不同食品中磷酸盐含量测定方法的讨论

杨毅华，杨笑

（宁波市北仑区食品安全检测中心，浙江宁波315800）

磷作为一种重要的元素，广泛存在于各类食品中。当人体摄入过多或缺乏磷时，均会对健康产生不同程度的影响。短时间内过多摄入磷会造成腹泻腹痛；而当人体长时间缺乏磷又会导致机体的钙磷不平衡，带来骨骼和牙齿的发育问题[1-3]。因此，对食品中磷含量的测定显得十分重要。

传统的磷酸盐测定前处理方法主要有干法消化和湿法消化两种。干法消化的原理是利用高温破坏样品中的大分子物质，其缺点是耗时长、容易引起易挥发元素的损失；湿法消化则是利用硫酸、硝酸、高氯酸等强氧化剂在加热条件下分解有机物，其缺点是容易引起污染，在消化过程中产生的大量酸雾既影响操作者的健康又危害环境。

本文就磷酸盐测定的前处理方法进行讨论，确定不同种检测样品使用不同种便捷有效的前处理方法，以达到快速准确检测磷酸盐含量的目的。

试样经前处理后，可以运用传统的分光光度法测定，也可以利用离子色谱法测定。本文也将同时对其检测结果进行对比。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

UV-2550紫外分光光度仪；3 cm玻璃比色皿；ICS-2000型离子色谱仪；AS40自动进样器；Chromeleon色谱工作站；IonPacAS19-HC分离柱；IonPacAS19-HC保护柱；0.25 μm液体样品过滤器。

硫酸（化学纯）；高氯酸（化学纯）；硝酸（分析纯）；过氧化氢（化学纯）；磷酸二氢钾（分析纯）；盐酸溶液（1+1）（分析纯）；钼酸铵溶液（50 g/L）；对苯二酚溶液（5 g/L）；亚硫酸钠溶液（200 g/L）。

磷酸盐标准储备液：精确称取在105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾0.4394g，置于1000mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，此溶液浓度为（以磷计）100 μg/mL；磷酸盐标准使用液：临用时将上述标准储备液稀释至（以磷计）10 μg/mL。

生物成分分析标准物质-鸡肉GBW10018（GSB-9），定值（以磷计）：0.96±0.08 g/100 g；生物成分分析标准物质-圆白菜GBW10014（GSB-5），定值（以磷计）：0.46±0.03 g/100 g。

分析过程中所有实验用水均为纯化去离子水（电阻率≥18.2 MΩ·cm）。

1.2 前处理方法

1.2.1 超声萃取法

在100 mL具塞比色管中准确称取1.000 g均匀粉碎样品，加水50 mL，放入超声波清洗机超声萃取30 min，取出后加入三氟乙酸2.0 mL，定容后摇匀，在0℃～4℃放置2h，取出后用定性滤纸过滤，再过0.25μm液体样品过滤器，过滤液备用。如果试样浑浊，可以再经过C18小柱分离[4]。

1.2.2 微波消解法

微波消解条件见表1。

表1 微波消解条件Table 1 Microwave digestion conditions

1.3 测定方法

1.3.1 分光光度计法

1.3.1.1 标准曲线的绘制

吸取磷标准使用液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0、20.0 mL（相当于含磷量 10、20、40、60、80、100、150、200 μg），分别置于25 mL具塞比色管中，加入2 mL钼酸铵溶液摇匀，静置几秒，再加入1 mL亚硫酸钠溶液、1 mL对苯二酚溶液，摇匀，静置30 min后，测定各标准溶液吸光值，同时绘制标准曲线。

1.3.1.2 样品测定

同时准确吸取试样测定液1.0 mL于25 mL具塞比色管中，依照标准溶液测定方法测定吸光值，并且依据回归方程计算含量。

1.3.2 离子色谱法

1.3.2.1 色谱条件

色谱柱：IonPacAS19-HC分离柱、IonPacAS19-HC保护柱；淋洗液：KOH水溶液；淋洗液浓度：38 mmol/L，等度淋洗；淋洗液流速：1.0 mL/min；抑制器抑制电流：95 mA；定量环：250 μL。

1.3.2.2 标准物质谱图

标准物质谱图见图1。

图1 标准物质谱图Fig.1 Standard material spectra

2 结果与分析

2.1 前处理方法的选择

不同食品分别用超声萃取法和微波消解法处理，然后用分光光度法测定，结果如表2。

从表2可以看出：对于肉制品而言，前处理方法可选用超声提取-加入抗干扰剂（三氟乙酸）的方法，经过该方法处理后的试样，具有良好的检测效果，大大减少了试验时间。

表2 前处理方法的比较Table 2 Pretreatment method of comparison

对于植物制品来说，其本身蛋白质、脂肪等大分子类的物质含量较少，用抗干扰剂（三氟乙酸）不能消除干扰；改用微波消解前处理方法后，可以起到破坏植物中纤维素的作用，达到净化的目的。

2.2 检测方法的选择

处理后的样品分别用分光光度法和离子色谱法检测，结果如表3。

表3 检测方法的比较Table 3 Tast method of comparison

表3结果证明，对于植物及动物样品，前处理后用传统的分光光度法进行测定，效果都比较理想。不过对于肉制品而言，处理后的样品用离子色谱法检测，既简便易行，灵敏度也比较高，可以替代原来的分光光度计法，以节约时间，提高效率。而对蔬菜产品来说，用离子色谱在同样的条件下磷酸盐出峰处干扰较大，使用分光光度法检测更为理想。

2.3 分光光度计法

将钼酸铵溶液浓度适当增加，以至过量反应，可以相应提高检测灵敏度。表4为使用不同钼酸铵溶液时同样浓度标准比色管的吸光值。本文采用的钼酸铵浓度为50 g/L。

表4 不同浓度钼酸铵对吸光值的影响（选用含磷量为60 μg/mL的标准比色管做对比）Table 4 Different concentrations of ammonium molybdate's influence on the absorbance value（For example：60 μg/mL phosphorus content）

3 结论

由于食品中磷以焦磷酸盐、偏磷酸盐、正磷酸盐等多聚体形式存在[5]，需要全部转化为正磷酸盐，再用分光光度计法或者离子法测定。实验证明，对肉制品而言，超声提取后加入抗干扰剂用离子色谱法或者分光光度法进行检测，效果较好；而对蔬菜产品而言，则利用微波消解后用分光光度法进行检测更为适宜。

[1]张明,刘勇,吕青,等,多磷酸盐在水产加工中的使用安全性[J].渔业现代化,2007(2):49,50,53

[2]程春梅.磷酸盐在肉类加工中的应用[J].肉类工业,2007(11):33-34

[3]朱晓龙.磷酸盐在肉类加工中的应用及检测[J].肉类加工,2003(7):36-41

[4]许明迪,杨娟芬,任飞.免试剂离子色谱法测定肉制品中的多聚磷酸盐[J].中国卫生检验杂志,2008,18(12):2553-2554

[5]胡炜,邓光辉,黄科林.三聚磷酸盐中不同形态磷酸盐的分离与测定[J].化学试剂,2009,31(6):435-437,440