其他两组比较，差异皆有统计学意义（P<0.05）。实验组与对照组SOD比较，差异无统计学意义（P>0.05）。三组肺干湿比比较，差异有统计学意义（P<0.05）。三组IL-10比较，差异无统计学意义（P>0.05）；三组TNF-a比较，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 银杏达莫注射液对急性肺损伤具有明显的保护作用。

[关键词] 银杏达莫注射液；急性肺损伤；保护作用

[中图分类号] R541.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）06-27-03

急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是严重感染、创伤、休克等打击后常见的外科危急并发症，死亡率极高，目前仍无十分有效的治疗方法和药物[1-2]。本项目通过建立急性肺损伤动物模型，观察银杏达莫对组织形态学和生物学的影响，同时研究心率、呼吸、频率、血气分析和相关细胞因子表达的动态变化[3]，探讨银杏达莫注射液对急性肺损伤的保护作用和可能机制，以期为ALI/ARDS的临床治疗提供一个可能的新途径，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

健康家兔24只，体重2.5～3.5kg，雌雄各半。

采用完全随机分3组：对照组、模型组和实验组，每组8只。动物许可证号：SYXK2006007。三组动物的体重、性别比等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 动物造模

乙醚吸入麻醉至家兔躯体变软，四肢活动减少，家兔头颈部后仰并以血管钳向外轻拉家兔舌头使口咽部充分暴露，以耳镜快速置入家兔口腔并暴露其声门，当声门打开时迅速以注射软管滴入LPS溶液（2mg/kg），竖立并左右晃动家兔身体以使药物在两肺内分布均匀每天1次，连续2d。

1.3 方法

术前禁食12h，所有动物经耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠（30mg/kg），麻醉成功后，行颈动脉置管，连接多导生理监测仪，连续记录心率、呼吸频率等变化。实验组与模型组：耳缘静脉缓慢推注油酸（0.1mL/kg），10min后静脉注射生理盐水30mL。对照组：耳缘静脉注射生理盐水30mL。

1.4 观察指标

记录各组动物在伤前和伤后1、2、3、4h的心率、呼吸频率，并通过动脉插管抽取血标本，测定各时点血气分析值和血清TNF-a、IL-10。4h后处死动物，取左肺下叶背段1cm×1cm×1cm大小肺组织，用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察其组织形态学变化。按Naokiis介绍的方法肺损伤进行评分：把肺损伤程度分为5分：0=无损伤，1=轻度损伤，2=中度损伤，3=重度损伤，4=极重度损伤。在左下肺相同的部位取1g大小的肺组织做出匀浆液，用硫代巴比妥酸法测定丙二醛含量和超氧化物歧化酶的活性；剩余肺组织称重后置80℃烤箱，烘烤72h至恒重，计算肺湿/干（W/D）比。肺干湿比（W/D）=湿重/干重；肺系数=100×肺湿重/体重[4]。

1.5 统计学处理

应用SPSS15.0统计软件，方差齐时两两比较采用LSD联合SNK法；计量资料用（）表示，采用t检验，计数资料用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组上清液中MDA检测及SOD活性结果比较

三组MDA比较，差异皆有统计学意义（P<0.05）；模型组SOD与其他两组比较，差异皆有统计学意义（P<0.05）。实验组与对照组SOD比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 三组肺干湿比比较

对照组肺干湿比为4.35±0.21，模型组为5.26±0.55，实验组为4.97±0.51，三组肺干湿比比较，差异有统计学意义（F=5.167，P<0.05）。

2.3 三组血清TNF-a、IL-10比较

三组IL-10比较，差异无统计学意义（P>0.05）；三组TNF-a比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.4 三组HE染色图片

对照组：未见明显改变，肺泡结构多数保持完整，肺泡壁无水肿，肺间质少见炎性细胞浸润。模型组：肺间质内大量炎性细胞浸润，肺泡腔内少量炎性细胞，肺间质水肿，肺泡间隔增宽，肺泡腔结构破坏、融合，肺泡腔及肺间质内炎性出血。实验组：肺间质内大量炎性细胞浸润，肺泡腔内少量炎性细胞，肺间质水肿，肺泡间隔增宽，肺泡腔结构破坏、融合，肺泡腔及肺间质内炎性出血。与模型组相差不多。见图1。

A 正常对照组肺组织

B 油酸损伤组肺组织

C 实验组肺组织

3 讨论

急性肺损伤（ALI）是由多种肺内外致病因素引起的，以急性呼吸困难为主要临床表现的全身炎症反应综合征，其发病机制非常复杂，若不能得到及时有效的治疗，往往会发展成急性呼吸窘迫综合症（ARDS），甚至危及患者生命。至今ALI确切的发病机制尚未完全阐明，目前认为除有些致病因素对肺泡膜的直接损伤外，更重要的是多种效应细胞如中性粒细胞、巨唾细胞、血管内皮细胞等在肺内聚集、激活导致氧化应激及TNF-a、IL-10等促炎介质增加，使肺内抗炎介质增加，促发过度炎症反应，是ALI发生发展的关键环节[5-6]。

银杏达莫注射液含有双嘧达莫和银杏叶提取制剂，银杏叶提取制剂有效成分为银杏黄酮和银杏内酯，是具有多种药理作用的血管扩张剂。具有抑制血小板活化因子，防止血栓形成，扩张毛细血管、增加组织血流量、抑制脂质过氧化，抑制OFR对组织的损伤，降低血中胆固醇及改善微循环等作用。而银杏内酯是目前被认为最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂[7]。其可清除氧自由基，防止自由基对神经细胞的损伤，抑制自由基诱导的神经细胞凋亡；双嘧达莫可抑制血小板的第一相聚集和第二相聚集[8]，因而具有抗血栓形成作用，与银杏内酯联合应用能协同改善脑组织供血流量。而银杏黄酮苷是氧自由基的捕捉剂和清除剂，参与清除超氧阴离子，抑制脂质氧化反应，从而起到保护脑细胞的作用[9-10]。endprint

MDA是OFR与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，测定MDA可反映OFR水平从而反映内皮细胞损伤程度。SOD是机体内抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂质过氧化反应受抑[11-12]。机体清除OFR的能力可以间接以SOD活性来衡量，SOD能清除OFR，从而抵抗细胞的氧化应激损伤。本研究中，三组MDA比较，差异皆有统计学意义；模型组SOD与其他两组比较，差异皆有统计学意义。实验组与对照组SOD比较，差异无统计学意义。说明银杏达莫具有保护损伤的肺组织得功能。IL-10是体内最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比较复杂，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根据各研究实验条件不同结果也各异。在本课题实验条件下，IL-10含量在各组间并没有统计学差异；三组TNF-a比较，差异有统计学意义。

综上所述，银杏达莫能够抑制血浆TNF-a含量升高，减轻PMN浸润，清除氧自由基，减轻肺组织水肿程度而对ALI起到了有效的保护作用。

[参考文献]

[1] 曹慧玲，吕士杰，姜艳霞，等.急性肺损伤家兔氧自由基变化及不同中药治疗作用的对比[J].中国中西医结合急救杂志，2006，13（3）：146-149.

[2] 马希刚，张珍祥，徐永建.火把花根片对急性肺损伤的保护作用研究[J].中国中西医结合急救杂志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，刘功检.内毒素急性肺损伤与中性粒细胞凋亡研究现状[J].中国医药导报，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟宪丽，王平，等.黄零水提取物对急性肺损伤家兔的保护作用及其与胆碱能抗炎通路的相关性研究[J].中草药，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黄芩和黄连对急性肺损伤家兔的保护作用及其与胆碱能抗炎通路的相关性实验研究[D].成都：成都中医药大学，2012.

[6] 徐云洁，朱蕾.川芎嗪对急性肺损伤的保护作用[J].中国临床医学，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矫春晓，李敬田，等.银杏达莫在内皮细胞氧化损伤中保护作用的实验研究[J].中国医药指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹丽英.参附注射液对大蘭内毒素性肺损伤的保护作用[J].实用医学杂志，2010，26（6）：942-944.

[11] 谢丹红，盛志新.银杏叶的临床应用[J].中国医院药学杂志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 冯建利，姚博，杜怡峰.银杏达莫对急性脑梗死病人血浆氧化修饰低密度脂蛋白水平的影响[J].中国新药与临床杂志，2007，26（2）：125-128.

（收稿日期：2014-01-14）endprint

MDA是OFR与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，测定MDA可反映OFR水平从而反映内皮细胞损伤程度。SOD是机体内抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂质过氧化反应受抑[11-12]。机体清除OFR的能力可以间接以SOD活性来衡量，SOD能清除OFR，从而抵抗细胞的氧化应激损伤。本研究中，三组MDA比较，差异皆有统计学意义；模型组SOD与其他两组比较，差异皆有统计学意义。实验组与对照组SOD比较，差异无统计学意义。说明银杏达莫具有保护损伤的肺组织得功能。IL-10是体内最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比较复杂，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根据各研究实验条件不同结果也各异。在本课题实验条件下，IL-10含量在各组间并没有统计学差异；三组TNF-a比较，差异有统计学意义。

综上所述，银杏达莫能够抑制血浆TNF-a含量升高，减轻PMN浸润，清除氧自由基，减轻肺组织水肿程度而对ALI起到了有效的保护作用。

[参考文献]

[1] 曹慧玲，吕士杰，姜艳霞，等.急性肺损伤家兔氧自由基变化及不同中药治疗作用的对比[J].中国中西医结合急救杂志，2006，13（3）：146-149.

[2] 马希刚，张珍祥，徐永建.火把花根片对急性肺损伤的保护作用研究[J].中国中西医结合急救杂志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，刘功检.内毒素急性肺损伤与中性粒细胞凋亡研究现状[J].中国医药导报，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟宪丽，王平，等.黄零水提取物对急性肺损伤家兔的保护作用及其与胆碱能抗炎通路的相关性研究[J].中草药，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黄芩和黄连对急性肺损伤家兔的保护作用及其与胆碱能抗炎通路的相关性实验研究[D].成都：成都中医药大学，2012.

[6] 徐云洁，朱蕾.川芎嗪对急性肺损伤的保护作用[J].中国临床医学，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矫春晓，李敬田，等.银杏达莫在内皮细胞氧化损伤中保护作用的实验研究[J].中国医药指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹丽英.参附注射液对大蘭内毒素性肺损伤的保护作用[J].实用医学杂志，2010，26（6）：942-944.

[11] 谢丹红，盛志新.银杏叶的临床应用[J].中国医院药学杂志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 冯建利，姚博，杜怡峰.银杏达莫对急性脑梗死病人血浆氧化修饰低密度脂蛋白水平的影响[J].中国新药与临床杂志，2007，26（2）：125-128.

（收稿日期：2014-01-14）endprint

MDA是OFR与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的产物，测定MDA可反映OFR水平从而反映内皮细胞损伤程度。SOD是机体内抗氧化酶之一，主要清除O2-，使脂质过氧化反应受抑[11-12]。机体清除OFR的能力可以间接以SOD活性来衡量，SOD能清除OFR，从而抵抗细胞的氧化应激损伤。本研究中，三组MDA比较，差异皆有统计学意义；模型组SOD与其他两组比较，差异皆有统计学意义。实验组与对照组SOD比较，差异无统计学意义。说明银杏达莫具有保护损伤的肺组织得功能。IL-10是体内最重要的抗炎因子。但是，由于其作用比较复杂，因此在ALI中的作用研究的不多，并且根据各研究实验条件不同结果也各异。在本课题实验条件下，IL-10含量在各组间并没有统计学差异；三组TNF-a比较，差异有统计学意义。

综上所述，银杏达莫能够抑制血浆TNF-a含量升高，减轻PMN浸润，清除氧自由基，减轻肺组织水肿程度而对ALI起到了有效的保护作用。

[参考文献]

[1] 曹慧玲，吕士杰，姜艳霞，等.急性肺损伤家兔氧自由基变化及不同中药治疗作用的对比[J].中国中西医结合急救杂志，2006，13（3）：146-149.

[2] 马希刚，张珍祥，徐永建.火把花根片对急性肺损伤的保护作用研究[J].中国中西医结合急救杂志，2007，14 （3）：176-180.

[3] 朱珊珊，刘功检.内毒素急性肺损伤与中性粒细胞凋亡研究现状[J].中国医药导报，2012，9（4）：11-13.

[4] 崔蓉，孟宪丽，王平，等.黄零水提取物对急性肺损伤家兔的保护作用及其与胆碱能抗炎通路的相关性研究[J].中草药，2012，43（2）：321-326.

[5] 崔蓉.黄芩和黄连对急性肺损伤家兔的保护作用及其与胆碱能抗炎通路的相关性实验研究[D].成都：成都中医药大学，2012.

[6] 徐云洁，朱蕾.川芎嗪对急性肺损伤的保护作用[J].中国临床医学，2006，13（6）：916-917.

[7] GR Sajitha，Regi Jose，A Andrews，et al.Garlic Oil and Vitamin E Prevent the Adverse Effects of Lead Acetate and Ethanol Separately as well as in Combination in the Drinking Water of Rats[J].Indian J Clin Biochem，2010，25（3）：280-288.

[8] MM Ghaisas，YS Ahire，PR Dandawate，et al.Effects of Combination of Thiazolidinediones with Melatonin in Dexamethasone-induced Insulin Resistance in Mice[J].Indian Pharm Sci，2011，73（6）：601-607.

[9] 崔磊，矫春晓，李敬田，等.银杏达莫在内皮细胞氧化损伤中保护作用的实验研究[J].中国医药指南，2010，8（26）：11-13.

[10] 林利，詹丽英.参附注射液对大蘭内毒素性肺损伤的保护作用[J].实用医学杂志，2010，26（6）：942-944.

[11] 谢丹红，盛志新.银杏叶的临床应用[J].中国医院药学杂志，2007，27（8）：1111-1112.

[12] 冯建利，姚博，杜怡峰.银杏达莫对急性脑梗死病人血浆氧化修饰低密度脂蛋白水平的影响[J].中国新药与临床杂志，2007，26（2）：125-128.

（收稿日期：2014-01-14）endprint